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国家高技术研究发展计划(2001AA214011): 作品数：15 被引量：92H指数：6; 相关作者：张杰宋福平黄大昉刘天明喻子牛更多>>; 相关机构：中国农业科学院植物保护研究所中国农业科学院生物技术研究所山东轻工业学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

苏云金芽孢杆菌菌株B-Pr-88的生物学特性被引量：2: 2004年; 就自行分离的、对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88的生物学特性进行了系统研究。B-Pr-88可形成菱形、球形和不规则形等多种形态的晶体,主要由130kDa和60kDa两种蛋白组成;酯酶型与标准菌株蜡螟亚种和库斯塔克亚种一致,同属于galleriae型;10项生理生化反应结果表明,B-Pr-88与标准菌株蜡螟亚种反应一致;B-Pr-88菌株至少含有3种大小不同的质粒,经PCR-RFLP鉴定该菌株至少包括cry2Ab、cry9Ba和多种cry1(包括crylCb、cry1Db、cry1Fb和cry1Gb)等6种不同的杀虫晶体蛋白基因。; 李长友张杰宋福平李国勋黄大昉; 关键词：生物学特性杀虫晶体蛋白 CRY基因微生物杀虫剂

苏云金芽孢杆菌vip3A基因的检测及保守性分析被引量：10: 2003年; Vip3A蛋白是苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白。用PCR方法从 114个Bt菌株和 4 1个Bt标准菌株中筛选到 39株即约 2 5 %的菌株含有vip3A基因。利用所制备的Vip3A蛋白的多克隆抗体对以上含有vip3A基因的Bt菌株进行Western印迹分析 ,发现多数PCR反应为阳性的菌株都产生 89kD大小的蛋白 ,其中有 4株没有Vip3A蛋白的表达。从以上菌株中挑选 2个对夜蛾科害虫具有较高和较低毒力的菌株 ,即S10 1和 6 11,并分别进行vip3A基因的克隆和测序 ,再与GenBank上所登录的其它 6个全长vip3A基因和 2个已报道的但未登录GenBank的vip3A基因进行核苷酸和氨基酸序列比较 ,结果表明 ,vip3A是一个极其保守的基因。将以上所克隆的 2个vip3A基因即vip3A S10 1和vip3A 6 11分别插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP S10 1和pOTP 6 11,转化到大肠杆菌M15 ,经 1mmol LIPTG诱导后均表达 89kD大小的Vip3A蛋白。蛋白可溶性试验表明 ,Vip3A S10 1和Vip3A 6 11分别有 4 8%和 35 %的蛋白是可溶的。将Vip3A S10 1和Vip3A 6 11蛋白和已报道的Vip3A S184蛋白对初孵斜纹夜蛾 (Spodopteralitura)幼虫进行生物测定 ,结果表明 ,3个Vip3A蛋白对斜纹夜蛾幼虫毒力没有显著性差异 ,这说明了Vip3A个别氨基酸的?; 陈建武唐丽霞宋少云袁美妗庞义; 关键词：苏云金芽孢杆菌 VIP3A基因保守性克隆

苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响被引量：5: 2003年; 苏云金杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C 半端缺少了一段含 4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定 ,报道苏云金杆菌辅助蛋白P2 0帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT310 1构建 3个表达质粒 ,即pT1B、pP1B和pDP1B ,3个质粒都含有cry1Ab基因 ,不同在于pT1B没有p2 0基因 ,pP1B含有p2 0全基因 ,而pDP1B不仅含有p2 0全基因 ,且在p2 0基因前插入cry1A(c)启动子。分别将这 3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中 ,获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Westernblot表明cry1Ab基因在这 3株菌中均表达了 130kD的蛋白 ,部分降解为大约 6 0kD的蛋白。蛋白定量分析显示 ,3株菌 130kD蛋白量的比为 1∶1.4∶1 5 ,降解后的 6 0kD蛋白量的比为 1∶1.1∶1.6 ,Cry1Ab蛋白总量的比为 1∶1∶2∶1 6。镜检发现 ,Cry1Ab在 3株菌中都形成典型的菱形晶体 ,其晶体大小为T1B; 汤慕瑾袁美妗陈建武师永霞曾少灵余健秀庞义; 关键词：苏云金杆菌辅助蛋白杀虫晶体蛋白 CRYLAB 生物杀虫剂

甘肃产地葡萄酒的酿造研究被引量：6: 2008年; 用分离的3株天然葡萄酒酵母菌株GS13F、GS38A、HYHP3C和商品酵母RC212组合发酵生产原产地干红葡萄酒,葡萄原料赤霞珠和蛇龙珠采自武威。酒样理化指标及香气成分的GC-MS分析结果表明,以天然酵母菌株发酵的酒样,理化指标均符合葡萄酒国标要求,菌株GS38A发酵酒的酒度(7.2%)与RC212(8.0%)接近,而菌株GS13F的发酵香种类多、比例协调,主要有乙酸异戊酯(27.54%)、乙酸苯乙酯(15.67%)和2-苯乙醇(9.85%)。菌株配伍发酵后GS13F产香特性与GS38A、RC212高酒度特性优势互补,且发酵香种类和含量均增加,酒体骨架更为丰厚协调,可用于甘肃产地葡萄酒的生产。; 郭志刚刘天明赵长增; 关键词：配伍酿造

不同产区葡萄及葡萄酒香气成分比较研究被引量：21: 2008年; 以采自甘肃武威和山东烟台的赤霞珠葡萄为原料,用2株分离自甘肃的天然葡萄酒酵母菌株GS13F和GS38A发酵酿造干红葡萄酒,分别对葡萄汁和酒样进行香气成分的GC-MS分析。结果表明,2产区葡萄的香气成分均检出8种,但其种类和含量有显著差异。采自武威的主要是邻苯二甲酸二甲酯(68.48%)和邻苯二甲酸二乙酯(10.05%);而采自烟台的主要是邻苯二甲酸二甲酯(46.62%)和2苯-乙醇(7.69%)。; 郭志刚刘天明赵长增张敏芳王慧; 关键词：赤霞珠酵母菌株葡萄酒香气成分气相色谱-质谱分析

青海东部土壤中酵母物种多样性研究被引量：6: 2009年; 从青海的互助、民和、门源等10个州县收集土样分离得到98株酵母菌,利用26S rDNA D1/D2区域序列分析并结合形态学和生理生化特性对这些菌株进行了分类学研究,探讨了青海东部土壤中酵母的物种多样性及其分布。共鉴定出10属13种(其中有两个疑似新种),其中Ga-lactomyces geotrichum和Rhodotorula mucilaginosa为该地的优势种。; 徐美鑫刘天明相茂功刘波尹雪利曾阳; 关键词：酵母菌 RDNA 物种多样性

利用S-层蛋白在苏云金芽胞杆菌细胞表面展示多聚组氨酸肽(简报)被引量：5: 2003年; S层(Slayer)是由单一的蛋白或糖蛋白组成的薄层晶状结构，它广泛存在于古细菌和真细菌细胞的最外表面，可包裹整个细胞。S层在结构化学、形态学、遗传学以及物理化学等方面具有独特的性质，使之在生物技术、分子纳米技术和仿生学等领域蕴藏着广泛的应用潜力。近年来。; 王莉孙明喻子牛; 关键词：S-层蛋白苏云金芽胞杆菌细胞

PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究被引量：11: 2003年; Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。; 陈中义吴限张杰宋福平管宇黄大昉; 关键词：苏云金芽孢杆菌微生物杀虫剂 DNA文库 CRY基因 PCR-RFLP 基因分离

对鳞翅目害虫有活性的cry1C基因的克隆和表达被引量：7: 2003年; 在鉴定苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)Btc001菌株cry基因型的基础上,构建了Btc001菌株质粒DNA Hind Ⅲ片段的文库,并利用聚合酶链式反应-限制性酶切片段多态性(PCR-RFLP)方法筛选出含有cry1Cb全长基因的13.5kb大片段,酶切分析得到该片段的物理图谱,BamHI和EcoRI酶切完成了6.5kb含全长基因的亚克隆,并对这条6.5kb片段亚克隆、测序,序列在国际核酸序列数据库(GenBank)登记(AY007686),并由Bt杀虫晶体蛋白基因国际命名委员会命名为cry1Cb2基因。根据序列设计了一对用于扩增全长基因的引物S5B1CB和S3B1CB,扩增产物插入表达载体pET-21b中,诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达。表达产物对小菜蛾(Plutella xylostella)表现出较高活性,LC_(50)达到7.97μg/ml。; 宋福平张杰韩岚岚高继国黄大昉; 关键词：苏云金芽孢杆菌小菜蛾鳞翅目克隆

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1Ab16的克隆及表达被引量：1: 2003年; 通过对已知cry1类基因以及已发表的cry1Ab的序列进行分析 ,分别设计了引物P1、P2、P3和P4,首次从无晶体的芽胞杆菌AC 1 1中扩增到一个苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白(Insecticidalcrystalprotein ,ICP)cry1Ab类基因。测序结果显示该基因与已知的cry1Ab1基因有 8个核苷酸不同 ,编码的蛋白有 7个氨基酸差异。此基因已登录GenBank ,并命名为新亚型基因cry1Ab1 6(Ac .NO .AF375 60 8)。Southern杂交结果进一步证实该基因存在于菌体的质粒上。将cry1Ab1 6基因克隆到Escherichiacoli表达载体pQE30上并转化E .coliM1 5。Western印迹分析表明 ,E .coliM1 5表达了 1 30kD的Cry1Ab1 6蛋白 ,但此蛋白不稳定 ,大部分降解成65kD的蛋白。将表达Cry1Ab1 6蛋白的大肠杆菌用涂布法对三龄小菜蛾 (Plutellaxylostella)毒力测定 ,其LC50 为 2 5 8.3mg L ;对其他夜蛾科害虫的生长发育也有明显的抑制作用。; 汤慕瑾谭乐余健秀袁美妗庞义; 关键词：苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因克隆微生物杀虫剂

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