广东省自然科学基金(5001771)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 相关作者：杜军何玉文谢白露刘鹏廖仕林更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第二医院暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 基因治疗微链载体的构建及表达分析被引量：2
- 2008年
- 基因载体的转染、表达效率低和存在安全问题是基因治疗的难点。由于传统病毒及质粒载体含有大量外源基因,其表达有可能引发较严重免疫副反应。本课题旨在新的设计思路上开发高效安全基因治疗载体。微链载体利用设计好的Cap序列封闭基因表达框两端,起到防止细胞内核酸外切酶降解的作用。从pEGFP-N3质粒中分离纯化得到GFP基因作为微链载体的报告基因。将微链载体与原质粒载体(pEGFP-N3质粒)分别转染入真核细胞,利用荧光显微镜和流式细胞仪检测并比较其转染效率。结果显示微链载体在293、CNE2、3T3、B95-8等真核细胞中的转染、表达效率较高,并具有较小的细胞毒性。初步证实了微链载体在真核细胞中转染、表达效率及安全性等方面具有一定的优越性。
- 王红胜李小青何玉文谢白露唐雯莹杜军
- 关键词：GFP基因治疗
- 人吲哚胺2,3-双加氧酶多克隆抗体的制备被引量：1
- 2007年
- 背景与目的:吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是一种哺乳动物细胞质中的血红素蛋白,是催化色氨酸沿犬尿氨酸途径代谢的限速酶。它的表达不仅能抑制病原微生物的生长,还能抑制T细胞的应答,从而介导肿瘤免疫耐受。本研究的目的是表达和纯化His-hIDO融合蛋白,制备兔抗人IDO多克隆抗体,并用此抗体检测IDO在肿瘤细胞中的表达。方法:将编码人IDO全长cDNA克隆入pET30a(+),测序鉴定表达载体pET30a(+)-hIDO,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达目的蛋白His-hIDO;用纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,获得兔抗人IDO多克隆抗体;用Western blot检测该多克隆抗体与重组蛋白His-hIDO的反应性,并用该抗体分析表皮癌细胞A431和肝癌细胞HepG2经IFN-γ诱导前后的IDO表达情况。结果:His-hIDO融合蛋白可与抗His多克隆抗体特异性结合;兔抗人IDO多克隆抗体的效价高,特异性好,能检测肿瘤细胞经IFN-γ诱导后的IDO的表达。结论:兔抗人IDO多克隆抗体能够有效地识别体外表达的IDO蛋白,为研究IDO在肿瘤免疫耐受中的作用提供有力工具。
- 谢白露刘鹏欧雪玲杜军
- 关键词：吲哚胺2,3-双加氧酶多克隆抗体免疫印迹
- 啮齿类小鼠γ-干扰素原核表达、纯化及功能鉴定
- 2008年
- 目的:构建γ-干扰素的高效原核表达载体,进行γ-干扰素表达、纯化和鉴定,并探索优化啮齿类γ-干扰素的制备工艺。方法:用RT-PCR技术,从ConA活化的小鼠脾细胞中扩增出mIFN-γcDNA,与原核表达载体pET30a(+)重组,表达和纯化重组蛋白His6-mIFN-γ,并用Western Blot检测该重组蛋白的生物学活性。结果:构建了啮齿类γ-干扰素的高效原核表达载体,并实现了γ-干扰素的可溶性表达,且验证该γ-干扰素具有生物学活性。结论:成功优化了生产干扰素的工艺,为国内外进行γ-干扰素研究奠定基础。
- 刘小会陈卓佳杜军
- 关键词：Γ-干扰素原核表达纯化
- 酶激活式抗肿瘤前体药物的研究进展
- 2007年
- 酶激活式抗肿瘤前体药物利用特异表达于肿瘤组织的酶激活本无活性的前体药物而发挥靶向肿瘤细胞的细胞毒作用。本文根据肿瘤组织自身表达酶的部位、种类、结构、功能和性质的不同,阐述了现有几种酶激活式前体药物的工作原理和研究现状,比较了该类前药与人工引入酶激活式前药的优劣,评价其发展前景。
- 张田甜刘鹏杜军蔡绍晖
- 关键词：前列腺特异性抗原基质金属蛋白酶成纤维细胞激活蛋白
- 姜黄素抑制IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶的表达被引量：4
- 2008年
- 目的:研究姜黄素对IFN-γ诱导的肿瘤细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达的影响。方法:利用低浓度的姜黄素作用于人乳腺癌细胞A431、人宫颈癌细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2、人鼻咽癌细胞CNE2各24h,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测细胞的增殖;利用免疫印记检测姜黄素对这些肿瘤细胞内IDO表达的影响;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测姜黄素对IDO基因表达的关键性干扰素应答因子1(IRF-1)的影响。结果:在这些肿瘤细胞内姜黄素对IDO的表达均有抑制作用,但姜黄素并没有抑制肿瘤细胞内IRF-1的转录。结论:姜黄素能抑制肿瘤细胞内IDO的表达。
- 张坤水李国成何玉文衣艳梅廖仕林王震杜军
- 关键词：姜黄素3-双加氧酶
