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KIN17在28例肺癌标本中的表达分析被引量：2: 2013年; 明确肿瘤发病机制与分子机制,发现理想的早期筛查指标与治疗靶标对肿瘤诊断及治疗极为重要。肺癌细胞具有持续的DNA复制潜能和蓄积的DNA损伤,而KIN17蛋白与DNA复制及修复有关[1-2],因此考虑KIN17可能与肺癌细胞功能有关。本文通过免疫组化技术分析KIN17在肺癌组织中的表达情况,以期为深入探讨KIN17在肺癌发病机制与治疗中的作用奠定基础。; 曾涛陆光明; 关键词：肺癌

荧光定量PCR检测血浆循环DNA及其在肝细胞癌诊断中的意义被引量：1: 2015年; 目的建立血浆中循环DNA的定量检测方法并探讨其在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法先提取正常健康人全血DNA,采用PCR方法扩增人球蛋白基因,然后把该内参基因的扩增产物进行梯度稀释来制备标准品,再用荧光定量PCR方法扩增不同浓度的标准品,从而建立检测血浆循环DNA的标准曲线。然后分别收集肝细胞癌患者术前血浆标本132例、肝硬化患者血浆标本55例,用已建立的方法定量检测这些患者血浆标本中的循环DNA。结果建立了检测血液循环DNA的荧光定量PCR方法,该方法扩增效率较高;其标准曲线的Slope值为-0.308,Intercept值为28.283,R2值为0.997。肝细胞癌患者血浆中DNA浓度为(332±38)ng/m L,显著高于肝硬化患者的(57±6)ng/m L和正常健康人的(15±4)ng/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论荧光定量PCR技术可用于检测血液循环DNA浓度。血循环DNA检测对肝细胞癌的诊断具有重要的应用价值。; 欧阳小明陈策吴坤河曾涛; 关键词：荧光定量PCR 循环DNA 肝细胞癌

剔除Bcl-2基因对胃癌细胞HGC-27凋亡及5-氟尿嘧啶敏感性的影响被引量：1: 2015年; 目的:探讨剔除Bcl-2表达对胃癌HGC-27细胞凋亡、增殖及5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法:将HGC-27细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组(对照si RNA)、干扰组(Bcl-2 si RNA)、5-FU组(5-FU)、联合组(Bcl-2 si RNA与5-FU);通过流式细胞术、MTT方法检测HGC-27细胞凋亡、增殖水平,用ELISA法测定半胱氨酸蛋白酶的活力及Cytochrome C释放水平。结果:转染Bcl-2 si RNA能提高HGC-27细胞凋亡率,降低肿瘤细胞的增殖率;相对于5-FU单独处理组,转染Bcl-2 si RNA与5-FU联合组的细胞凋亡水平明显上升,细胞增殖率显著降低,Caspase-3和Caspase-9活力显著升高,Cytochrome C释放水平亦显著增加(P<0.01)。结论:剔除Bcl-2基因能诱导HGC-27细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖,增强5-FU的敏感性。; 欧阳小明吴坤河曾涛; 关键词：胃肿瘤 BCL-2 小干扰RNA 5-氟尿嘧啶

Kin17表达促进乳腺上皮细胞MCF-10A增殖被引量：2: 2013年; Kin17是一个与DNA复制、DNA修复有关的蛋白质,在人类的各种组织中表达均很低.目前乳腺上皮细胞生长增殖的分子机制尚未阐明.为了探讨Kin17与乳腺上皮细胞增殖的关系,检测了Kin17在不同增殖状况下的MCF-10A细胞中的表达情况,并把KIN17基因插入真核表达载体pcDNA3.1-(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1-Kin17,通过转染MCF-10A细胞,检测Kin17的表达对MCF-10A细胞的增殖、DNA复制活性及信号分子表达的影响;同时,在转染Kin17特异性小干扰RNA(siRNA_Kin17)后,分析MCF-10A细胞的Kin17表达及细胞生长状况.实验结果显示,经高浓度血清刺激后,细胞中Kin17表达升高,而且生长越快的细胞,Kin17表达越强;转染重组质粒pcDNA3.1-Kin17明显提高了MCF-10A细胞中Kin17的表达,同时Kin17的上调表达促进了细胞的增殖速度与DNA复制活性,增强了cyclin D1的表达水平.当转染siRNA_Kin17时使Kin17含量下调,MCF-10A细胞生长速度的抑制不显著.实验结果表明,Kin17与乳腺上皮细胞的DNA复制及生长增殖密切相关.对Kin17在乳腺上皮细胞增殖中的作用及分子调控机制的深入探讨,将有助于揭示乳腺癌细胞快速增殖的潜在机制.; 曾涛吴坤河; 关键词：细胞增殖乳腺上皮细胞真核表达载体

人泛素-核糖体蛋白27a原核表达载体构建及表达: 2013年; 目的构建并表达携带谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签的人泛素-核糖体蛋白S27a(UBRPS27a)原核表达载体。方法利用反转录聚合酶链反应从HL-60细胞中扩增RPS27A基因全长,克隆至pMD-19T载体中,酶切回收后插入原核表达载体pGEX4T-1,构建重组表达载体pGEX4T1-RPS27A,转化大肠埃希菌BL21,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达GST-UBRPS27a融合蛋白。结果经测序与酶切鉴定,重组质粒pGEX4T1-RPS27A构建正确;经重组质粒转化的BL21细菌诱导4h后可高效表达UBRPS27a融合蛋白。结论成功构建UBRPS27a原核表达载体,为进一步研究其结构、功能及其在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。; 曾涛何德; 关键词：原核表达载体

血清高尔基体糖蛋白-73在肺癌中的表达分析被引量：1: 2013年; 目的:分析血清高尔基体糖蛋白-73(GP73)在肺癌中的表达情况,评价GP73在肺癌诊断中的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)对51例肺癌患者及40例正常对照人群血清中GP73水平进行检测。结果:血清GP73在肺癌中的表达水平明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:血清GP73在肺癌患者中的含量显著升高,对其进行监测很可能有助于肺癌的早期诊断。; 孙振亚曾涛; 关键词：GP73 肺癌酶联免疫吸附法

循环肿瘤细胞检测与实时个体化医疗被引量：8: 2015年; 肿瘤细胞的高度异质性给患者的临床治疗造成了很大的困扰。肿瘤分子分型及相应的个体化医疗模式已经成为当今肿瘤研究领域的热点。循环肿瘤细胞（CTCs）指由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。它可作为肿瘤的“液体活检”样本，允许非侵入性、实时、多次获取。对肿瘤临床治疗过程中的CTCs数量与分子表型变化进行动态监测，有助于患者预后预测、靶向治疗方案制定、实时药效评估，从而指导患者的实时个体化医疗。本文阐释近年来CTCs的检测方法的现状及其在肿瘤患者的实时个体化医疗中的应用进展，并展望今后的研究方向。; 曾涛司徒博郑磊; 关键词：肿瘤细胞个体化医学

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国家自然科学基金(81201831)