国家教育部博士点基金(20070022003)
- 作品数：4 被引量：22H指数：3
- 相关作者：张志毅安新民李琰刘婷婷李海霞更多>>
- 相关机构：北京林业大学广东省林业科学研究院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 3个毛白杨病程相关蛋白基因的克隆及表达被引量：5
- 2012年
- 运用电子克隆及RT-PCR技术,以水杨酸(SA)和茉莉酸甲酯(MeJA)诱导下的毛白杨(Populus to-mentosa Carr.)叶片总RNA为模板,分离获得3个病程相关蛋白基因,分别命名为PtPR-1、PtPR-5与PtPR-10。生物信息学分析后发现,这3个基因所编码的蛋白PtPR-1、PtPR-5和PtPR-10分别具有SCP、THN和Bet_v_1保守结构域,其中PtPR-1和PtPR-5均包含一段25 bp的信号肽,成熟蛋白序列与其他物种相比同源性较高;而PtPR-10无信号肽,蛋白序列与其他物种相比差异性较大,其基因组序列还存在一段91 bp的内含子。另外,实时荧光定量PCR技术分析结果表明,SA和MeJA处理后,PtPR-1与PtPR-10表达模式和转录水平均有较大差异,而Pt-PR-5的表达则未见显著变化,由此可推测,PtPR-1可能受SA和JA双重诱导,而PtPR-10可能只受SA诱导表达,在SA和JA两种信号通路的互作下,表现出不同的诱导表达模式。
- 雷杨张志毅刘文凤王兴安新民林善枝郑会全
- 关键词：毛白杨水杨酸茉莉酸甲酯生物信息学
- 毛白杨NBS型基因PtDRG01原核表达研究被引量：6
- 2008年
- 为了分析毛白杨NBS型抗病基因PtDRG01(EF157840)编码蛋白的特性,研究构建了该基因的原核表达载体pGEX-Pt01,并导入大肠杆菌XA90,经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE电泳分析证明,该特异蛋白的分子量约为79kD。对原核表达体系以及融合蛋白的表达特性进行优化与分析表明:最佳诱导表达条件为1mmol/L IPTG在37℃下诱导4h,所表达的融合蛋白为胞内分泌的可溶性蛋白。利用谷胱苷肽-琼脂糖亲和层析柱纯化获得了电泳纯级的目标蛋白,为PtDRG01基因编码蛋白的功能鉴定研究奠定了基础。
- 李琰张谦李海霞刘婷婷安新民张志毅
- 关键词：毛白杨原核表达蛋白纯化
- 三倍体毛白杨PtDRG02基因启动子的瞬时表达分析被引量：2
- 2009年
- 本研究利用PCR技术从三倍体毛白杨((Populus tomentosa×P.bolleana)×P.tomentosa)基因组DNA中扩增获得抗病相关PtDRG02基因的一个启动子区(包括其下游5'端非编码区序列),命名为Ptp01。以β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因为报告基因,构建了PtDRG02基因启动子植物表达载体Ptp01/gus。以根癌农杆菌EHA105及LBA4404感受态细胞为受体,转化植物表达载体Ptp01/gus进行瞬时表达,并对启动子进行了功能活性分析,结果表明该启动子能够驱动gus报告基因在毛白杨叶片组织中表达,但表达强度弱于花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。
- 郑会全雷杨林善枝张志毅
- 关键词：三倍体毛白杨GUS
- 毛白杨TIR-NBS-LRR基因转化烟草的研究被引量：10
- 2009年
- 该文采用农杆菌介导法将从毛白杨中克隆得到的TIR-NBS-LRR抗病基因(PtDRG01)导入烟草中,经抗生素筛选和PCR分子检测,获得了一批阳性转化植株。进而对这些阳性转化植株进行烟草花叶病毒接种实验,从表型观察结果发现,在接种病毒1周和6周后,转基因烟草株系TG-11的发病程度明显低于非转基因烟草。荧光定量分析结果显示,转基因烟草株系TG-11叶片中的烟草花叶病毒(TMV)数量显著低于非转基因植株,且该转基因株系中的PtDRG01基因转录水平显著高于非转基因植株。这些结果表明,毛白杨PtDRG01基因具有明显的抗病功能,其高效表达能够显著提高烟草的抗TMV能力。该文通过对烟草的遗传转化与病毒接种实验,鉴定了PtDRG01基因的功能,可为其他TIR-NBS-LRR基因的功能鉴定提供参考。
- 李海霞张志毅张谦安新民李琰刘婷婷
- 关键词：毛白杨转基因烟草烟草花叶病毒抗病性
