河北省自然科学基金(H2012206157)
- 作品数：41 被引量：147H指数：8
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- BMP信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)信号通路在华法林诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)钙化中的作用。方法体外分离培养大鼠胸主动脉VSMC,将其随机分为正常对照组、高磷组、华法林(10μmol/L)干预组及华法林(10μmol/L)+维生素K(10μmol/L)干预组。对细胞进行钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,茜素红染色检测钙结节,Western blot检测细胞中Runx2蛋白的表达变化,RT-PCR检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Smad1及Runx2的表达变化。结果茜素红染色结果显示,与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组钙化结节明显增多;钙含量测定结果与茜素红染色结果基本一致。与正常对照组和高磷组相比,华法林干预组ALP活性明显增加(P<0.05),Runx2 mRNA和蛋白表达水平及BMP-2、Smad1 mRNA表达明显增高(P<0.05);与华法林干预组相比,华法林+维生素K干预组细胞钙含量、ALP活性及BMP-2、Smad1、Runx2的表达均明显降低(P<0.05)。结论BMP信号通路参与了华法林促进的大鼠VSMC钙化,其可能的作用机制是介导了VSMC的表型转化。
- 张俊霞徐金升张睦清白亚玲张胜雷崔立文张慧然
- 关键词：华法林细胞钙化
- UMOD基因启动子区单核苷酸多态性与慢性肾脏病患者肾存活率的关系被引量：2
- 2014年
- 尿调蛋白由uromodulin（UMOD）基因编码，在肾脏特异性表达，与慢性肾脏病（CKD）的发生与进展相关^[1]。2009年欧洲全基因组的研究结果显示，UMOD基因启动子区单核苷酸多态性（SNP）与CKD的发生和肾小球滤过率（eGFR）相关^[2-3]。目前有关UMOD基因启动子区的SNP与CKD患者肾脏生存预后关系的研究较少。本研究探讨了UMOD启动子区SNP与CKD患者5年肾脏生存预后的关系。
- 徐金升白亚玲张文博张胜雷张俊霞崔立文
- 关键词：基因启动子区单核苷酸多态性慢性肾脏病肾存活率生存预后特异性表达
- 维拉帕米通过阻断钙离子内流抑制血管平滑肌细胞钙化研究被引量：8
- 2015年
- 目的探讨维拉帕米抑制高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）钙化的作用及可能机制。方法2014年12月—2015年6月选取5~8周龄清洁级健康雄性SD大鼠6只,体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫组化法鉴定。将对数期VSMCs随机分为正常对照组〔含10%胎牛血清（FBS）培养基〕、高磷组（高磷培养基,含10 mml/Lβ-甘油磷酸）、维拉帕米干预组（在高磷培养基的基础上加入维拉帕米至浓度为20 mmol/L）。细胞接受2、4、6 d干预后,检测VSMCs内钙离子水平,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测VSMCs内目的基因（smad1、runx2mRNA）表达水平。细胞接受14 d干预后进行钙化检测,包括钙水平测定和茜素红染色情况。结果高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均高于正常对照组（P〈0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内钙离子水平均低于高磷组（P〈0.05）。高磷组、维拉帕米干预组4、6 d后VSMCs内钙离子水平分别高于2 d后（P〈0.05）;高磷组6 d后VSMCs内钙离子水平高于4 d后（P〈0.05）;维拉帕米干预组6 d后VSMCs内钙离子水平低于4 d后（P〈0.05）。高磷组、维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于正常对照组（P〈0.05）;维拉帕米干预组2、4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均低于高磷组（P〈0.05）。高磷组4、6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平分别高于4 d后（P〈0.05）;维拉帕米干预组4 d后VSMCs内smad1 mRNA表达水平高于2 d后,runx2 mRNA表达水平低于2 d后,6 d后VSMCs内smad1、runx2 mRNA表达水平均高于2、4 d后（P〈0.05）。高磷组、维拉帕米干预组VSMCs钙水平均高于正常对照组（P〈0.05）;维拉帕米干预组VSMCs钙水平低于高磷组（P〈0.05）。高磷组、维拉帕米干预组橘红色钙化结节较正常对照组多,维拉帕米干预组橘红色�
- 李同妙徐金升冯雨张胜雷张俊霞崔立文张慧然
- 关键词：维拉帕米血管钙化钙通道
- 酸性环境对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨酸性环境对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响及可能机制.方法 将22只雄性SD大鼠随机分为4组：假手术组（甲基纤维素灌胃）、慢性肾衰竭组（5/6肾切除术构建慢性肾衰竭大鼠模型,甲基纤维素灌胃）、慢性肾衰竭血管钙化组（甲基纤维素加骨化三醇灌胃）、酸干预组[甲基纤维素及骨化三醇灌胃加氯化铵（0.28 mmol/L）饮水].采用von Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉runt相关转录因子2 （runt-related transcription factor 2,runx2）和L型钙通道（calcium channels,Ltype,LTCC） β3亚基表达.体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）,用β-甘油磷酸盐（β-glycerophosphate,β-GP）诱导钙化.将细胞随机分为4组：正常＋pH7.4组、高磷＋pH7.4组（10 mmol/L β-GP）、高磷＋pH7.1组（高磷培养基基础上添加盐酸调整pH值为7.1）和维拉帕米干预组[高磷培养基基础上添加维拉帕米（调整浓度为20 mmol/L）].采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;钙离子探针Fluo-3/AM检测血管平滑肌细胞胞外钙离子内流的效应变化;RT-PCR和Western印迹法检测LTCCβ3亚基、runx2的表达.结果 体内实验中,成功制备了慢性肾衰竭大鼠的血管钙化模型,与慢性肾衰竭血管钙化组相比,给予酸干预后,大鼠血管钙盐沉积明显减轻（P＜0.05）,LTCCβ3亚基和runx2表达降低（P＜0.05）.体外实验证明,酸性环境减少了VSMCs钙盐沉积,降低了ALP活性（P＜0.05）,抑制了LTCCβ3亚基表达（P＜0.05）,阻滞细胞外钙离子内流（P＜0.05）,降低runx2的表达（P＜0.05）.维拉帕米干预组VSMCs钙盐沉积和runx2表达均降低（P＜0.05）.结论 酸性环境可以抑制血管钙化,其可能机制之一是通过抑制VSMCsLTCCβ3亚基表达,阻滞钙离子内流,抑
- 张胜雷徐金升冯雨张俊霞崔立文何雷俞啟遥白亚玲
- 关键词：钙质沉着症
- SET8在肾透明细胞癌中的表达及其对786-O细胞增殖迁移能力的影响被引量：5
- 2016年
- 目的 探讨SET8在肾透明细胞癌组织中表达的临床意义及沉默该基因对人肾透明细胞癌786-O细胞增殖迁移能力的影响.方法 收集2006年12月至2011年12月156例肾切除术后标本,病理类型均为肾透明细胞癌.采用免疫组化染色法检测SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达,分析SET8蛋白表达与患者临床病理特征的关系.体外培养肾透明细胞癌786-O细胞,针对人SET8基因设计合成4对候选短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）序列（shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4）,以脂质体Lipofectamine 2000为载体,转染肾透明细胞癌786-O细胞,荧光显微镜下观察转染效率.蛋白质印迹法检测786-O细胞中SET8蛋白的表达,筛选有效shRNA序列.将有效shRNA序列转染786-O细胞,细胞分3组：SET8-shRNA转染组（转染SET8-shRNA）、阴性对照组（转染阴性对照shRNA）、正常对照组（未转染组）.对转染后的786-O细胞采用MTT法检测增殖能力;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力.结果 SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中阳性表达率为98.7％（154/156）,SET8蛋白高表达率为60.3％（94/156）,SET8蛋白表达高低与肾透明细胞癌患者的肿瘤分期、肿瘤大小及淋巴结转移有关（P均＜ 0.05）;在SET8-shRNA浓度为2μg/L、Lipofectamine 2000为4μl/孔的转染条件下,转染效率约70％;筛选出的最佳干扰序列为SET8-shRNA2,转染48 h沉默效率可达64％.SET8-shRNA2转染组SET8蛋白表达率在转染后48 h显著低于阴性对照组、正常对照组（t=-38.174,P＜0.01;t=-58.766,P＜0.01）.shRNA有效沉默SET8基因表达后,SET8-shRNA转染组786-O细胞增殖、克隆形成和迁移能力均受到显著抑制.结论 SET8蛋白在肾透明细胞癌组织中表达升高可能促进了肿瘤的发生、发展.沉默SET8蛋白表达可有效抑制肾透明细胞癌786-O细胞的肿瘤恶性生物学行为.
- 徐金升王静张俊霞白亚玲崔立文张慧然张胜雷
- 关键词：肾透明细胞癌786-O细胞细胞增殖克隆形成迁移LYSINE
- SET8基因3’非翻译区miR-502结合位点单核苷酸多态性与肾透明细胞癌发病风险的关系被引量：8
- 2016年
- 目的探讨SET8基因3‘非翻译区miR．502结合位点单核苷酸多态性与肾透明细胞癌发病风险的关系。方法采用病例对照研究的方法．对140例肾透明细胞癌患者和130例健康对照者的SET8基因3’非翻译区miR一502结合区域的rsl6917496位点进行测序，分析rs16917496位点的基因型与肾透明细胞癌患病风险的关系。采用免疫组织化学法检测不同基因型肾透明细胞癌患者肿瘤组织中SET8蛋白的表达情况，分析SET8蛋白的表达与rsl6917496位点基因型的关系。结果140例肾透明细胞癌患者中，SET8基因3’非翻译区miR．502结合位点rsl6917496CC、CT和1Tr基因型分别为14、47和79例；130例健康体检者中，SET8基因3’非翻译区miR．502结合位点rsl6917496CC、CT和TT基因型分别为30、32和68例。与健康体检者比较，肾透明细胞癌患者CT、TF基因型出现的频率明显增高（均P〈0．05）。携带cT、TT基因型者患肾透明细胞癌的风险明显增高（均P〈O．05）。SET8基因3’非翻译区miR．502结合位点rsl6917496位点的CT和TT基因型与SET8蛋白的高表达有关（P〈0．05）。结论SET8基因3’非翻译区miR一502结合区域rsl6917496位点的基因型与SET8蛋白的表达有关，该位点的单核苷酸多态性有利于确定肾透明细胞癌的易感性。
- 徐金升白亚玲张俊霞崔立文张慧然张胜雷
- 关键词：肾肿瘤
- γ干扰素对高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响研究被引量：10
- 2015年
- 目的探讨γ干扰素(IFNγ)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响,为临床治疗血管钙化提供新的线索。方法大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs随机分为阴性对照组、高磷组、IFNγ干预组(在高磷培养基的基础上加入100 U/L重组大鼠IFNγ),刺激3 d后RT-PCR对各组细胞内核心结合因子α1(Cbfα1)、骨形态发生蛋白2(BMP2)、Smad 1以及Smad 7的mRNA进行检测,刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色,钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与阴性对照组比较,高磷组及IFNγ干预组VSMCs均有钙盐沉积,ALP活性及Cbfα1的mRNA及蛋白表达均增高,BMP 2、Smad 1 mRNA表达也增高(均为P<0.05),与高磷组比较,IFNγ干预组VSMCs的钙盐沉积、ALP活性及Cbfα1 mRNA和蛋白表达均显著降低(均为P<0.05),BMP 2、Smad 1 mRNA表达也降低,而正常组和IFNγ干预组的VSMCs中Smad 7 mRNA表达均高于高磷组(均为P<0.05)。结论 IFNγ对高磷诱导的VSMCs钙化有抑制作用,其可能机制之一是通过抑制了VSMCs Cbfα1的表达,进而抑制了VSMCs的转分化来实现的。
- 白亚玲徐金升钱玥彤张俊霞张胜雷崔立文张慧然
- 关键词：IFNΓ钙含量
- 慢性肾脏病患者肾脏生存预后与线粒体DNA D-loop基因多态性的关系被引量：2
- 2014年
- 氧化应激在慢性肾脏病（CKD）发生、发展中起着重要作用。氧化应激可直接损伤线粒体DNA（mtDNA），使得mtDNA易发生突变。mtDNA多态性热点区域主要位于包括D-loop在内的非编码区域。本研究观察了mtDNA D-loop区单核苷酸多态性及临床因素与CKD患者5年肾脏生存预后的关系。
- 张胜雷徐金升白亚玲张俊霞崔立文张慧然艾晓璐张东雪
- 关键词：D-LOOP区线粒体DNA生存预后基因多态性MTDNA
- 高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其机制被引量：10
- 2015年
- 目的 探讨高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制.方法 体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）,用β甘油磷酸盐（β-GP）诱导钙化.VSMCs细胞被分为4组：对照组、高磷组（10 mmol/L β-GP）、镁干预组（10 mmol/L β-GP＋3 mmol/LMgSO4）、镁通道抑制剂（2-APB）干预组（10 mmol/L β-GP＋3 mmol/L MgSO4＋10-4 mol/L 2-APB）.采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;RT-PCR法和Western印迹法检测细胞核心结合因子α-1（Cbfα-1）的表达.24只雄性SD大鼠被随机分为3组：对照组（甲基纤维素灌胃＋高磷饮食）、血管钙化组（硫酸腺嘌呤灌胃＋高磷饮食）、高镁干预组（硫酸腺嘌呤灌胃＋高磷高镁饮食）.造模成功后测定大鼠主动脉脉搏波速率（PWV）;采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Cbfα-1表达.结果 细胞培养14 d后,与高磷组相比,镁干预组VSMCs钙盐沉积明显减少,ALP活性降低（P＜0.05）,Cbfα-1表达下调;2-APB可抑制高镁对VSMCs的保护性作用.Cbfα-1的动态观察结果显示,镁干预组第3天Cbfα-1的表达下调（P＜0.05）,其抑制效应随时间延长呈增强趋势.体内实验中,大鼠慢性肾衰竭血管钙化模型制备成功.和体外实验一致,与血管钙化组相比,高镁干预组大鼠血浆镁离子水平明显升高,胸主动脉PWV明显降低（P＜0.05）,血管钙盐沉积程度亦明显减轻.免疫组织化学结果显示高镁可明显降低高磷诱导的Cbfα-1表达（P＜0.05）.结论 高镁可抑制血管钙化,其机制可能与其抑制VSMCs骨源性分化相关.
- 白亚玲徐金升靳晶晶张俊霞张胜雷崔立文张慧然
- 关键词：钙质沉着症核心结合因子Α1BINDING
- 膦甲酸钠对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响及其机制
- 2015年
- 目的研究膦甲酸钠(PFA)对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及可能的作用机制。方法体外原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,经形态学和免疫细胞化学鉴定后,分别加入10 mmol/L的β-甘油磷酸(HP组)和10 mmo L/L HP+1 mol/L PFA(PFA组),另设空白对照组。测定各组细胞钙含量,并分别用RTPCR和Western blotting法检测VSMCs核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA及蛋白在不同时间点的动态表达情况。结果HP组和PFA组细胞钙含量均高于空白对照组(P均<0.05),且PFA组细胞钙含量较HP组明显降低(P<0.05)。HP组Cbfα1 mRNA和蛋白的表达呈"峰-谷-峰"样(P<0.05),且第一峰值高于第二峰值(P<0.05);PFA组Cbfα1 mRNA表现为第二高峰前移,分别于6 h及1 d达峰(P均<0.05),而蛋白水平达峰时间延后,分别于12 h和4 d达峰(P<0.05),且第二峰值均低于第一峰值(P<0.05)。结论 PFA能抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其可能是通过影响高磷诱导的VSMCs表型转化来实现。
- 胡春燕徐金升石博张俊霞白亚玲崔立文张慧然张胜雷
- 关键词：膦甲酸钠核心结合因子Α1
