江苏省自然科学基金(BK2007504)
- 作品数：8 被引量：14H指数：2
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- 小鼠异基因造血干细胞移植中清髓照射对供者来源内皮祖细胞归巢的影响
- 2009年
- 目的研究异基因造血干细胞移植预处理因素——清髓照射对供者来源内皮祖细胞（EPCs）归巢的影响。方法密度梯度离心和差速贴壁法获取小鼠骨髓单个核细胞，EGM-2培养基培养，5～7d检测CD133^＋CD31^＋CD45^k/w表面标记及吸食Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定，并行羟基荧光素一醋酸盐琥珠酰亚胺酯（CFSE）标记。实验分组：正常组，正常＋EPCs移植组，照射组，照射＋EPCs移植组。流式细胞术（FCM）分析外周血、脾脏和骨髓中内皮细胞（ECs）、EPCs和CFSE阳性细胞比例；病理、电镜和免疫荧光分析各组织的损伤情况及CFSE标记EPCs的分布。结果流式细胞术鉴定内EPCs为CD45^k/wCD133^＋CD31^＋；Dil-ac-LDL^＋、FITC-UEA-1^＋。照射后短时间内循环中ECs即开始升高，第5d达高峰，持续到第7d，与正常组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；循环中EPCs照射后短时间内也增加，于第4d达到峰值，随后下降至正常水平，其增加与正常组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。照射后3d光镜下肝脏弥漫性的炎症浸润，小肠大量炎症细胞浸润；电镜下肝脏中血小板聚集到内皮下暴露的胶原上，小肠中ECs和基底膜间被损坏。照射＋EPCs移植组，荧光显微镜下观察，移植后3h见CFSE阳性细胞归巢至损伤的肝脏和小肠，细胞少且不连续；36h细胞较多，且呈连续性。结论移植预处理中的清髓照射可引起严重的内皮损伤，该损伤启动了EPCs的动员，并驱动外源性EPCs归巢至损伤比较重的组织中。
- 丁爽徐开林闫志凌陈翀潘秀英曾令宇
- 关键词：照射内皮祖细胞归巢
- HSCs移植预处理对骨髓微环境损伤的研究
- 2010年
- 目的研究异基因造血干细胞(HSCs)移植预处理-清髓照射对受者骨髓微环境的损伤。方法20只BALB/C小鼠随机分为:正常对照组(10只);单纯照射组(10只),予8.5Gy照射,剂量率0.57Gy,距离2.33m。显微镜下计数外周血中白细胞的变化,流式细胞术分析外周血中内皮细胞(ECs)的变化;病理和电镜观察骨髓微环境的损伤。结果照射后外周血中白细胞减少,ECs升高,第5天达高峰,持续至第7天,与正常组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。照射后3d光镜下观察骨髓微环境中大量出血;电镜下ECs和基底膜间被损坏。结论移植预处理中的清髓照射可引起严重的骨髓微环境中内皮损伤。
- 丁爽徐开林鹿群先闫志凌陈翀曾令宇
- 关键词：照射骨髓微环境内皮细胞损伤
- 小鼠异基因骨髓移植γ线清髓性照射对骨髓内皮龛的损伤研究被引量：2
- 2010年
- 本研究探索异基因骨髓移植清髓性γ线照射预处理对受鼠骨髓内皮的损伤程度。体外培养小鼠骨髓单个核细胞,经5-7天检测其表面标记、吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1鉴定,并行CFSE标记。分析正常组、清髓性照射组、内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)移植组及照射联合EPC移植组小鼠外周血中白细胞变化、骨髓内皮的改变及CFSE标记EPC的骨髓内分布。结果发现,培养细胞鉴定证实为CD31+CD133+CD45low/-,且具有吞噬Dil-Ac-LDL和结合FITC-UEA-1能力。小鼠清髓照射后外周血白细胞迅速减少,与正常组相比,有显著差异(p<0.05)。照射后3天,骨髓中大量出血,内皮细胞和基底膜间连接被损坏。清髓照射后输注CFSE标记EPC,18小时后小鼠骨髓中可见CFSE+细胞,其细胞量是正常小鼠单纯EPC输注组的58倍(p<0.05)。结论:移植清髓照射预处理引起严重骨髓内皮龛损伤,该损伤驱动外源性EPC的归巢。
- 汤仁仙丁爽徐开林贾路闫志凌陈翀曾令宇
- 关键词：异基因骨髓移植Γ线照射
- 携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体的构建及表达被引量：5
- 2009年
- 目的构建携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体,并研究其在CD4+CD25-T细胞中的表达。方法构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子慢病毒载体。采用脂染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转导效率,通过RT-PCR及Western Blotting法分别从mRNA和蛋白水平检测Foxp3的表达。结果成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP/pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/mL。以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞基因转导效率达55.95%,并且存在Foxp3 mRNA和蛋白水平的高表达。结论成功构建了携带鼠Foxp3基因的自身失活型慢病毒载体;该系统可有效的介导Foxp3基因在CD4+CD25-T细胞中表达。
- 曹江陈翀徐开林潘秀英李振宇曾令宇
- 关键词：慢病毒FOXP3调节性T细胞
- 造血干细胞移植预处理药物对小鼠血管内皮作用的研究被引量：1
- 2009年
- 造血干细胞移植（HSCT）是治疗难治性血液系统及一些非血液系统疾病的有效手段。移植并发症是影响移植成功和预后的重要因素。血管内皮损伤是引起HSCT并发症的重要因素，并且影响造血干细胞的归巢。我们采用环磷酰胺（Cy）和白消安（Bu）为预处理方案，观察在清髓时药物对小鼠组织器官血管内皮的影响，从而探索发生HSCT并发症的又一可能机制。
- 曾令宇闫志凌贾路丁爽许世娟
- 关键词：血管内皮损伤小鼠药物移植并发症HSCT
- 造血干细胞移植前清髓及非清髓性照射预处理对小鼠血管内皮的影响被引量：3
- 2009年
- 目的探讨在造血干细胞移植前清髓及非清髓性全身照射（TBI）预处理对小鼠血管内皮的影响。方法将6～8周龄雌性Balb／c小鼠随机分为正常对照组（正常小鼠）、致死剂量TBI组（^66Co8．5Gy）和减低剂量TBI组（^60Co5．0Gy）。TBI后定期观察小鼠的生存状态，计数外周血白细胞；采用流式细胞术检测外周血中内皮细胞和内皮祖细胞的变化；通过病理切片及透射电镜观察小鼠小肠及肝脏的组织结构和血管内皮的超微结构。结果致死剂量TBI组小鼠外周血白细胞减少，同时内皮细胞及内皮祖细胞增加，与正常小鼠相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。减低剂量TBI组小鼠外周血白细胞先降后升，内皮细胞与内皮祖细胞同样也出现增加，与正常小鼠相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；与致死剂量TBI组比较，其外周血内皮细胞和内皮祖细胞增加幅度明显降低（P〈0．05）。两个TBI组小鼠的病理切片均可见肝脏实质细胞水肿及小肠炎症细胞浸润，肝脏的超微结构可见血管内皮完整性受损，致死剂量TBI组受损更为显著。结论清髓及非清髓性剂量TBI预处理均可引起小鼠血管内皮早期损伤，其损伤程度与剂量相关，且外周血中内皮细胞的变化可以反映血管内皮损伤的程度。
- 孙海英闫志凌许世娟丁爽贾路陈翀曹江曾令宇
- 关键词：全身照射
- 鼠VEGF红色荧光慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建含鼠血管内皮细胞生长因子(mVEGF)红色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法构建含mVEGF和红色荧光蛋白(DsRed)基因双顺反子重组慢病毒质粒;采用脂染法将慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察DsRed表达,收集48 h和72 h病毒上清并感染靶细胞239T,荧光显微镜下观察DsRed表达情况,并行Western blot分析培养上清和胞浆内mVEGF表达。结果成功构建慢病毒表达质粒pTK208-mVEGF-IRES-DsRed,重组慢病毒滴度达5×106PFU/mL,并获得蛋白DsRed和mVEGF的表达。结论含mVEGF红色荧光慢病毒质粒成功介导mVEGF蛋白的表达,该载体有望为研究VEGF的病理生理学机制及基因靶向治疗提供有效的工具。
- 王东洋贾路陈翀李艳杰曾令宇
- 关键词：慢病毒载体血管内皮细胞生长因子红色荧光蛋白293T细胞
- 造血干细胞移植预处理因素对小鼠肝脏作用的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨造血干细胞移植各种常用预处理因素对小鼠肝脏的损伤作用。方法 8~10周龄雌性BALB/c小鼠40只,随机分为正常对照组、非清髓全身照射组、清髓剂量全身照射组、白消安组和环磷酰胺组,每组8只。观察小鼠的一般情况,计数外周血白细胞,组织病理观察肝脏病理变化,透射电镜观察肝脏细胞以及血管内皮的超微结构变化。结果移植预处理后各实验组白细胞减少(P<0.05),各预处理组肝脏组织光镜下有不同程度的病理改变,电镜下肝细胞和肝脏血管内皮细胞亦有不同程度的损害。结论造血干细胞移植预处理中全身照射、白消安和环磷酰胺均可导致肝脏病变以及血管内皮损害,是发生肝静脉闭塞病的重要原因。
- 贾路闫志凌许世娟徐开林曾令宇
- 关键词：造血干细胞移植肝静脉闭塞病预处理血管内皮
