国家自然科学基金(81202323)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：吴移谋贺庆芝曾怀才王川黎知青更多>>
- 相关机构：南华大学德克萨斯大学武汉科技大学附属天佑医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技厅项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Localization and characterization of a putative TMH family protein CPSIT_0846 in Chlamydophila psittaci
- Chlamydophila psittaci,an obligate intracellular pathogen,has been associated with psittacosis.Also,C.psittaci...
- Haiying WuLiangzhuan LiuZhiqing LiChuanhao JiangXiaohua MaYimou Wu
- 文献传递
- CPSIT＿0271的定位、表达时相及其诱导THP-1细胞产生促炎症因子被引量：1
- 2013年
- 目的：研究鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT＿0271蛋白的定位和表达时相，及其重组蛋白对人单核细胞（ THP-1）产生促炎症因子的诱生作用。方法原核表达、纯化GST-CPSIT＿0271重组蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析血清抗体滴度。间接免疫荧光法初步观察内源性CPSIT＿0271的定位，并通过Western blot 分析CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞8 h、18 h、24 h、36 h和48 h后的表达情况。用不同浓度GST-CPSIT＿0271刺激THP-1细胞，ELISA检测IL-6、IL-1β和TNF-α水平。结果在Cps感染的HeLa细胞中，CPSIT＿0271分布于衣原体包涵体内。 CPSIT＿0271在Cps感染HeLa细胞后36 h开始表达，在48 h时表达量增加。 GST-CPSIT＿0271免疫小鼠，产生较强的免疫应答，小鼠血清特异性抗体效价为1∶16000。当GST-CPSIT＿0271蛋白浓度为2～5μg/ml时，刺激THP-1细胞产生IL-6、IL-1β和TNF-α的水平与CPSIT＿0271呈明显的剂量依赖关系。5μg/ml的GST-CPSIT＿0271蛋白刺激THP-1细胞，TNF-α和IL-1β在24 h时达到高峰，IL-6在48 h时达到高峰。结论 CPSIT＿0271蛋白分布于包涵体内，CPSIT＿0271基因可能为Cps晚期表达基因；GST-CPSIT＿0271具有较好的免疫原性，并能促进THP-1细胞分泌促炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β。
- 黎知青刘良专伍海英彭菁陈丽丽贺庆芝吴移谋
- 关键词：细胞定位促炎症因子
- CPSIT_p7通过激活JNK/ERK信号通路诱导宿主细胞炎症被引量：3
- 2017年
- 目的初步探讨鹦鹉热嗜衣原体蛋白CPSIT_p7对宿主细胞炎症反应的调节作用及其分子机制。方法佛波酯(PMA)处理THP-1细胞过夜,诱导其分化为贴壁的巨噬细胞,之后用CPSIT_p7蛋白刺激贴壁细胞,或先用30μmol/L ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB202190分别预处理贴壁细胞,再用CPSIT_p7蛋白处理贴壁细胞;Western blot检测ERK、JNK和p38磷酸化水平,ELISA检测各种炎症因子的表达水平。结果 0~10μg/ml CPSIT_p7蛋白刺激PMA诱导的THP-1细胞24 h后,随着CPSIT_p7质量浓度升高,IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α的含量呈剂量依赖性增加;10μg/ml的CPSIT_p7处理细胞0、6、12、24和36 h,在24 h时IL-6、IL-8及IL-1β表达水平达到高峰,而TNF-α在12 h就达到高峰;CPSIT_p7蛋白处理细胞后其ERK和JNK磷酸化水平显著升高,p38磷酸化水平改变不明显;JNK和ERK抑制剂能明显降低CPSIT_p7蛋白诱导的IL-6、IL-1β、IL-8及TNF-α表达。结论 CPSIT_p7通过JNK/MAPKs和ERK/MAPKs信号传导途径诱导THP-1产生IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α炎症因子,与p38/MAPKs信号传导通路无关。
- 贺庆芝曾怀才许雪梅吴移谋
- 关键词：MAPKS细胞因子
- 鹦鹉热嗜衣原体CPSIT_0018融合蛋白原核表达载体的构建、表达及其在Hela细胞中的定位被引量：1
- 2014年
- 目的构建鹦鹉热嗜衣原体(Cps)CPSIT_0018原核表达载体,表达并纯化该融合蛋白,观察其在感染的Hela细胞中的定位。方法采用PCR技术从Cps 6BC基因组中扩增CPSIT_0018基因,并构建pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,然后转化到宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导His-CPSIT_0018融合蛋白表达,进一步用该融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,间接免疫荧光法分析His-CPSIT_0018蛋白在Hela细胞中的分布特征。结果成功构建了pET30a-CPSIT_0018原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;在Cps感染的Hela细胞中CPSIT_0018的分布与主要外膜蛋白MOMP相似,而与包涵体膜蛋白IncA的分布模式不同。结论成功克隆表达了His-CPSIT_0018,该蛋白定位在Cps包涵体内。
- 贺庆芝曾怀才陆春雪胡艳群陈芝喜王川吴移谋
- 关键词：克隆表达细胞定位
- 鹦鹉热嗜衣原体CPSIT-0531融合蛋白原核表达载体的构建、表达及免疫原性检测被引量：1
- 2014年
- 目的构建鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)CPSIT-0531原核表达载体,表达并纯化该融合蛋白,检测其免疫原性。方法采用PCR技术从Cps 6BC基因组中扩增CPSIT-0531基因,并构建pET30a-CPSIT-0531原核表达载体,然后转化到宿主菌E.coli BL21中,IPTG诱导His-CPSIT-0531融合蛋白表达,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA分析His-CPSIT-0531蛋白的免疫原性。结果成功构建了pET30a-CPSIT-0531原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;GST-CPSIT-0531免疫小鼠后,ELISA检测免疫小鼠的血清特异性抗体效价为1:640 000。结论成功克隆表达了His-CPSIT-0531,该蛋白具有较好的免疫原性。
- 贺庆芝曾怀才陆春雪王川吴移谋
- 关键词：克隆表达免疫原性
- CPSIT_p7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：构建鹦鹉热嗜衣原体（ Chlamydophila psittaci，Cps） CPSIT_p7原核表达载体，表达并纯化CPSIT_p7，检测其免疫原性，观察其在持续性感染过程中的mRNA和蛋白动态表达情况。方法原核表达和纯化His-CPSIT_p7融合蛋白，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，ELISA分析His-CPSIT_p7蛋白的免疫原性。采用青霉素与Cps共同处理细胞来制备持续性感染模型， RT-PCR和Western blot检测CPSIT_p7在其持续性感染过程中的表达情况。结果成功构建了pET30a-CPSIT_p7原核表达载体，并表达和纯化较稳定的重组蛋白；该蛋白免疫小鼠40 d后，ELISA 检测血清特异性抗体效价为1∶1000000；RT-PCR和Western blot 结果显示在Cps急性感染与持续性感染过程中CPSIT_p7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增加，感染后mRNA在36 h表达量达到高峰，之后急性感染呈时间依赖性下降，而持续性感染CPSIT_p7 mRNA高表达水平至少持续到60 h。结论成功克隆表达了His-CPSIT_p7，该蛋白具有较好的免疫原性；CPSIT_p7基因和蛋白在Cps持续性感染中呈高表达。
- 贺庆芝曾怀才黎知青王川胡艳群陈芝喜吴移谋
- 关键词：克隆表达免疫原性
- Localization and characterization of a putative TMH family protein CPSIT0846 in Chlamydophila psittaci
- Chlamydophila psittaci,an obligate intracellular pathogen,has been associated with psittacosis.Also,C.psittaci...
- Haiying WuLiangzhuan LiuZhiqing LiChuanhao JiangXiaohua MaYimou Wu
- IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2表达促进鼠衣原体感染被引量：8
- 2019年
- 目的初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制。方法鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10^-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血液中IFN-γ和IL-2的表达水平。结果与野生型小鼠相比,IL-10^-/-小鼠的肠道和生殖道均具有较强的衣原体清除能力,同时细胞因子IFN-γ和IL-2的表达显著性增加。此外,野生型小鼠表现出更严重的输卵管病理损伤。结论IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2的表达使宿主清除衣原体能力下降,从而促进衣原体在小鼠体内生长,加重输卵管积水的发病率。
- 贺庆芝贺梦婷王昕罗晓清吴移谋钟光明
- 关键词：沙眼衣原体细胞因子
