国家自然科学基金(81100471)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- PcG蛋白EZH2在全反式维甲酸诱导的小鼠iPS细胞系分化过程中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的探讨组蛋白甲基转移酶EZH2在小鼠iPS细胞系IP14D-1向生殖细胞分化过程中的作用。方法将小鼠iPS细胞系IP14D-1通过悬浮培养分化形成拟胚体(iEBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,1μmol/L全反式维甲酸(atRA)持续诱导iEBs 2、4和7 d,采用实时RT-PCR、荧光定量RT-PCR、免疫荧光检测atRA处理前后EZH2和生殖细胞分化标志性基因Stra8在iEBs中的表达。结果在atRA诱导IP14D-1来源的iEBs中,EZH2表达在诱导后2 d达到高峰,伴随atRA诱导,EZH2表达减弱;而生殖细胞分化标志性基因Stra8其变化特点与EZH2相反,无atRA诱导时EBs表达Stra8较弱,伴随atRA诱导,Stra8表达增强。EZH2和Stra8阳性信号分别定位于胞膜和胞质,其变化特点与PT-PCP结果相一致。结论 atRA诱导使EZH2低水平表达时期提前出现,伴随Stra8增强表达,启动了小鼠iPS细胞向生殖细胞的分化进程。
- 张艳敏漆正宇郭新崔光辉秦洁
- 关键词：EZH2全反式视黄酸
- 5-Aza-dC在mES细胞向生殖细胞分化中的DNA甲基化调控机制被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)向生殖细胞(Embryonic germcells,EG)分化过程中5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dC)对DNA甲基化转移酶Dnmt1和Dnmt3a及生殖细胞特征基因Mvh表达变化的DNA甲基化调控机制。方法:将mES细胞分化形成拟胚体(embryoid bodies,EBs)作为向生殖细胞分化的启动步骤,采用不同浓度(0.05μmol/L,0.1μmol/L,0.5μmol/L,1μmol/L,3μmol/L)处理EBs,RT-PCR实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测检测在5-Aza-dC处理前后Dnmt1和Dnmt3a在ES细胞和EBs中的表达,甲基化特异性PCR(MSP)检测原始生殖细胞分化特征基因Mvh启动子甲基化状态。结果:5-Aza-dC的浓度在0.05μmol/L～1μmol/L之间时,EBs保持较高的存活率而EBs的形态明显发生了变化;5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a在EBs中mRNA表达量明显降低,其变化特点与WB结果相一致。MSP和测序结果显示,Mvh启动子区表现为部分甲基化,5-Aza-dC处理后的4d EBs中Mvh CpG岛有4个CG位点发生突变,而mES细胞中未见突变。结论:EBs经5-Aza-dC处理后,Dnmt1和Dnmt3a的表达明显下调;同时,Mvh启动子发生部分甲基化,有可能启动了向生殖细胞的分化进程。
- 秦洁漆正宇张艳敏郭新崔光辉桂耀庭
- 关键词：DNA甲基化拟胚体
- 免疫磁珠法分选小鼠iPS细胞获得原始生殖细胞的初步研究
- 2013年
- 目的 探讨经MACS系统体外分选小鼠诱导性多能干细胞（inducedpluripotentstemcells，iPS）IP14D-1得到纯度较高诱导性原始生殖细胞（inducedprimordialgermcells，iPGCs）的方法，并对其表面标志、形态进行鉴定。方法未分化IP14D-1细胞培养扩增，分化形成iEBs（inducedembryoidbodies，iEBs），以4、7、9d的iEB为研究对象，胰酶消化制成单细胞悬液，用特异性表面抗原Ssea-1（specialstageembryonicantigenI）单抗标记，间接免疫磁珠法分选得到Ssea-1阳性细胞，即为假定iPGCs。采用免疫荧光和碱性磷酸酶染色鉴定假定iPGCs，流式细胞术鉴定MACS分选得到的目的细胞群纯度。结果分选得到的Ssea-1阳性细胞表达PGC特异性表面标志Blimpl和组织非特异碱性磷酸酶（TNAP）；7d的iEB分选获得细胞经扩增后iPGC量较多（83．5％）。结论MACS分选方法可作为获得较纯化的iPGC体外分选体系。
- 张艳敏秦洁漆正宇崔光辉郭新
- 关键词：免疫磁珠分选多能干细胞生殖细胞
