国际科技合作与交流专项项目(2013030409020113)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：李睿毕旺来王宏勋郑冬冬刘志国更多>>
- 相关机构：武汉轻工大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7变种Q蛋白对志贺毒素表达的影响被引量：1
- 2014年
- 1株肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7变种EC169菌株,携带stx基因但不表达志贺毒素。通过高效热不对称交错聚合酶链式反应(high-efficiency thermal asymmetric interlaced polymerase chain reaction,hiTAIL-PCR)hiTAILPCR扩增得到EC169 stx1及其上游核苷酸片段并克隆测序,结果表明:EC169 q基因与标准株sakai q基因相比存在6个SNP位点。通过PCR扩增O157∶H7高毒株EC150 q基因全长,并构建表达载体pkk223-q分别转化EC169和低毒株EC157。反转录荧光定量PCR实验结果表明,外源q基因在EC169和EC157重组菌中可高效表达,并引起EC157stx转录水平上调,但EC169重组菌stx转录水平不变。反向乳胶凝集实验结果亦证实EC157重组菌志贺毒素表达量提高,而EC169重组菌志贺毒素表达量不变。Q蛋白变异可能并非EC169志贺毒素不表达的主要原因。
- 李嘉文郑冬冬王宏勋刘志国余晓丽周帼萍李睿
- 关键词：志贺毒素
- 武汉肉类食品中大肠杆菌O157∶H7分离株stx亚型和毒力特征分析被引量：4
- 2014年
- 从22家市场销售的117份肉类食品中分离出4株大肠杆菌O157∶H7菌株,经PCR检测这4株菌的stx、hly、eae毒力基因均为阳性。采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)法对这4株菌的stx亚型进行鉴定。3株菌同时携带stx1、stx2基因,且均为stx1a、stx2a亚型。菌株EC5.11仅携带stx2基因,但在所有的stx2分型PCR反应中都为阴性。用PCR扩增该菌株stx2基因全长并克隆测序,序列分析结果表明EC5.11志贺毒素基因为stx2c亚型。采用Vero细胞毒性实验检测这4株菌产志贺毒素的状况,结果显示这些菌株都具有一定的Vero细胞毒性。
- 郑冬冬毕旺来王宏勋刘志国丁洪波李睿
- 关键词：志贺毒素
- 食品中大肠杆菌O157∶H7疑似菌株的分离和鉴定研究被引量：2
- 2014年
- 采集117份食品样品,经过PCR扩增毒力基因stx1、stx2和O157特征基因rfbO157初筛。将部分PCR阳性的食品样品,经过新生霉素EC增菌液增菌、免疫磁珠富集、血清学鉴定、菌落PCR复筛,分离出5株O157:H7疑似菌株。其中1株O157∶H7疑似菌株EC5.11不能与O157诊断血清产生良好凝集反应,采用血清学方法该菌容易漏筛。采用PCR扩增rfbO157基因和H7鞭毛抗原编码基因fliCH7,EC5.11均呈阳性反应。最终包括EC5.11在内的4株疑似菌株被证实为O157∶H7血清型。本研究提出了一种改良方法筛选、鉴定食品中O157∶H7疑似菌株,比起传统方法,减少工作量的同时提高了筛选的特异性。
- 杨一群陈洋杜文芳侯斌斌毕旺来李睿
- 关键词：食品血清凝集聚合酶链反应
- 武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌污染状况分析被引量：3
- 2014年
- 目的对武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)污染状况进行分析。方法 2011年7月至2012年10月期间,从武汉市汉口30个菜场和超市共采集样品196份,其中猪肉102份,牛肉60份,禽类34份。通过选择性增菌,提取DNA,PCR扩增stx1、stx2、rfb O157、wzy O157基因,分析食品中产志贺毒素大肠杆菌的污染状况。结果猪肉、牛肉、禽类食品中非O157型STEC的阳性检出率分别为18.6%、48.4%和2.9%;O157型STEC的阳性检出率分别为13.6%(猪肉)、6.7%(牛肉)和2.9%(禽类)。菜场样品STEC检出率(35.8%)略高于超市样品(32.4%)。结论武汉市肉类食品中STEC检出率较高,应定期跟踪监测,了解菌株流行和毒力变化状况。
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- 关键词：产志贺毒素大肠杆菌O157PCR鉴定食源性致病菌
