安徽省自然科学基金(20050430715)
- 作品数：6 被引量：11H指数：3
- 相关作者：凌斌周颖祝怀平程志祥朱园园更多>>
- 相关机构：安徽医科大学附属省立医院安徽省分子医学重点实验室安徽省立医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抑制Her-2基因的表达对NK-92细胞杀伤SKOV3细胞活性影响的研究被引量：1
- 2006年
- 目的:探讨抑制Her-2基因的表达对NK-92细胞杀伤SKOV3细胞活性的影响。方法:Her-2siRNA质粒在脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,将病毒上清转染SKOV3,经嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2基因表达的SKOV3/siRNA-1、SKOV3/siRNA-2细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化法鉴定抑制Her-2表达的效果。应用LDH法检测NK-92细胞对SKOV3、SKOV3/siRNA-1、SKOV3/siRNA-2、SKOV3/siRNA-neg-ative control的杀伤活性。结果:Her-2/siRNA-1、Her-2/siRNA-2均可有效沉默Her-2mR-NA和蛋白的表达。NK-92细胞对SKOV3、SKOV3/siRNA-negative control的杀伤率分别为21%、20%,而对SKOV3/siRNA-1、SKOV3/siRNA-2的杀伤率分别为33%、45%(P<0·05)。结论:抑制Her-2基因的表达可增强NK-92细胞对SKOV3细胞的杀伤活性。RNA干扰技术联合NK-92细胞为高表达Her-2基因卵巢癌的生物治疗提供了一种新的策略。
- 周颖凌斌姚凤球沈国栋冯定庆陈峥峥石永云高婷王梅梅祝怀平
- 关键词：杀伤细胞卵巢癌细胞株
- 靶向Her2基因SiRNA对人卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂敏感性的影响被引量：5
- 2007年
- 目的通过siRNA沉默Her2基因的表达探讨其对卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂(DDP)敏感性的影响。方法靶向Her2的siRNA通过阳离子脂质体介导转染到SKOV-3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2基因表达的SK-OV-3细胞株,通过RT-PCR方法检测各组SKOV-3细胞Her2基因的表达。应用四甲基偶氮唑蓝检测DDP对各组SKOV-3细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白V异-硫氰酸荧光素细胞凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测DDP作用后各组SKOV-3细胞凋亡水平。结果建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株,SKOV3/siRNA-1组和SKOV3/siRNA-2组细胞Her2基因表达分别为对照组的53.8%和38.4%,而空载体组为92.3%。在DDP作用下SKOV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2的细胞存活率在4 d时分别为67.7%±4.4%和66.4%±3.3%,与未转染对照组81.7%±1.3%和空载体组81.3%±1.4%比较差异有显著性(P<0.05)。FCM分析显示SK-OV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2细胞的DDP诱导凋亡率分别为38.6%±1.1%和42.8%±1.4%,明显高于未转染组9.1%±0.8%和空载体组8.8%±0.7%,差异有显著性(P<0.05)。结论靶向Her2基因的siRNA可以增强卵巢癌细胞株SKOV-3对DDP的敏感性。
- 程志祥周颖朱园园肖敏高宗侠祝怀平凌斌
- 关键词：基因,ERBB-2顺铂
- RNAi沉默Her-2基因对卵巢癌细胞SKOV3的动物实验研究被引量：4
- 2006年
- 目的观察细胞株SKOV3/si RNA Her-2基因的沉默作用及生物学效应。方法分别将SKOV3/si RNA及对照组SKOV3种植NOD-SCI D小鼠皮下,监测两组瘤体积,3个月后处死NOD-SCI D小鼠,称瘤质量,并采用RT-PCR方法鉴定抑制Her-2表达的效果。结果建立的抑制Her-2基因表达的SKOV3细胞株(SKOV3/si RNA)成瘤力下降。结论动物实验证实RNAi沉默Her-2基因可影响卵巢癌的成瘤力,RNAi技术有可能成为治疗卵巢癌的新途径。
- 石永云周颖王梅梅冯定庆高婷沈国栋凌斌祝怀平孙新华
- 关键词：HER-2基因RNA干扰卵巢肿瘤
- C-erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的构建并鉴定C-erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体。方法体外合成含针对C-erbB-2特异基因序列的寡核苷酸,并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi-ReadypSIREN-RetroQ。结果构建的重组逆转录病毒载体可以被限制性内切酶MIuI、BamHI、EcoRI切开,电泳可显示相应条带,经测序其序列与设计的一致。结论成功构建了C-erbB-2特异性siRNA逆转录病毒载体pRetroQ/C-erbB-2/siRNA-1、pRetroQ/C-erbB-2/siRNA-2、pSIREN-RetroQ/C-erbB-2/siR-NA-3,为进一步研究p185基因沉默奠定了基础。
- 陈敏祝怀平凌斌周颖朱园园高婷程志祥沈国栋赵卫东冯定庆
- 关键词：C-ERBB-2RNA干扰逆转录病毒载体
- siRNA抑制SKOV-3细胞Her2/neu表达及细胞增殖的动物实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的:通过卵巢癌细胞株SKOV-3细胞增殖及动物荷瘤实验探讨siRNA沉默Her2/neu基因的表达效果。方法:靶向Her2/neu的siRNA经脂质体L ipofectAM INE2000介导转染到SKOV-3中,通过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2/neu基因表达的SKOV-3/siRNA细胞株,通过RT-PCR和免疫组化方法检测Her2/neu基因抑制效果,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组细胞增殖水平并将SKOV-3/siRNA细胞接种到裸鼠皮下检测荷瘤情况。结果:建立了稳定抑制Her2/neu基因表达的细胞株SKOV-3/siRNA,RT-PCR和免疫组化结果显示Her2/neu基因表达受到较强抑制,MTT检测结果显示SKOV-3/siRNA组细胞增殖较SKOV-3明显下调(P<0.05),其接种在裸鼠皮下形成的肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05)。结论:靶向Her2/neu基因的siRNA可以抑制卵巢癌细胞株SKOV-3在体外和体内增殖,有望成为卵巢肿瘤治疗的新途径。
- 程志祥周颖朱园园肖敏高宗侠祝怀平凌斌
- 关键词：HER2/NEU基因RNA干扰
- siRNA靶向Her-2逆转录病毒载体构建及其在SKOV3中的表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建并鉴定Her-2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her-2表达的细胞株。方法体外合成含针对Her-2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAi-ReadypSIREN-RetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her-2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RT-PCR和免疫组化方法鉴定抑制Her-2表达的效果。结果成功构建了重组逆转录病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了SKOV3,并且抑制了Her-2的表达。结论抑制Her-2表达的SKOV3细胞株的建立,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的肿瘤细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础。
- 周颖凌斌高婷陈敏冯定庆程志祥朱园园赵卫东石永云王梅梅祝怀平
- 关键词：HER-2RNA干扰逆转录病毒载体
