国家自然科学基金(81100514)
- 作品数：4 被引量：17H指数：3
- 相关作者：周建华杨凤杰张瑜吕倩影陈瑜更多>>
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- 亚溶量C5b-9可诱导足细胞的保护性自噬应答被引量：4
- 2015年
- 目的:通过亚溶量补体C5b-9(s C5b-9)攻击足细胞的离体模型,探讨自噬在免疫介导足细胞损伤过程中的作用。方法:建立s C5b-9攻击足细胞体外模型,采用单丹磺酰尸胺(MDC)染色标记自噬泡,瑞氏-吉姆萨染色光镜下观察细胞形态,免疫荧光检测nephrin的表达及分布,Western blotting检测LC3-II和LC3-I的表达,MTT法检测细胞存活率,Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果:成功建立s C5b-9攻击足细胞体外模型,将细胞溶破率≤5%定义为亚溶量攻击。MDC染色和自噬标志LC3-II的检测均显示造模后48 h足细胞的自噬活动明显活跃。抑制自噬可明显加重s C5b-9所致的足细胞形态异常。s C5b-9攻击可使足细胞nephrin的表达量明显减少,并且异常分布,而抑制自噬可进一步下调nephrin的表达。抑制自噬可促进s C5b-9所诱导的足细胞凋亡。结论:s C5b-9可直接诱导足细胞自噬活动增强,而自噬则在s C5b-9介导的足细胞损伤过程中发挥着保护作用。
- 吕倩影周建华杨凤杰蒲金赟张瑜
- 关键词：自噬足细胞
- 雷帕霉素通过激活自噬减轻亚溶量补体诱导的足细胞黏附损伤
- 2014年
- 目的 观察雷帕霉素对亚溶量补体C5b-9（sublytic C5b-9,sC5b-9）所致足细胞黏附损伤的影响,并探讨细胞自噬在其中的作用.方法 建立sC5b-9攻击足细胞体外模型,采用透射电镜观察足细胞自噬泡形成,罗丹明标记鬼笔环肽（rhodamine phalloidin）染色后激光共聚焦显微镜下观察细胞骨架蛋白F-actin的分布及细胞形态,细胞黏附实验评价足细胞黏附能力,Western印迹检测微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein l light chain 3,LC3）Ⅰ型（LC3-Ⅰ）和Ⅱ型（LC3-Ⅱ）的表达,流式细胞术检测整联蛋白α3的表达.结果 （1）成功建立sC5b-9攻击足细胞体外模型,将细胞溶破率≤5％定义为亚溶量攻击;（2）透射电镜和自噬标志LC3-Ⅱ的检测均显示造模后48 h足细胞的自噬水平明显增强;（3）3-甲基腺嘌呤抑制自噬可明显加剧sC5b-9所致的足细胞黏附能力下降及细胞骨架病变,但对整联蛋白α3的表达无明显影响;（4）雷帕霉素干预可显著改善sC5b-9所致的足细胞黏附能力受损及细胞骨架破坏;（5）雷帕霉素明显增强sC5b-9所诱导的足细胞自噬.结论 雷帕霉素可通过增强自噬的途径直接改善亚溶量补体所诱导的足细胞黏附损伤.
- 吕倩影周建华陈瑜杨凤杰蒲金赟张瑜
- 关键词：自噬足细胞西罗莫司
- 足细胞自噬在被动Heymann肾炎发病中的作用被引量：9
- 2014年
- 目的通过膜性肾病经典的动物模型被动Heymann肾炎（PHN），探讨足细胞自噬在膜性肾病病变过程中的作用，以及自噬激活可能的细胞内机制。方法SPF级健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为5组即对照组、PHN2d组、PHN4d组、PHN7d组、PHN21d组，建立大鼠PHN模型。采用透射电镜观察足细胞形态和自噬泡，Weibel-Gomez点计数法计数单个肾小球足细胞数量，免疫组织化学染色检测肾小球内膜攻击复合物C5b-9的沉积与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3的表达，原位缺口末端标记（TUNEL）法检测肾小球内细胞凋亡，Western印迹法检测肾小球自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（microtubule．associatedprotein1lightchain3，LC3）、葡萄糖调节蛋白（GRP）78、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（phosphorylatedproteinkinaseR-likeERkinase，P．PERK）、磷酸化C．Jun氨基末端激酶（phosphorylatede．iunaminoterminalkinase，P-JNK）、活化转录因子6q（activatingtranscriptionfactor6a，ATF6ct）的表达。结果（1）造模后第4天起即可在肾小球内观察到C5b．9沿基底膜呈线状沉积。同时，透射电镜下可见上皮下少许颗粒状电子致密物沉积及足突融合，病变随时间呈加重趋势，至第21天可见典型膜性肾病改变。此外，尿蛋白定量结果显示，造模第3天起尿蛋白量即有明显升高，至第21天时可高达（50．6±6．0）mg／24h。（2）造模后第21天单位肾小球足细胞绝对数目较对照组显著下降（P〈0．05）。（3）caspase-3表达和TUNEL染色结果一致显示，造模后第21天肾小球内可检出凋亡的足细胞。（4）透射电镜和自噬标志LC3Ⅱ的检测结果均显示，造模后第7天和第21天足细胞的自噬水平均显著升高，但第21天LC3Ⅱ的表达较第7天有所回落。（5）造模后第2天即可检出GRP78高表达，至第7天时显著升高，而病变后期（第21天）又有所回落；同时，�
- 杨凤杰周建华吕倩影蒲金赟张瑜
- 关键词：自噬足细胞肾小球肾炎膜性内质网应激
