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SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化被引量：5: 2012年; [目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化。[方法]采用L16(45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序。[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer2.0μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.25mmol/L,上下游引物各0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U;退火温度为68℃,最佳循环数为12。此反应系统下,随机ssDNA文库PCR扩增谱带清晰、稳定、特异性高。[结论]为SELEX技术中筛选到特异性更强的适配子奠定了基础。; 曹立亭许李丽万向王秋菊马跃; 关键词：正交试验设计 PCR

川续断水煎液对小鼠非特异性免疫功能的影响被引量：1: 2021年; 为探讨川续断水煎液对小鼠非特异性免疫功能的影响。40只昆明系健康小白鼠随机分为5组,每组8只,分别灌胃不同剂量终浓度为2 g·mL^(-1)的川续断水煎液(按体质量分别为10、20、30和40 g·kg^(-1)),连续灌胃7d,空白对照组灌胃等体积的生理盐水。通过对给药前后平均日增重、胸腺脾脏组织病理变化、巨噬细胞吞噬活性和血清溶血素等指标的检测,评价其对动物机体非特异性免疫功能的调节作用。结果显示,与空白对照组相比,灌胃川续断水煎液后能不同程度地提高试验各组小鼠平均日增重,各剂量组日增重率分别为9.8%、29.2%、24.4%和24.3%;可显著提高小鼠脾脏和胸腺指数(P<0.05),对小鼠免疫组织有明显促进作用,脾脏中央动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞密集,胸腺皮质与髓质分界清晰且胸腺细胞增多;极显著增强小鼠廓清指数(P<0.01),显著增强吞噬指数及血清溶血素水平(P<0.05)。提示川续断水煎液可增强小鼠的非特异性免疫功能。; 周炳鑫张雷李颜桃马跃马跃; 关键词：小鼠脏器指数血清溶血素非特异性免疫

奶牛结合珠蛋白核酸适配体的筛选及鉴定被引量：1: 2016年; 核酸适配体作为一种优于单克隆抗体的新型识别分子,具有更高的分辨率,能识别配体间一个基团的细微差别,且所需的结合活性位点更小。本研究利用指数级富集配体进化技术(SELEX)筛选特异性结合于奶牛结合珠蛋白(HP)的DNA适配体,并对筛取的适配体进行特性分析。体外构建全长80bp中间含40bp随机序列的单链DNA(ssDNA)文库,通过对循环次数、退火温度及引物比例的优化,建立了适合的筛选体系;以超滤离心管为介质,HP蛋白为靶标,对随机ssDNA文库进行反复的SELEX筛选,从单链DNA文库中筛选能特异性结合HP蛋白的核酸适配体;利用DNAMAN和RNAstructure软件对获得核酸适配体进行一级结构和二级结构分析。结果表明,经过体外8轮筛选,随机ssDNA文库与HP蛋白的结合率由1.86%上升到31.35%,特异性核酸达到最大富集;经克隆和测序,获得了能与HP蛋白特异性结合的5个家族的DNA适配体,同源性均达70%以上,RNAstructure分析其二级结构主要以茎环结构为主,表明ssDNA形成不同的茎环结构可能是适配体与HP蛋白特异性作用的结构基础。初步建立HP蛋白核酸适配体库,筛选到与HP蛋白特异性结合的核酸适配体,为制备以HP为检测靶标的奶牛隐性乳腺炎检测试剂盒奠定基础。; 曹立亭黎春秀文露婷罗艺晨马跃仲崇华; 关键词：奶牛乳腺炎结合珠蛋白 SELEX

后海穴注射黄芪多糖对脾虚泄泻犬的治疗效果被引量：4: 2015年; 32只健康本地犬饲养1周后按体质量灌胃番泻叶水煎剂6 m L/kg人工复制脾虚泄泻证病理模型,造模成功后随机分为4组:黄芪多糖治疗组后海穴注射黄芪多糖注射液0.25 m L/kg,2次/d;硫酸庆大霉素治疗组后海穴注射硫酸庆大霉素注射液0.2 m L/kg,2次/d;后海穴针刺组后海穴注射生理盐水0.25 m L/kg,2次/d;病理对照组不作任何处理;同时设立4头健康犬作为空白对照,造模期间灌胃生理盐水。用药后治疗期间测定试验犬只的体质量、三大临床指标、部分血液指标和脾脏指数,并统计分析。结果表明,黄芪多糖治疗组血红蛋白、红细胞水平在较短时间内恢复正常,脾脏指数显著(P<0.05)高于硫酸庆大霉素治疗组;硫酸庆大霉素治疗组白细胞降低速度极显著(P<0.01)快于黄芪多糖治疗组。这表明后海穴注射黄芪多糖注射液可以用于治疗犬脾虚泄泻证。; 曹立亭彭代国马跃周晏丞牛晓艺仲崇华; 关键词：黄芪多糖注射液硫酸庆大霉素注射液后海穴脾虚泄泻

川续断水煎剂对小鼠血清中免疫球蛋白和细胞因子的影响被引量：7: 2019年; 为探究川续断水煎剂对小鼠血清中免疫球蛋白(lmmunoglobulim,lg)和细胞因子的影响,评估其对动物机体免疫功能的调节作用。将40只昆明系健康小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只,分别按体质量灌胃10 g/kg·bw、20 g/kg·bw、30 g/kg·bw、40 g/kg·bw终浓度为2 g/mL的川续断水煎剂和生理盐水,连续给药7 d。于末次给药后第7天无菌操作摘除眼球取血分离血清,测定小鼠血清中免疫球蛋白和细胞因子水平。结果显示,与对照组相比,灌服不同剂量的川续断水煎剂均能显著提高小鼠血清中IgA和IgM水平(P<0.05),不同程度地提高IgG的水平;显著升高小鼠血清中IL-2、INF-γ和TNF-α水平(P<0.05),显著降低IL-4和IL-10水平(P<0.05)。表明川续断水煎剂可升高小鼠血清中免疫球蛋白水平,同时能增强血清中Th1类细胞因子水平,降低Th2类细胞因子的水平,提示川续断可增强动物机体的非特异性免疫功能。; 李颜桃张雷张明璀王婷婷王婷婷马跃马跃; 关键词：小鼠免疫球蛋白细胞因子

补中益气丸与硫酸庆大霉素治疗犬脾虚泄泻证的比较研究被引量：2: 2016年; 本试验探讨口服补中益气丸对犬脾虚泄泻证的临床治疗效果.24只健康本地犬饲养1周后,灌胃番泻叶水煎剂(3g/kg·体质量,2次/d)人工复制脾虚泄泻证病理模型,造模成功后随机分为3组:补中益气丸组灌胃补中益气丸3g/kg·体质量,2次/d;硫酸庆大霉素组肌肉注射硫酸庆大霉素注射液10 000IU/kg·体质量,2次/d;病理对照组不作任何处理;同时设4头健康犬作为空白对照,造模期间灌胃生理盐水.治愈后测定试验犬三大生理指标、部分血液生化指标及脾脏指数.结果表明:补中益气丸灌胃后第4d治愈率达100%,肌注硫酸庆大霉素治疗后第5d治愈率为87.5%;补中益气丸治愈后白细胞、红细胞、血红蛋白恢复较快,与硫酸庆大霉素治疗组相比较差异不具有统计学意义(p>0.05);脾脏指数和日增质量显著高于硫酸庆大霉素治疗组(p<0.05).说明灌胃补中益气丸治疗犬脾虚泄泻证的效果优于硫酸庆大霉素.; 曹立亭彭诗彭代国马跃仲崇华; 关键词：补中益气丸硫酸庆大霉素脾虚泄泻

养殖环境中耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌gyrA基因的检测与序列分析被引量：2: 2014年; 该文探讨从养殖场动物、环境、饲养员等分离的大肠杆菌耐氟喹诺酮类药物的靶位基因gyrA突变特征.对养殖环境中分离的8株大肠杆菌进行临床常用氟喹诺酮类药物的耐药性分析、PCR扩增gyrA基因并测序,并采用DNASTAR软件对gyrA基因的氟喹诺酮耐药决定区进行生物信息学分析.结果表明:养殖场环境中分离的菌株编号为1,6和8的3株大肠杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星敏感,菌株2,3,4,5和7的5株大肠杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星耐药;氨基酸序列分析发现,敏感菌株氨基酸位点未发生突变或83位发生单突变;耐药菌株的突变发生在83位Ser→Leu替代和87位Asp→Asn替代,且发生氨基酸双替代的菌株均为高度耐药菌株.表明不同来源的耐氟喹诺酮类药物的大肠杆菌gyrA基因的氨基酸变异具有多种类型,该研究将更好地诠释养殖场大肠杆菌的氟喹诺酮类耐药机制.; 曹立亭周晏丞仲崇华陈鑫马跃; 关键词：大肠杆菌氟喹诺酮类药物耐药性 GYRA基因

SELEX技术中ssDNA文库PCR扩增条件的优化(英文): 2012年; [目的]对SELEX技术中ssDNA文库的PCR扩增条件进行优化。[方法]采用L16(45)正交试验设计在4个水平上对影响单链随机DNA文库PCR反应体系的Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶含量、引物浓度和随机单链DNA文库量5个重要因素进行了优化,同时对PCR反应的退火温度和循环次数进行了优化,确立最优反应体系和扩增程序。[结果]20μlPCR反应体系及反应程序中各因素优化组合为:10×Buffer2.0μl,随机ssDNA文库0.5ng,Mg2+2.5mmol/L,dNTP Mixture0.25mmol/L,上下游引物各0.6μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5U;退火温度为68℃,最佳循环数为12。此反应系统下,随机ssDNA文库PCR扩增谱带清晰、稳定、特异性高。[结论]为SELEX技术中筛选到特异性更强的适配子奠定了基础。; 曹立亭许李丽万向王秋菊马跃; 关键词：正交试验设计 PCR

不同免疫途径对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响被引量：4: 2013年; 为探讨不同免疫接种途径对鸡新城疫(ND)弱毒疫苗免疫效果的影响,我们将健康1日龄海兰蛋公鸡雏鸡(48只)随机分为滴鼻免疫组、肌肉注射免疫组、后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组,每组12只。分别于第14日龄和28日龄接种新城疫IV系弱毒苗(LaSota株)1羽份/只,后海穴半剂量免疫组接种0.5羽份/只。分别于免疫前和免疫后7、14、21d和28d称重,无菌操作采血,分离血清,检测血清中的血凝抑制效价(HI)。结果显示:与常规途径免疫组相比,后海穴常规剂量免疫组和后海穴半剂量免疫组可显著增强鸡血清NDV特异性HI效价(P<0.05),且显著提高试验鸡只的日增重(P<0.05);滴鼻免疫组与肌肉注射免疫组相比,虽然增加了HI效价,但统计学比较差异不显著(P>0.05)。试验结果说明后海穴接种鸡新城疫疫苗可显著提高鸡血清NDV的HI效价,提高鸡生产性能,同时节约疫苗用量。; 许李丽周晏丞杨凡李佳鸿曹立亭; 关键词：新城疫疫苗滴鼻免疫免疫效果

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博士科研启动基金(09BSR04)

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