国家科技重大专项(2009ZX10004-711)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：郭晏海颜真雷小英孙建斌毕胜利更多>>
- 相关机构：第四军医大学中国疾病预防控制中心美国波士顿大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 多瘤病毒样颗粒的制备及血清学检测方法的建立
- 2013年
- 目的制备多瘤病毒(John Cunningham virus,JCV)病毒样颗粒并建立JCV血清学检测方法,了解我国一般人群JCV流行情况。方法通过基因合成技术合成JCV衣壳蛋白基因VP1,将其克隆至PET-21a质粒,转化BL21(DE3)大肠埃希菌,IPTG诱导表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白表达。采用2次超速离心法对目的蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE、透射电子显微镜及血凝试验鉴定纯化产物。以纯化产物为抗原建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法,筛查一般人群血清标本,分析该人群JCV感染情况。结果通过透射电子显微镜观察及血凝试验鉴定,显示纯化产物具有和天然JCV颗粒类似的形态结构和血凝活性。以纯化的JCV病毒样颗粒为抗原建立了间接ELISA法,筛查了一般人群抗JCV IgG抗体,结果显示一般人群抗JCV IgG抗体阳性率为54.2%。结论本研究制备了JCV病毒样颗粒,所建立的ELISA法可应用于JCV人群血清流行病学调查。
- 赵洪兰刘熙君徐承富王岳江永珍宋敬东毕胜利
- 关键词：多瘤病毒病毒样颗粒酶联免疫吸附试验血清学检测
- 纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人绒毛膜促性腺激素被引量：7
- 2011年
- 目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法研制用于早孕检测的快速定量层析试纸条。方法:应用EDC/NHS法标记纳米磁珠、Biodot喷膜仪喷点NC膜、双抗体加心法建立免疫层析试纸条、对磁信号进行检测并与ELISA实验做对比,并对结果进行评价。结果:建立了HCG纳米磁性免疫层析试纸条,检测到底线为1miu/ml的HCG抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准;用此方法与商品化免疫胶体金试纸条对临床样本进行检测,检测符合率达99%,与ELISA法比较符合率达100%,且检测时间控制在5min以内。结论:该方法简单快速,灵敏度高,不仅可以应用于HCG的检测,同时为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。
- 孙建斌雷小英包晗汪钦刘永兰郭晏海颜真杨静华
- 关键词：磁性纳米颗粒免疫层析HCG
- 戊型肝炎病毒诊断抗原的克隆表达及抗原性初步鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的 克隆、表达与纯化硫氧还原蛋白-戊型肝炎病毒（HEV）诊断抗原（命名为N5）,并对其抗原性和血清学检测效果初步评价。方法 根据GenBank上HEV-ORF2以及ORF3羧基端的基因序列,按照大肠埃希菌密码子偏好表进行密码子优化,全基因合成后插入M48原核表达载体中,在大肠埃希菌中表达融合硫氧还蛋白的融合蛋白N5。并利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,用Western blot技术评价其抗原性,并利用实验室和临床检测确定的HEV感染阴、阳性血清评价其血清学检测效果。结果 成功构建表达N5诊断抗原的重组质粒;高水平表达并纯化获取纯度高、浓度大的可溶性诊断抗原;Western blot结果显示融合蛋白N5可与HEV IgM抗体阳性血清特异性结合,具有良好的抗原性;以融合蛋白N5作为捕获抗原,建立间接ELISA,对病原检测和临床诊断确诊的40份戊型肝炎病例血清和40份健康人血清进行检测,其灵敏度和特异度分别为95%（38/40）和90%（36/40）。结论 成功构建了可表达融合硫氧还蛋白的HEV诊断抗原的重组质粒,并获得表达量高、抗原性强的可溶性融合蛋白N5,可应用于HEV血清学诊断,且有良好的应用前景。
- 万李苏秋东伊瑶毕胜利管茶香
- 关键词：戊型肝炎病毒血清学检测
- 纳米磁性颗粒标记的免疫层析法定量检测人乙型肝炎表面抗原被引量：4
- 2012年
- 目的:应用纳米磁性颗粒标记的免疫层析法,研制可应用于乙肝表面抗原(HBsAg)快速定量检测的层析试纸条。方法:用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)交联的方法标记纳米磁珠,喷膜仪喷点硝酸纤维膜;根据双抗体夹心法原理建立免疫层析试纸条,对HBsAg特异性抗体捕获的磁信号进行检测,并对磁信号检测结果进行统计学分析和评价。结果:建立了HBsAg纳米磁性免疫层析试纸条,最低限度检测为0.1 ng/mL的HBsAg抗原,检测灵敏度达到了同类产品ELISA分析法的标准,且检测时间控制在5 min内;经检测临床血清标本证实,该方法可根据磁信号定量检测乙肝患者血清中HBsAg的浓度。结论:HBsAg纳米磁性免疫层析方法具有简单快速、灵敏度高的特点,可应用于临床血清样本中HBsAg的检测;该方法为体内极微量抗原抗体的快速检测建立了新模式。
- 孙建斌王伟华雷小英郭晏海颜真杨静华
- 关键词：磁性纳米颗粒免疫层析乙肝表面抗原
