国家自然科学基金(30340073)
- 作品数：6 被引量：19H指数：2
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- 相关机构：山东省寄生虫病防治研究所滨州医学院滨州医学院附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧基酶诱导小鼠细胞和体液免疫应答被引量：1
- 2008年
- 目的检测结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法选清洁级BALB/c小鼠60只,随机分为两组,实验组和对照组。实验组每只小鼠用表达的PEPCK融合蛋白10μg加弗氏不完全佐剂进行腹腔免疫注射,对照组小鼠仅用弗氏不完全佐剂注射。每隔2w免疫1次,共免疫3次。末次免疫2w后,分别取小鼠脾脏、血清,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞,MTT法检测淋巴细胞对刺激的应答水平,ELISA检测血清各种细胞因子及抗PEPCK抗体。结果实验组小鼠的脾脏明显大于对照组小鼠的脾脏,且粘连严重,CD4+T细胞增殖明显(73.5±3.69),CD4+/CD8+比值显著升高(5.1±0.98)(P<0.01);且淋巴细胞的应答能力明显强于对照组小鼠;实验组小鼠血清中IFN-γ、IL-12和TNF-α明显高于对照组,血清抗体滴度随免疫次数逐步增高。结论结核杆菌PEPCK能够有效的刺激机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应,尤以细胞免疫反应为主,是很好的抗结核候选疫苗分子之一。
- 柏雪莲魏庆宽李瑾韩广东崔勇刘克义
- 关键词：结核杆菌细胞免疫反应体液免疫反应
- 敲除pck A基因的结核杆菌引起的免疫反应的研究被引量：4
- 2005年
- 研究结核杆菌pckA基因编码的磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)诱导机体产生的保护性免疫反应。用敲除pckA基因的牛结核杆菌BCG和野生型BCG分别感染小鼠,取肝、肺、脾进行病理分析,并进行脾细胞培养,检测CD4+、CD4+/CD8+、细胞因子IFNI-γI、L-12和TNF等。用敲除pckA基因的BCG感染的小鼠比野生型BCG感染的小鼠体内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低。野生型BCG感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+、细胞因子IFN-γ、IL-12、TNF均明显高于敲除pckA基因BCG感染的小鼠。pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,是一种很好的疫苗候选分子。
- 柏雪莲刘克义于进芝李桂萍李瑾魏庆宽韩广东崔勇
- 关键词：结核杆菌细胞因子免疫反应
- 结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究被引量：2
- 2009年
- 目的初步研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)的免疫作用。方法用敲除pckA基因的卡介苗(BCG△pckA)和野生型卡介苗(BCG-WT)分别感染小鼠,取肺脏进行病理分析;取脾脏用流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞、CD4+/CD8+,酶联免疫吸附试验检测IL-12;取脾脏进行结核杆菌的培养,比较两组菌落数量。结果BCG△pckA感染的小鼠比BCG-WT感染的小鼠肺脏内产生的结核结节少且不典型,炎性程度低;BCG-WT感染的小鼠脾脏内的CD4+T细胞和CD4+/CD8+及IL-12滴度明显高于BCG△pckA感染的小鼠;BCG△pckA株形成菌落的数量明显低于BCG-WT株形成菌落的数量。结论pckA基因为结核杆菌生长所必需,其编码产物PEPCK能够刺激机体产生免疫反应,可能是一种很好的疫苗候选分子。
- 柏雪莲王志强刁兴华张珍刘春会郭立东
- 关键词：结核杆菌免疫保护
- 血清学诊断中结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶的应用被引量：2
- 2008年
- 【目的】在原核系统中表达结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate car-boxykinase PEPCK),并研究该蛋白在诊断结核病人血清抗体中的应用价值。【方法】应用基因重组技术表达重组蛋白结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶,经亲和层析法纯化表达产物。用表达的重组蛋白免疫小鼠,研究其免疫学特性。间接酶联免疫吸附试验(Enzyme link immunosorbent assay,ELISA)检测结核病人血清中特异性IgG抗体,并与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒检测结果对比。【结果】试验表明转化入大肠杆菌中的重组质粒能够表达并纯化出相对分子量为72kDa的重组蛋白;Western blot证实重组蛋白能够与小鼠抗BCG血清发生特异性反应;重组蛋白免疫小鼠后,小鼠血清中的抗体滴度可达1:1280以上;重组蛋白用作ELISA包被抗原检测病人血清阳性率为17.3%(30/173),其中排菌病人的阳性率为32.5%(13/42),不排菌病人的阳性率为12.9%。该方法结果与结核杆菌抗体胶体金法诊断试剂盒的检测结果相比,敏感性为51.0%,特异性为96.7%。【结论】结核杆菌PEPCK具有较好的免疫原性和抗原性,有可能作为结核病血清学诊断的一组抗原之一。
- 柏雪莲魏庆宽李瑾李桂萍
- 关键词：结核杆菌血清学诊断酶联免疫吸附试验
- 结核分枝杆菌感染中一些重要免疫细胞和细胞因子作用的研究进展被引量：13
- 2006年
- 柏雪莲傅斌刘克义
- 关键词：结核分枝杆菌感染细胞因子免疫细胞TUBERCULOSISCD8T细胞慢性传染病
- 结核杆菌PEPCK表达及保护性免疫反应效果
- 2009年
- 目的研究结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(PEPCK)的表达,并观察此融合蛋白使机体产生的保护性免疫反应。方法将含有结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(pckA)基因的重组质粒转化大肠埃希菌HB101.,表达出融合蛋白PEPCK,并进行蛋白质印迹(Western blot)分析;选BALB/c小鼠60只,随机分为实验组和对照组。实验组每只小鼠用表达的PEPCK10μg加弗氏不完全佐剂进行腹腔免疫注射,对照组小鼠仅用弗氏不完全佐剂注射。每隔2周免疫1次,共免疫3次。末次免疫2周后,分别取小鼠脾脏、血清,检测CD4+T细胞和CD8+、T细胞及各细胞因子。结果成功表达出融合蛋白PEPCK,并能够与小鼠抗卡介苗(BCG)血清反应;实验组小鼠的脾脏明显增大,粘连严重;CD4+T细胞增殖明显(73.5±3.69),CD4+/CD8+比值显著升高(5.1±0.98)(P<0.01);血清中γ干扰素(IFN-γ)、白介素12(IL-12)和α肿瘤坏死因子(TNF-α)均有不同程度的升高。结论PEPCK能够诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,是很好的抗结核疫苗候选分子之一。
- 柏雪莲魏庆宽李瑾李桂萍韩广东崔勇刘克义
- 关键词：结核杆菌免疫保护
