湖北省国际科技合作项目(2009BFA012)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 相关作者：郑新民刘西梅肖红卫乔宪凤李莉更多>>
- 相关机构：湖北省农业科学院西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省国际科技合作项目农业部全国畜牧总站动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室开放课题国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 体外生产猪原核期胚胎的初探被引量：1
- 2011年
- 初步研究了在体外生产猪的原核期胚胎。结果表明:将在体外成熟培养44 h的卵母细胞移植入发情当日的母猪体内,同时进行人工授精,受精后16 h冲出胚胎,获得同期原核期胚胎的效率最高,可以降低多精入卵的发生率。
- 肖红卫郑新民刘西梅乔宪凤李莉张立苹张立苹华文君毕延震周荆荣
- 关键词：卵母细胞体外成熟原核胚胎
- 体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究
- 2013年
- 以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率(82.35%和79.07%)差异不显著(P>0.05);体外培养42～44 h卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率(81.11%和76.80%)差异不显著(P>0.05);将卵周间隙注射法构建重构胚在0～1 h,2～4 h和6～8 h进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率(75.61%和83.07%)无显著差异(P>0.05),但显著高于第3组(60.00%)的卵裂率(P<0.05).
- 华再东刘西梅毕延震华升郑新民
- 关键词：供核细胞
- 用乙醇激活与电激活研究猪卵母细胞孤雌激活
- 2012年
- 以猪的体外成熟卵母细胞为实验材料,研究了乙醇激活、电激活对猪成熟卵母细胞体外孤雌发育的影响。结果表明,2个1.6 kV/cm的60μs的电激活法卵裂率高(88.68%,94/106);使用8%乙醇处理10 min的卵裂率为84.21%(64/76)。2个1.6 kV/cm的60μs的电激活法可以获得更高的卵裂率,为下一步研究奠定基础。
- 肖红卫郑新民刘西梅乔宪凤李莉张立苹华文君毕延震华再东
- 关键词：卵母细胞孤雌激活电激活
- 不同长度茎部shRNA表达载体构建与鉴定
- 2010年
- 本研究针对同一目的基因设计构建不同茎部长度的shRNA表达载体,并对其在细胞及胚胎水平的干扰效应做一比较。以绿色荧光蛋白基因为沉默效应的靶基因,设计茎部长度分别为21bp、27bp、29bp的干扰片段,退火后连入带有H6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中(分别命名为EGFP-21siRNA、EGFP-27siRNA和EGFP-29siRNA),将构建成功的载体以脂质体法转染小鼠胚胎成纤维细胞,利用荧光定量PCR对其荧光表达进行精确定量。不同茎部长度的shRNA载体均使绿色荧光蛋白基因表达降低,茎部为29bp时比21bp、27bp表现出更明显的沉默效应。细胞水平沉默效应的初步验证,为筛选适合小鼠个体水平的最佳发夹结构奠定了基础。
- 刘中华乔宪凤肖红卫刘西梅王华岩郑新民
- 关键词：基因沉默SHRNA绿色荧光蛋白小鼠荧光定量PCR
- 两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应
- 2010年
- 目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。
- 肖红卫刘中华刘西梅郑新民乔宪凤李莉
- 关键词：SHRNA表达载体EGFP基因沉默效应干扰质粒PEGFP-C1脂质体转染
- 采用真空泵法快速获取猪卵母细胞被引量：1
- 2011年
- 试验比较了真空泵法与传统的手动抽吸法对猪卵母细胞成熟效果的影响,结果表明,真空泵法在平均使用时间、卵母细胞的收集效率及A、B级卵母细胞所占的比例方面均优于手动抽吸法,在卵母细胞的成熟率方面稍低于手动抽吸法。表明真空泵法是一种有效的猪卵母细胞采集方法。
- 肖红卫郑新民刘西梅乔宪凤李莉张立苹华文君毕延震华再东周荆荣
- 关键词：猪卵母细胞体外成熟
