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单核细胞增生李斯特菌与志贺菌双重实时PCR检测技术的建立被引量：1: 2008年; 目的建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生（单增）李斯特菌（Listeria monocytogenes）与志贺菌（Shigella）同步检测方法。方法分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针。构建重组质粒pGEM—T—hly与pGEM—T—ipaH，并以EcoRⅠ单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品。优化反应体系，分析特异性。双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测。结果成功构建了重组质粒标准品，并运用5’、3’端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5’、3’端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法。结论建立的方法有较强的特异性，线性范围好（10^5～10^1 copies／ul，R^2≥0．998），灵敏度为10copies／PCR，同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为10^2CFU／ml。; 徐伟李素芳刘军胡巅; 关键词：单核细胞增生李斯特菌志贺菌食品检测

PCR技术检测单核细胞增生李斯特氏菌研究进展被引量：12: 2008年; 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是危害公共卫生和食品行业的一种重要人畜共患病致病菌。PCR技术是近年来被广泛地运用到食源性致病菌快速检测的分子生物学方法之一。就PCR技术检测单核细胞增生李斯特氏菌中的特异性鉴别基因、模板DNA制备等关键因素及多重PCR、巢式PCR、反转录PCR与定量PCR等主要技术进行了综述。; 徐伟李素芳刘军; 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌 PCR检测毒力基因多重PCR 定量PCR

单增李斯特菌与志贺氏菌多重PCR检测技术的建立被引量：22: 2009年; 目的:为食品、卫生行业提供一种简便、灵敏、快速,并且特异性强的单增李斯特菌(Listeria monocyto-genes)与志贺氏菌(Shigella)多重PCR检测方法。方法:根据单增李斯特菌转录调节子基因prfA、志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH筛选出引物;优化多重PCR的引物浓度、退火温度及Mg2+等条件,分析单一PCR及多重PCR的特异性、灵敏度;结合24h增菌培养,确定多重PCR检测人工污染脱脂灭菌乳的检出限。结果:多重PCR扩增出了预计的PCR产物,即单增李斯特菌(274bp)和志贺氏菌(421bp)。该方法的灵敏度:78pg单增李斯特菌基因组DNA、7.5pg志贺氏菌基因组DNA。多重PCR检测人工污染脱脂灭菌乳,单增李斯特菌与志贺氏菌的灵敏度分别为2cfu/25mL和1.6cfu/25mL。结论:该方法在食品、卫生行业具有很好的应用和开发前景。; 徐伟刘军李素芳; 关键词：多重PCR 单增李斯特菌志贺氏菌食品检测

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浙江省科技厅新苗人才计划(2007G60G2080005)