国家自然科学基金(30860100)
- 作品数：7 被引量：34H指数：4
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- 降钙素基因相关肽抑制动脉损伤后NF-κB表达及其对新生内膜增殖的作用被引量：2
- 2014年
- 目的通过降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)处理血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和颈动脉损伤大鼠模型,探讨NF-κB在CGRP调节VSMCs表型改变和动脉损伤后新生内膜增殖中的作用。方法建立颈动脉损伤大鼠模型,并分为对照组和CGRP组(n=24),通过HE染色观察新生内膜形成情况,并Western blot检测两组动物损伤动脉中NF-κB p65蛋白表达情况。以组织块贴壁培养法获得VSMCs,并分为对照组、IL-1β组(给予IL-1β处理)、CGRP组(给予IL-1β+CGRP处理)和CGRP8-37组(在IL-1β+CGRP基础上,加CGRP8-37)(n=24),Western blot法检测细胞内NF-κB p65蛋白和细胞表型标志蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖能力。结果①对照组大鼠的颈动脉损伤后7 d时新生内膜明显增加,至28 d时基本稳定,而CGRP组7 d和28 d时新生内膜面积较对照组同时间点显著降低[7d:(2.09±0.26)vs(3.76±0.33);14 d:(3.52±0.41)vs(6.38±0.61),P<0.05];且与对照组比较,CGRP组1周时NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而28 d时两组NF-κB p65表达水平无差异(P>0.05)。②在体外培养VSMCs中,IL-1β处理显著激活细胞NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),伴随着VSMCs收缩表现标志蛋白SMα-actin表达减少和OPN表达增加(P<0.05);同时再给予CGRP处理后,则显著减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且使VSMCs合成表现标志蛋白OPN表达减少。RT-PCR分析获得相一致的结果。同时,CGRP显著抑制IL-1β引起的VSMCs增殖。③CGRP受体阻断剂CGRP8-37可以阻断CGRP减弱IL-1β诱导的NF-κB p65蛋白表达作用,并抑制CGRP对VSMC表达蛋白调节作用。结论 CGRP与受体结合后抑制NF-κB激活,促进VSMCs分化标志基因表达,从而抑制细胞增殖,降低动脉损伤后新生内膜增殖,这对于防治动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄可能具有重要应用价值。
- 赵然尊龙仙萍刘志江盛瑾王冬梅石蓓
- 关键词：表型改变降钙素基因相关肽核因子-ΚB
- 重组人RAMP-1基因腺病毒载体的构建及鉴定被引量：5
- 2010年
- 目的构建携带人受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒表达载体,为进一步深入研究RAMP1的功能奠定基础。方法通过基因工程技术将RAMP1基因克隆到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I双酶切穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,将回收的GFP-CMV-RAMP1片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后应用脂质体法转染293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-RAMP1并进行PCR鉴定及滴度测定。结果构建的重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1双酶切后,得到0.8kb(RAMP1)和5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)两个片段;重组腺病毒质粒pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1用XhoI酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒Ad-RAMP1 PCR鉴定可见阳性扩增条带;病毒滴度检测达4.5×1011PFU/ml。结论成功构建了携带人RAMP1基因的重组腺病毒载体,为进一步研究RAMP1的功能研究奠定了基础。
- 石蓓宋付凯赵然尊刘志江龙仙萍盛瑾
- 关键词：EGFP腺病毒表达载体基因重组
- 骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心脏功能及损伤血管再狭窄的影响被引量：21
- 2011年
- 目的观察骨髓间充质干细胞（MSC）移植改善心肌梗死后心功能的变化，及其治疗的安全性。方法建立兔右侧颈动脉粥样硬化狭窄和心肌梗死早期再灌注模型并行右侧颈动脉球囊损伤，建模后分为MSC移植组和对照组，经耳缘静脉注射MSC或等体积的磷酸盐缓冲液。移植后1周观察MSC的归巢；2周时免疫组织化学染色检测血管和心肌组织中血小板-内皮细胞黏附分子（CD31）的表达；移植后4周颈动脉造影检测血管狭窄程度，HE染色测定新生内膜面积及血管狭窄率，并同步测定心脏功能和心肌梗死面积、计数梗死心肌周围毛细血管密度。以及移植后对球囊损伤血管再狭窄产生的影响。结果细胞移植后1周在梗死的心肌组织和损伤血管内膜均有4’，6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐（DAPI）标记的MSC归巢。移植后2周MSC移植组的损伤血管内膜见CD31连续性表达，而对照组无表达。与对照组比较（50．5±3．6）％，MSC移植组血管组织增殖细胞核抗原的表达明显降低[（23．4±2．8）％，P〈0．05]。4周时损伤血管的新生内膜面积（0．092±0．009比0．189±0．007，P〈0．05）及血管再狭窄率在MSC移植组[（41．7±3．7）％]明显小于对照组[（61．3±1．6）％，P〈0．05]。与对照组比较，4周时MSC移植组的心功能有所改善，心肌梗死面积缩小[（21．7±2．2）％比（34．3±1．8）％，P〈0．05]，梗死心肌周围新生毛细血管密度明显增加[（33．6±2．0）％比（20．8±2．6）％，P〈0．05]。结论MSC移植在改善梗死心脏功能的同时，对促进损伤血管的再内皮化和减轻新生内膜的增殖可能产生有益作用，从而有助于减轻损伤血管的再狭窄。
- 石蓓刘志江赵然尊龙仙萍王冬梅王正龙
- 关键词：心肌梗塞干细胞再狭窄
- 增强型绿色荧光蛋白基因转染兔间充质干细胞的实验研究
- 2011年
- 目的建立增强型绿色荧光蛋白标记间充质干细胞(MSCs)的方法,并观察标记方法对MSCs的分化功能影响。方法应用密度梯度离心法和贴壁培养法分离、培养兔外周血MSCs,以携带EGFP的腺病毒(Ad-CMC-EGFP)转染MSCs,荧光倒置显微镜下观察其瞬时表达及转染效率,并对转染后的MSCs进行诱导分化为内皮细胞以观察其部分分化功能。结果①MSCs于体外培养14～20d可达到80%～90%融合,细胞形态为梭形、多角形及纺锤状等。传代MSCs变为形态均一、排列有序的长梭形细胞,增殖活跃;②MSCs经携带EGFP腺病毒转染后24h即可表达EGFP,4～5d时表达最强,此后逐渐减弱,2wk时明显减弱,到4wk时无EGFP表达;③测定腺病毒转染MSCs效率约为60%;④经诱导后分化的内皮细胞呈铺路石样排列,CD31呈阳性表达。结论 Ad-CMV-EGFP转染后的MSCs可有效表达EGFP,且本法转染效率较高,基本不影响细胞分化功能,是一种较好的MSCs标记方法。
- 王冬梅石蓓许官学刘志江赵然尊
- 关键词：间充质干细胞增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体
- 地奥心血康软胶囊对AMI患者行PCI术后血清细胞凋亡因子及其心功能的影响被引量：6
- 2011年
- 目的探讨地奥心血康软胶囊对急性心肌梗死(AMI)患者血清细胞凋亡因子及其心功能的影响。方法将50例AMI患者随机分为两组,均采用AMI常规治疗;在此基础上,治疗组加服地奥心血康软胶囊,疗程均为8周。观察两组治疗前后血清Fas及其配体sFasL变化,以及心功能指标舒张末期左室前后径、收缩末期左室前后径、左室射血分数变化,并观察药物不良反应。结果与治疗前比较,两组治疗后血清sFas、sFasL均降低、心功能指标均改善(P均<0.05),但以治疗组血清sFas、sFasL降低明显(P均<0.05)。结论常规疗法+地奥心血康软胶囊治疗可减少AMI患者的细胞凋亡,改善其心功能,且临床用药安全。
- 王冬梅石蓓赵然尊许官学
- 关键词：地奥心血康软胶囊细胞凋亡因子
- 人受体活性修饰蛋白1基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对兔血管成形术后新生内膜的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨人受体活性修饰蛋白1(hRAMP1)基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊成形术后新生内膜增殖的影响。方法:密度梯度离心法加贴壁培养法获得MSCs,并以携带hRAMP1的腺病毒转染MSCs获得hRAMP1基因修饰的MSCs(hRAMP1-MSCs)。建立动脉粥样硬化狭窄并球囊损伤血管成形术的兔模型,随机分为hRAMP1-MSCs组、MSCs组和对照组,模型建立成功后经耳缘静脉分别注射携带pAd2-EGFP-hRAMP1或pAd2-EGFP的MSCs和PBS,于细胞移植后7 d、14 d和28 d分别处死动物取材,观察MSCs归巢、血管内皮化程度及内膜增生程度,同时检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平和血管局部内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)表达。结果:细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组损伤血管增生内膜均有CD31和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)分布,但以hRAMP1-MSCs组内皮化程度明显,MSCs组次之,两者与对照组比较均有显著差异(P<0.05);细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组内膜增生面积及再狭窄率均低于对照组(P<0.05),尤以hRAMP1-MSCs组降低明显;细胞移植后不同时点hRAMP1-MSCs组和MSCs组血清VEGF水平和血管eNOS表达较对照组增加(P<0.05),而hRAMP1-MSCs组又明显高于MSCs组(P<0.05);损伤血管新生内膜增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达在hRAMP1-MSCs组最少,对照组最多。结论:hRAMP1基因修饰的MSCs能更有效促进损伤内膜快速内皮化,重组hRAMP1腺病毒载体不影响MSCs向内皮细胞分化潜能。基因联合干细胞治疗能更好地促进损伤动脉快速内皮化,降低血管成形术后再狭窄。
- 龙仙萍赵然尊石蓓许官学
- 关键词：间充质干细胞新生内膜再内皮化血管成形术
- 缺血预处理间充质干细胞移植治疗心肌梗死实验研究
- 2010年
- 目的探讨静脉移植缺血预处理的间充质干细胞(MSCs)对梗死心肌的修复作用。方法选择纯种大白兔46只制作心肌梗死模型,分为缺氧预处理MSCs移植组(A组)、非缺氧预处理MSCs移植组(B组)和对照组,于心肌梗死后30 d分别检测心功能、梗死心肌的形态学变化以及新生毛细血管密度。结果与对照组比较,A、B组左心室收缩末期内径、舒张末期内径降低,心功能提高,室壁厚度增加,心肌梗死面积缩小,梗死区和梗死边缘区新生毛细血管密度增加(P<0.05)。结论MSCs移植治疗兔心肌梗死可改善心功能、缩小梗死面积、增加梗死心肌新生毛细血管密度,经缺氧预处理的MSCs移植治疗更有优势。
- 赵然尊石蓓郭艳许官学王冬梅沈长银
- 关键词：心肌梗塞间质干细胞缺氧预处理细胞移植
