河南省高校科技创新团队支持计划(13HASTIT004)
- 作品数：12 被引量：53H指数：5
- 相关作者：郭大龙张国海李学强李秀珍侯小改更多>>
- 相关机构：河南科技大学中国农业科学院郑州果树研究所河南科技学院更多>>
- 发文基金：河南省高校科技创新团队支持计划国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 葡萄早熟芽变与其亲本果实发育特征比较分析被引量：6
- 2014年
- ‘峰早’和‘洛浦早生’葡萄分别是‘巨峰’和‘京亚’的早熟芽变,本研究对比分析了早熟芽变与其亲本间在果实发育过程中与成熟有关的生理指标动态变化的差异。结果表明,与亲本相比,两个早熟芽变品种在果实横径、纵径、单粒重的增长速率,叶绿素、类黄酮和总酚含量变化趋势,以及β-半乳糖苷酶活性等方面的变化趋势差别不大。可溶性固形物和可溶性糖的变化趋势、类胡萝卜素的含量及脂氧合酶(LOX)活性的变化趋势在两对芽变与亲本间无明显一致的趋势,表现出的情形比较复杂。但两芽变品种花色素苷的增长速率在花后50 d均显著快于亲本,且在成熟时的绝对含量均大于对应时期亲本,这可能是早熟芽变品种果实先着色的原因之一。两芽变与亲本间果胶甲酯酶(PE)活性和多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性变化模式相一致,且两芽变的PG酶活性增长速率均明显大于其亲本,这种变化幅度也与早熟芽变性状变化的幅度相关,所以PG酶活性增加加快了芽变品种的成熟软化,这可能是芽变比亲本早熟的原因之一。
- 郭大龙郭明晓张国海
- 关键词：葡萄果实发育
- 利用iPBS技术克隆牡丹反转录转座子LTR序列被引量：3
- 2014年
- 利用iPBS方法从西北牡丹(Paeonia suffruticosa)品种红绣球和中原牡丹品种洛阳红中扩增出相应片段,经回收、克隆及测序,获得了12条来自牡丹LTR类反转录转座子的LTR序列,并用相关生物信息学软件对序列进行分析。结果表明,这些核苷酸序列表现出较高的异质性,主要表现为缺失突变,序列长度变化范围为313–894 bp,同源性从31.1%–65.8%不等。将其氨基酸序列与已登录的不同植物LTR类反转录转座子LTR氨基酸序列进行聚类分析,结果显示与某些植物相应序列具有较高的同源性,表明可能存在LTR类反转录转座子的横向传递关系。根据克隆出的LTR序列设计SSAP引物,对牡丹29个品种进行了SSAP分子标记分析,结果显示具丰富的多态性。实验验证了用iPBS技术分离牡丹LTR序列的适用性,并为牡丹种质资源评价提供了新的技术手段。
- 张曦侯小改郭大龙宋程威段亚宾
- 早熟葡萄新品种‘峰早’被引量：2
- 2014年
- ‘峰早’是从‘巨峰’芽变中选育出的葡萄新品种。平均单穗质量500 g,果粒圆形,单粒质量9.0~12.0 g,果皮紫红色,可溶性固形物含量15.0%左右。果实发育期47 d左右,7月初成熟,抗病性强,适合保护地和露地栽培。
- 李秀珍李学强郭大龙张国海马慧丽
- 关键词：葡萄芽变
- 牡丹LINE类反转录转座子RT序列的克隆及分析被引量：6
- 2014年
- 利用LINE简并引物从中原牡丹品种‘洛阳红’中扩增出580 bp左右的目的条带,对其回收、克隆、测序及相关生物信息学软件分析后获得32条LINE类牡丹反转录转座子RT（反转录酶）序列。这些序列长度为547 - 593 bp,主要表现为点突变,经Clustal W比对其同源性为25.7% - 94.2%。将其核苷酸序列经聚类后可分为4个家族,其中家族Ⅰ 和Ⅲ分别占总序列数的50%和28%。将32条RT序列翻译成氨基酸序列,在第18氨基酸序列处有1个非常保守的的甘氨酸（Gly）,在138氨基酸序列处有1个半保守的赖氨酸（Lys）位点。32条序列均发生较多的终止密码子突变和移码突变。与其他物种的系统进化树分析,表明牡丹LINE类反转录转座子RT序列既有一定的保守性,同时也与其他物种间存在一定的同源性。
- 宋程威郭大龙张曦郭丽丽侯小改
- 关键词：反转录酶
- SSR分子标记在牡丹亲缘关系研究中的应用与研究进展被引量：18
- 2015年
- SSR标记具有操作简便、共显性和重复性好等特点。该文总结了通过生物信息学技术、磁珠富集法及二代测序技术开发牡丹(Paeonia suffruticosa)SSR标记引物的方法,并根据现有研究结果解析了牡丹基因组中SSR位点频率及分布,详细阐述了SSR标记在牡丹种质资源的遗传多样性、亲缘关系和遗传关系等方面的应用概况,旨在为今后牡丹SSR标记的研究与应用提供参考。
- 郭琪郭大龙郭丽丽张琳侯小改
- 关键词：SSR分子标记亲缘关系
- 早熟葡萄新品种‘峰早’的配套栽培技术
- 2014年
- ‘峰早’是河南科技大学果树课题组1998年从‘巨峰’葡萄中选出的早熟芽变（编号98—2），经过8年多点嫁接、扦插试验，品种比较试验，区域试验及生产试栽，早熟性状稳定，于2013年12月通过河南省林木品种审定委员会审定，定名‘峰早’，已在河南、山东、河北等地引种栽培，现将其主要性状及配套栽培技术介绍如下：
- 李学强郭大龙张国海林芳立徐圆圆
- 关键词：配套栽培技术早熟葡萄品种比较试验扦插试验
- 葡萄类钙调磷酸酶B亚基互作蛋白激酶VvCIPK10的特性与表达被引量：8
- 2016年
- 【目的】在葡萄中克隆丝苏氨酸蛋白激酶Vv CIPK10,分析其激酶特性和在逆境胁迫下的表达模式,为进一步研究该基因参与逆境胁迫的分子功能,探讨葡萄抗逆分子机制提供理论依据。【方法】利用电子克隆技术获得Vv CIPK10序列,设计特异引物进行RT-PCR反应,对克隆到的序列进行开放阅读框和保守结构域分析;构建原核表达载体,转化表达菌株后用IPTG进行诱导表达,收集菌体后裂解细胞,制备蛋白上样液,SDS-PAGE电泳对表达产物进行分析,同时对融合蛋白进行可溶性分析;IPTG大量诱导表达融合蛋白,收集菌体后进行超声破碎细胞,用麦芽糖结合蛋白纯化柱纯化MBP-Vv CIPK10融合蛋白,SDS-PAGE电泳进行分析;纯化后的融合蛋白与体外自磷酸化缓冲液进行自磷酸化反应,反应后SDS-PAGE电泳,压磷屏检测体外自磷酸化反应;构建重组瞬时表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10;分离拟南芥原生质体,通过PEG介导的瞬时转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至原生质体;通过基因枪介导的转化方法将重组表达载体p BI221-GFP/Vv CIPK10转化至洋葱表皮细胞,培养16 h后用激光共聚焦显微镜进行荧光信号检测;选择生长相对一致且健壮的葡萄植株,于干旱、低温和盐胁迫处理后不同时间取样,同时在田间取葡萄不同组织样品,实时荧光定量PCR检测Vv CIPK10在葡萄不同组织中的表达以及在不同逆境胁迫下的表达模式。【结果】PCR克隆获得葡萄Vv CIPK10全长为1 357 bp,5′端非编码区为30 bp,3′端非编码区为156 bp,开放阅读框为1 171 bp,编码436个氨基酸,理论等电点为8.59,分子量为48.7 k Da。保守结构域预测分析显示该蛋白5′端具有一个激酶结构域,3′末端具有一个PPI结构域和一个NAF结构域。BLSATP分析表明葡萄Vv CIPK10与桃树CIPK(XP_007205151)一致性最高(74%)。重组表达载体p MAL-C5X/Vv CIPK10在大肠杆菌中经诱导表达获得与理论�
- 余义和李秀珍郭大龙张会灵杨英军李学强张国海
- 关键词：葡萄
- 早熟葡萄新品种——‘峰早’
- 2014年
- 1选育过程
1998年6月下旬,在河南科技大学果树教学实习基地的葡萄园中,发现1株‘巨峰’葡萄部分枝干上所结的果实开始着色。7月初,该枝干上的果实完全着色,呈现出紫红色,具有明显的浆果成熟现象,果粒明显变软;经品尝,感到甜度明显上升,酸度下降,口感较好,并有一定的玫瑰香味。而其他‘巨峰’植株上浆果仍呈绿色,果粒没有变软,品尝后酸味浓重,不堪食用。
- 李秀珍张国海李学强郭大龙刘崇怀
- 关键词：早熟葡萄教学实习基地选育过程全着色葡萄园紫红色
- 葡萄细胞分裂素响应调节因子VvRR2启动子的克隆与活性分析被引量：2
- 2017年
- 细胞分裂素在植物果实生长发育进程中具有重要作用。前期我们对葡萄细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2进行了研究,结果发现VvRR2转录本受到多种因素的诱导调节。本研究在此基础上采用同源克隆方法在葡萄中克隆了细胞分裂素响应调节因子基因VvRR2启动子,生物信息学预测分析发现VvRR2启动子序列富含CAAT-box和TATA-box基本元件,还有与光响应、激素应答、组织特异和逆境相关的顺式作用元件。VvRR2启动子连接至pC0390GUS载体,转化烟草叶片,GUS酶活性分析显示VvRR2启动子具有活性。用细胞分裂素和脱落酸处理转化烟草叶片后VvRR2启动子活性没有改变;用生长素、赤霉素、茉莉酸甲酯和水杨酸处理后VvRR2启动子活性显著提高。
- 余义和张会灵郭大龙李秀珍杨英军李桂荣李学强张国海
- 关键词：葡萄启动子
- 葡萄iPBS-PCR反应体系的优化被引量：8
- 2014年
- 【目的】iPBS标记是一种新型、快速、高效的分子标记方法,试验筛选并优化了葡萄的iPBS-PCR反应体系,以建立葡萄种质资源评价和品种鉴定的可靠方法。【方法】采用L16(45)正交试验,对影响葡萄iPBS-PCR反应的模板浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq酶用量、引物用量及退火温度等因素进行了优化,运用Bandscan和正交设计助手等软件对电泳结果条带进行统计分析。【结果】优化后的葡萄iPBS-PCR扩增的最佳反应条件为:DNA模板20 ng、Taq酶1.00 U、Mg2+2.40 mmol·L-1、引物0.50μmol·L-1、dNTPs 0.20 mmol·L-1,总体积20μL。退火温度53.8℃。【结论】建立了适合葡萄iPBS-PCR分析的优化反应体系,为葡萄种质遗传多样性的评价和鉴定提供了新的技术手段,为其他植物的相关研究也提供了参考。
- 张潇玉郭大龙郭明晓张国海侯小改
- 关键词：葡萄正交设计
