首都医学发展科研基金(207-2050)
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 相关作者：陈德喜张洪海孙玉吴昊李宁更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院潍坊医学院附属医院山东省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：首都医学发展科研基金国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 谷胱甘肽-S-转移酶-ASPP2融合蛋白的原核表达及纯化
- 2009年
- 为表达并初步纯化包含ASPP2活性区域和不包含其活性区域的谷胱甘肽-S-转移酶(GST)-ASPP2融合蛋白。采用PCR扩增两段ASPP2基因短片段,在引物5'端和3'端分别引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,将其克隆进入原核表达载体pGEX-4T-1;异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导重组质粒pGEX-4T-1-ASPP2在大肠杆菌BL21(DE3)中表达同时带有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)标签的融合蛋白;超声法裂解大肠杆菌,应用谷胱苷肽琼脂糖树脂纯化可溶的GST-ASPP2融合蛋白;通过SDS-PAGE和Western blot验证GST-ASPP2融合蛋白的表达。结果表明,已成功的构建了GST-ASPP2小片段融合蛋白表达载体,在Western blot分析中,4个蛋白条带均能被鼠抗GST单克隆抗体特异性识别,条带所在位置和GST-ASPP2的分子质量相符。构建了GST-ASPP2重组质粒,在大肠杆菌BL21中高效表达GST-ASPP2融合蛋白,为进一步研究ASPP2全长,N-末端和C-末端生理意义奠定了基础。
- 南萍李秉超柳雅立石英陈德喜
- 关键词：ASPP2谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白WESTERNBLOT
- 原发性肝癌组织p53和ASPP2基因突变检测及临床意义被引量：11
- 2010年
- 目的:检测原发性肝癌组织中p53与ASPP2基因突变,并探讨其临床意义。方法:收集24例肝癌标本,分别提取DNA及RNA,PCR扩增p53基因,逆转录PCR扩增ASPP2基因并进行半定量分析,基因测序后进行突变分析。结果:24例肝癌患者中,p53基因在肝癌组织中的突变率是75.0%,在癌旁组织中的突变率为20.8%,P<0.01;肝癌组织中ASPP2与GAPDH的灰度比值平均为0.81,癌旁组织中为0.85,P>0.05,但是癌组织和癌旁组织均未检测到ASPP2基因突变。结论:在原发性肝癌发生过程中,p53基因突变比AS-PP2基因突变可能起到更重要的作用。
- 谭军英张洪海郭洪亮孙玉王磊季万胜陈德喜李宁
- 关键词：肝肿瘤P53基因基因突变
- 原发性肝癌组织线粒体DNA含量检测及意义被引量：2
- 2010年
- 目的检测原发性肝癌及其癌旁组织中线粒体DNA含量,探讨线粒体DNA含量变化与肝癌发生的关系。方法荧光实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)法扩增22例肝癌及相应癌旁组织中线粒体DNA编码基因细胞色素C氧化酶Ⅱ(COⅡ),以核编码基因磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,比较两种组织中线粒体DNA含量的差异。结果肝癌组织中线粒体DNA相对含量为156.54±107.54,癌旁组织线粒体DNA相对含量为290.24±187.37,差异有统计学意义(P<0.01)。结论肝癌组织线粒体DNA的含量与肝癌发生有密切关系,有望成为一种新的肝癌标志物。
- 孙玉曲红梅张洪海张彤吴昊陈德喜
- 关键词：DNA线粒体聚合酶链反应
- DNA修复基因OGG1融合蛋白表达及多克隆抗体的制备
- 2011年
- 目的表达及纯化8羟基脱氧鸟苷DNA糖苷酶-1（OGG1）融合蛋白制备多克隆抗体。方法在大肠杆菌BL21中诱导表达OGG1融合蛋白，应用Ni—NTA亲和树脂进行纯化。纯化后的OGG1融合蛋白多次免疫大耳白兔．应用Westernblotting的方法检测抗体活性，间接酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测抗体效价。结果通过大肠杆菌转染和表达。成功获得了纯化的OGG1融合蛋白。3次加强免疫后，间接ELISA法检测血清效价达到1：100000；Western blotting显示，OGG1多克隆抗体能够与OGG1融合蛋白特异结合。结论成功制备了高效价的OGG1多克隆抗体。
- 武彦宁绳波刘宁计云霞陈德喜
- 关键词：融合蛋白多克隆抗体
- 核苷（酸）类似物抗乙型肝炎病毒治疗的毒副作用被引量：1
- 2010年
- 核苷（酸）类似物的应用为广大慢性乙型肝炎患者带来了福音，但药物长期应用带来的毒副作用不容忽视。此文就国内目前使用的4种核苷（酸）类似物的毒副作用进行综述。
- 孙玉张洪海吴昊陈德喜
- 关键词：肝炎乙型核苷(酸)类似物副作用
