博士科研启动基金(00-119)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
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- 相关机构：上海水产大学上海海洋大学更多>>
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- 团头鲂促甲状腺激素β亚基基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2006年
- 利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑下垂体中促甲状腺激素β亚基(TSHβ)基因,并对其基因结构和系统进化进行分析。该基因cDNA序列全长614 bp;5’端非翻译区100 bp;3’端非翻译区61 bp;开放阅读框架(ORF)453 bp,共编码150个氨基酸。其编码的氨基酸序列与鳙鱼(Aristichthys no-bilis)、鲤鱼(Cyprinus carpio)、金鱼(Carassius auratus)、斑马鱼(Danio rerio)、鲑鱼(Salmo salar)、虹鳟(Oncorhynchusmysiss)、欧洲鳗鲡(A.anguilla)的相似性分别为:99.3%、92%、92%、82%、62.6%、62.6%和56%。核苷酸序列分析显示,团头鲂与鳙鱼相似性最高,为98.23%;与欧洲鳗鲡相似性最低,为48.7%。说明TSHβ亚基在长期的进化中相当保守。在所比较的9种鱼类该基因ORF氨基酸序列中都含有定位相同的12个半胱氨酸残基,它们在成熟肽中形成6个二硫键,这对保证促甲状腺激素的空间结构,维持促甲状腺激素的生理功能起着重要的作用。该基因的成功克隆不仅为TSHβ的分子进化和相似性比较研究提供了新的资料,而且对进一步研究该基因的功能、表达具有重要的意义。[中国水产科学,2006,13(1):128-133]
- 曲宪成杨艳红刘其根刘颖
- 关键词：团头鲂CDNA末端快速扩增克隆
- 团头鲂促性腺激素GtH Iβ亚基基因5′端启动子区克隆及表达载体构建被引量：2
- 2008年
- 本研究利用改进的锚定PCR方法克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)促性腺激素Iβ(GtH Iβ)亚基基因5′端侧翼序列,并在生物信息学方法分析的基础上构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的GtHIβ亚基基因5′端侧翼序列长度为479bp,其中包括TATA盒、ARE、PRE、ERE、SF-1、Ptx1等可能对GtH Iβ亚基基因转录调控起重要作用的功能转录因子结合位点。利用PCR方法在基因组中扩增得到了3个缺失片段,并同全长片段一起分别连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂GtH Iβ亚基基因5′端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础。
- 曲宪成崔严慧周正峰刘颖金一春胡萍华薛婷君王琼
- 关键词：团头鲂启动子
- 团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列克隆及其表达载体的构建被引量：3
- 2008年
- 首先运用PCR-末端加尾法克隆了团头鲂（Megalobrama amblycephala）脑下垂体糖蛋白激素α亚基（Pituitary glycoprotein hormone α subunit,PGPH α）基因5’端侧翼序列;然后利用生物信息学理论对该序列进行了序列分析;最后在序列分析结果的基础上,构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示,克隆所得到的团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列长1399bp;其序列中包含潜在的TATA盒、GC盒,以及ERE、TRE、CRE、PGBE等对PGPH α亚基基因转录调控起重要作用的转录因子结合位点;启动子区域位于-40-10bp处。利用PCR方法扩增得到了全长1439bp以及1120bp、532bp、173bp均包含转录起始位点下游40bp序列的缺失片段,并将其连接至pGL3-Basic报告基因载体,成功构建了团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列的表达载体,为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础。
- 曲宪成周正峰崔严慧刘颖胡萍华金一春尚婧瑨
- 关键词：团头鲂启动子
- 团头鲂促性腺激素β亚基cDNA的克隆和序列分析被引量：6
- 2007年
- 本研究利用RT-PCR和RACE克隆了团头鲂(Megalobrama amblycephala)脑下垂体中两种促性腺激素β亚基(GtHIβ和GtHIIβ)cDNA序列,并对其进行了结构和系统进化分析。团头鲂GtHIβ亚基cDNA全长567碱基对(bp),5’端非翻译区26bp;3’端非翻译区148bp;开放阅读框(ORF)393bp,其编码含有130个氨基酸的蛋白质,包括由108个氨基酸组成的成熟肽以及22个氨基酸组成的信号肽。GtHII亚基cDNA全长564bp,5’端非翻译区43bp;3’端非翻译区95bp;ORF426bp,其编码含有141个氨基酸的蛋白质,包括由117个氨基酸组成的成熟肽以及24个氨基酸组成的信号肽。团头鲂GtHIβ亚基氨基酸序列与青鱼(Mylopharyngodon piceus)等15种鱼类相比较,相似性为90%—31%,与湖蛙(RanaRidibunda)等5种四足类的相似性为38%—21%;GtHII亚基与青鱼等15种鱼类相比较,其相似性为95%—41%,与湖蛙等5种四足类的相似性为49%—36%,团头鲂GtHIβ和GtHII亚基与鲤科鱼类的相似性最高,显示出较为亲近的进化关系。另外,团头鲂GtHIβ和GtHIIβ亚基含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N糖基化位点。
- 曲宪成刘颖杨艳红崔严慧周正峰
- 关键词：RT-PCRRACE克隆团头鲂
