广东省自然科学基金(10151040701000031)
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 相关作者：黄宪章庄俊华何敏张战锋陈炜烨更多>>
- 相关机构：广东省中医院中山大学附属第三医院广州医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 敲减Akt表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响被引量：6
- 2012年
- 目的:研究慢病毒介导Akt靶向的RNA干扰对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RAFLS)增殖的影响。方法:慢病毒表达载体pL/Akt转染RAFLS并表达靶向Akt的siRNA序列,采用RT-PCR和Western Blot检测Akt表达,MTT法检测RAFLS增殖能力的变化。结果:转染pL/Akt后,RAFLS中Akt1、Akt2的mRNA分别下降了65%和68%以上,Akt蛋白的表达量在48h后下降76.19%(P<0.05),RAFLS细胞增殖在48、72、96h分别下降了27.50%、44.69%和56.80%(P<0.05)。结论:慢病毒表达载体pL/Akt能够降低Akt蛋白表达水平,并显著抑制RAFLS增殖。
- 徐宁王栋庄俊华李曼黎小琼黄宪章
- 关键词：AKTRNA干扰慢病毒表达载体
- 增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响。方法慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化。结果转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P<0.05),RA FLS增殖在487、29、6 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P<0.05)。结论慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖。
- 李曼王栋徐宁黄宪章庄俊华黎小琼
- 关键词：PTEN慢病毒表达载体类风湿关节炎
- 抑癌基因PTEN载体构建及在LOVO细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:构建抑癌基因PTEN的表达载体并在LOVO细胞中表达。方法:从人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR扩增出PTEN基因片段,将PTEN基因连入pLenti6/V5载体。测序鉴定后,经脂质体转染入LOVO细胞,对细胞株进行RT-PCR和Western blot检测。结果:DNA测序证实pLenti6/V5-PTEN表达载体为阳性克隆;该表达载体转染LOVO细胞后上调了PTEN mRNA和蛋白的表达。结论:成功构建了pLen-ti6/V5-PTEN表达载体,为进一步研究PTEN在LOVO细胞中的功能奠定了基础。
- 徐宁李曼黎小琼赵学芹何敏黄宪章庄俊华
- 关键词：PTENLOVO细胞株转染
- pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达被引量：4
- 2011年
- 目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白。方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆。重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性。结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白。结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好。
- 黄宪章张战锋谢诗园李朝霞李林陈炜烨何敏庄俊华
- 关键词：重组质粒毕赤酵母
- PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达被引量：5
- 2011年
- 目的构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白。结论成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达。
- 黄宪章张战锋陈炜烨何敏庄俊华
- 关键词：CDK2重组质粒原核表达
