国家自然科学基金(30460093)
- 作品数：18 被引量：38H指数：4
- 相关作者：曹贵方唐博锡林高娃邵艳红付本懂更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学吉林大学内蒙古医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达被引量：1
- 2012年
- 本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%,BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。
- 程兰玲曹贵方温世勇赵鹏伟关洪敏菅瑞珍
- 关键词：Β-防御素荷斯坦奶牛乳腺炎
- 蒙古绵羊输卵管上皮细胞β-防御素mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR检测被引量：4
- 2009年
- 为了检测培养的蒙古绵羊输卵管上皮细胞内sBD-1 mRNA表达水平,运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术进行了相对定量测定。首先,建立蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养体系作为体外试验模型,提取细胞总RNA,根据GenBank中羊β-防御素基因序列,设计合成引物,进行实时荧光定量PCR。以β-Actin基因为内参基因,对sBD-1 mRNA进行均一化处理,利用荧光阈值(Ct值)计算sBD-1 mRNA的相对表达量。经测序分析,扩增产物为β-防御素。结果显示,SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素mRNA表达水平的相对含量。
- 唐博冯永淼付本懂曹贵方
- 关键词：MRNA实时荧光定量PCR蒙古绵羊
- 雌性骆驼生殖组织β-防御素-1基因的克隆及其组织表达量的检测被引量：2
- 2007年
- 从雌性骆驼输卵管、子宫、子宫颈、阴道组织中提取总RNA,根据已发表的骆驼β-防御素-1基因的cDNA序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出了骆驼β-防御素-1基因;将扩增产物克隆于pBlueselectT载体后进行了序列分析。以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,对扩增的β-防御素-1基因进行琼脂糖凝胶电泳后,应用凝胶成像分析系统,推断出了不同组织中β-防御素-1基因的表达量。结果,从雌性骆驼生殖各组织上皮均获得了203 bp的β-防御素-1基因的扩增片段,且β-防御素-1基因在雌性骆驼生殖道各组织内的表达量不同。结果表明,β-防御素-1在雌性骆驼生殖组织的先天免疫中起重要作用。
- 唐博曹贵方锡林高娃任秀娟
- 蒙古绵羊β-防御素基因相对表达水平实时定量PCR方法的建立
- 2009年
- 为了利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术对蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素基因表达水平进行相对定量测定,建立蒙古绵羊β-防御素基因相对表达水平的实时荧光定量PCR方法,试验根据GenBank中羊β-防御素基因序列设计合成引物,进行实时荧光定量PCR,同时以β-Actin为内参基因对β-防御素基因进行均一化处理,利用荧光阈值(C t值)计算β-防御素基因的相对表达量。结果表明:扩增产物为β-防御素;利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术可以测定蒙古绵羊β-防御素基因表达水平相对含量。
- 唐博锡林高娃付本懂曹贵方
- 关键词：实时定量PCR蒙古绵羊
- 雌二醇对蒙古绵羊输卵管上皮细胞内β-防御素(sBD-1)表达的影响被引量：5
- 2008年
- 为了探索雌二醇与β-防御素（sBD-1）表达量的关系,体外模拟蒙古绵羊（Ovis aries）生理周期,用添加雌二醇浓度10-11、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L的培养液及不添加雌二醇的培养液（即对照组）分别培养蒙古绵羊输卵管上皮细胞,作用24 h、48 h、72 h后,提取细胞总RNA,应用SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR法进行定量分析。结果显示,添加不同浓度雌二醇培养的输卵管上皮细胞中sBD-1的相对表达量0.000 740~0.001 758,与对照组0.000 190之间差异显著（P〈0.05）,且小于10-8mol/L雌二醇添加浓度与sBD-1基因相对表达量变化基本呈正相关。此结果为进一步研究雌激素参与机体防御功能奠定了基础。
- 李淑凤曹贵方宋艳华姜丽萍郭宏儒邵艳红
- 关键词：雌二醇基因表达量输卵管上皮细胞蒙古绵羊
- 原位杂交技术分析蒙古绵羊胎儿β-防御素的表达
- 2009年
- 李咏兰邵艳红曹贵方王秀梅
- 关键词：原位杂交技术Β-防御素蒙古绵羊胎儿组织切片
- 蒙古绵羊β-防御素(sBD-1)mRNA相对表达水平的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法的建立
- 本实验旨在利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR技术对蒙古绵羊雌性生殖道sBD-1-mRNA表达水平进行相对定量测定,建立蒙古绵羊β-防御素基因(sBD-1-mRNA)相对表达水平的实时荧光定量PCR方法。根据Ge...
- 唐博李淑凤锡林高娃曹贵方
- 关键词：实时定量PCR蒙古绵羊
- 文献传递
- 17-β-雌二醇对培养的绵羊输卵管上皮细胞β-防御素(sBD-1)mRNA表达的影响被引量：1
- 2009年
- 建立蒙古绵羊输卵管上皮细胞培养体系作为体外试验模型,根据体内雌激素浓度确定17-β-雌二醇添加的浓度分别为10-8、10-9、10-10、10-11mol/L,提取细胞总RNA,利用实时荧光定量RT-PCR测定sBD-1-mRNA的相对表达量。结果显示:一定浓度范围内(10-8、10-9、10-10mol/L),17-β-雌二醇对培养的输卵管上皮细胞sBD-1-mRNA的表达有促进作用,且呈正相关。结果表明:雌性生理周期下,雌性生殖道sBD-1-mRNA的表达与雌激素相关。
- 唐博李子义锡林高娃付本懂曹贵方
- 关键词：Β-防御素实时定量PCR17-Β-雌二醇
- 蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素(sBD-1)的序列分析及组织表达被引量：12
- 2008年
- 从蒙古绵羊输卵管、子宫、子宫颈、阴道组织中提取总RNA,根据GenBank中羊的β-防御素的cDNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了301bp的片段。将该片段克隆于pMD-18T载体后进行序列分析,确认该PCR产物为β-防御素。通过相同的RT-PCR反应体系和条件后,对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,以β-actin为参照,根据PCR产物的亮度推断不同组织中β-防御素的表达量。结果,蒙古绵羊雌性生殖道上皮各组织均有β-防御素表达,说明β-防御素在蒙古绵羊雌性生殖道的先天免疫中起重要作用。β-防御素的表达量在雌性生殖道各组织内不同,提示雌性生殖道各组织的防御功能强度不同。
- 唐博曹贵方吕东媛杜晨光
- 关键词：Β-防御素基因克隆绵羊
- 几种不同信号通路的抑制剂对17β-雌二醇诱导绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因转录的影响被引量：1
- 2010年
- 主要探讨了17β-雌二醇(E2)促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1(sheep beta-defensin-1)表达的可能的信号通路.在研究过程中,分别用10-8mol/L 17β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKA(protein kinase A)阻断剂H-89、PKC(protein kinase C)阻断剂H-7、NF-κB(Nuclear factor-kappaB)阻断剂PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)干预绵羊输卵管上皮细胞6 h,采用实时荧光定量RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)方法检测SBD-1 mRNA表达水平的变化.实验结果显示,10-8mol/L 17β-雌二醇可显著促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1 mRNA的表达(p<0.01);ICI182780、H-89、PDTC和H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-1的上调作用.提示17β-雌二醇促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1表达是由雌激素核受体、PKA、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导的.
- 包图雅曹贵方曹金山杜晨光凃勇
- 关键词：17Β-雌二醇输卵管上皮细胞绵羊信号通路
