天津市卫生局科技基金(07KY01)
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
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- 重组腺病毒Ad—hBNP对慢性心力衰竭大鼠血清AgⅡ、Ald、ET、TNF—α含量及心肌重构的影响
- 2013年
- B型利钠肽（B—typenatriuretic peptide，BNP）足由左窀心肌细胞合成和分泌的一种肽类激素，日前血清BNP水平已经成为诊断心衰的一个重要参考指标，对心衰的治疗及预后评估也具有重要的意义。
- 宋衍秋赵莉莉毛用敏赵鸿铭崔让庄
- 关键词：大鼠血清心肌重构重组腺病毒ALDTNF
- 重组腺病毒Ad-hBNP的构建及其在CHF大鼠中的分布与表达
- 2012年
- 目的构建重组腺病毒Ad-hBNP,观察其在CHF大鼠体内的分布与表达,为腺病毒介导BNP治疗慢性心力衰竭奠定实验基础。方法 RT-PCR法从人心肌组织获得hBNP片段,应用AdEasy腺病毒载体系统,构建Ad-hBNP;CHF成模大鼠24只,随机分为4组,18只单次腹腔注射Ad-hBNP后,均分为1、4和7 d组;余不予Ad-hBNP,为0点组。实验动物于相应时间处死,ELISA检测血清hBNP水平,免疫组化检测各脏器hBNP表达,RT-PCR检测各组织hBNP mRNA表达。结果成功构建用于实验性基因治疗的Ad-hBNP,纯化后滴度达到4.4×1012VP/mL。透射电镜观察Ad-hBNP呈多面体结构,颗粒直径在90 nm左右。单次腹腔注射Ad-hBNP,CHF大鼠心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏及小肠均检测到hBNP表达,外源hBNP在CHF大鼠体内的表达至少可持续7天。结论腺病毒介导的外源hBNP基因可在CHF大鼠多脏器中得到有效表达,其生物学效应时间显著长于BNP的生物半衰期。
- 宋衍秋赵莉莉毛用敏赵鸿铭徐美林崔让庄
- 关键词：B型利钠肽腺病毒基因治疗
- 携带人B型利钠肽基因重组腺病毒对慢性心力衰竭大鼠心功能的影响被引量：1
- 2011年
- 目的观察外源基因人B型利钠肽对慢性心力衰竭（心衰）大鼠心功能的影响。方法30只入选心衰大鼠，随机分为携带人B型利钠肽基因重组腺病毒组（Ad—hBNP组）、重组空白腺病毒组（Ad—Track组）、生理盐水组（NS组），另设不予任何治疗的假手术组作为对照；分别经腹腔注射予以相应治疗，每周1次，共4周。4周后实验动物行超声心动图、血流动力学检测，酶联免疫吸附试验检测血清外源基因人B型利钠肽水平，全心质量指数检测。结果间断Ad—hBNP治疗后，Ad—hBNP组心衰大鼠室间隔厚度、左室后壁厚度、左室舒张末径、左室收缩末径[（2．34±0．29）mm、（2．28±0．18）mm、（6．504-0．42）mm、（3．54±0．59）mm]显著低于Ad-Track组[（2．71±0．35）mm、（3．02±0．85）mm、（7．71±0．83）mm、（4．72±0．80）mm，均为P〈0．05]和NS组[（2．78±0．23）mm、（2．83±0．53）mm、（7．34±0．97）mm、（4．55±0．77）mm，均为P〈0．05]，而左室射血分数、左室短轴缩短率[（79．27±7．01）％、（43．38±6．73）％]显著高于Ad—Track组[（70．85±4．81）％、（35．72±3．68）％，均为P〈0．01]和NS组[（69．67±6．90）％、（34．91±5．10）％，均为P〈0．01]。Ad．hBNP组与Ad．Track组和NS组比较：心率显著降低，左室收缩压显著升高[为（131．79±15．76）mmHg（1mmHg=0．133kPa）、（112．99±32．35）IntoHg、（117．13±15．26）mmHg]，左室内压最大上升速率显著升高[分别为（5037．20±430．41）mmHg／s、（4217．40±1354．15）mmHg／s、（4310．50±1293．97）mmHg／s；P〈0．05]；左室内压最大下降速率显著升高[分别为（-4382．00±1304．79）mmHg／s、（-3725．00±791．34）mmHg／s、（-3890．00±1043．73）mmHg／s，均为P〈0．05]；左室舒张末压降低[分别为（-4．24±4．00）mmHg、（21．99±6．80）mmHg、（18．00±12．25）mmHg，均�
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- 关键词：基因疗法
- 慢性充血性心力衰竭大鼠模型的建立
- 2011年
- 目的:探讨建立慢性充血性心力衰竭大鼠模型的方法。方法:采用腹主动脉缩窄法制备CHF大鼠模型。于右肾动脉分支处上方缩窄腹主动脉至0.6mm,同时设立假手术组及正常对照组。12周后行一般情况观察,超声心动图及血液动力学检测心脏结构和功能、计算心脏肥厚指数,HE及Masson染色检测心肌病理改变,综合评价CHF大鼠心功能。结果:与假手术及正常对照组比较,CHF模型组术后12周均出现进食减少、精神萎靡、少动、被毛无光;IVS、LVPW、LVM、LVEDD、LVESD、SV显著增加,EF、FS显著降低;HR显著增加;VSP、+dP/dtmax显著降低,T-dP/dtmax显著延长;LVEDP显著升高,-dP/dtmax绝对值显著降低;心脏湿重及心脏肥厚指数均增加;病理结果表明CHF模型组心肌细胞肥大、排列紊乱、心肌胶原纤维增多。结论:应用腹主动脉缩窄术可成功制备CHF大鼠模型。
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- 关键词：慢性心力衰竭动物模型腹主动脉缩窄
- Ad-hBNP重组腺病毒的构建
- 2009年
- 目的:构建携带人BNPcDNA片段高效重组腺病毒Ad-hBNP,为实验提供研究工具。方法:从人心肌组织提取的RNA,用RT-PCR方法中获得hBNP扩增片段,与pUCm-T载体连接构成pUC-hBNP重组质粒;用KpnI、SalI分别双酶切pUC-hBNP和pAd-Track-CMV,将目的片段插入pAd-Track-CMV构建重组质粒pAdTrack-CMV-hBNP;pAdTrack-CMV-hBNP重组质粒经PmeI酶切线性化后,电转法转入含有腺病毒骨架质粒的E.coliBJ5183感受态细胞中,同源重组获得重组质粒pAdEasy-hBNP;经BamHI、PacI酶切鉴定及基因序列检测后,重组成功的pAdEasy-hBNP经阳离子脂质体法转染HEK293T细胞,经过包装、扩增和纯化后,测定病毒滴度,电镜检测病毒形态。结果:转染HEK293T细胞5-6天GFP呈"彗星"状;重组腺病毒滴度为1.1×1012V.P/ml;电镜检测重组腺病毒为多面体结构。结论:应用Ad-Easy缺陷性腺病毒载体系统成功构建重组腺病毒Ad-hBNP,为进一步基因治疗研究提供分子生物学工具。
- 宋衍秋赵莉莉毛用敏崔让庄
- 关键词：脑钠肽腺病毒载体同源重组基因治疗
- 重组腺病毒Ad-hBNP对慢性心衰大鼠心肌细胞凋亡因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的观察外源基因人B型利钠肽对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法 30只慢性心力衰竭模型大鼠,随机分为携带人B型利钠肽基因重组腺病毒组(Ad-hBNP组,14只)、重组空白腺病毒组(Ad-Track组,8只)、生理盐水组(NS组,8只),分别给予腹腔注射人B型利钠肽基因重组腺病毒、重组空白腺病毒及生理盐水1mL,每周1次,共4周。另设10只未造模但实行了假手术的大鼠为假手术组;4周后处死大鼠,行RT-PCR检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA含量。结果 Ad-hBNP治疗后,Ad-hBNP组大鼠心肌组织Bcl-2mRNA表达较Ad-Track组及NS组升高;BaxmRNA表达较假手术组升高;Caspase-3mRNA表达较Ad-Track组、NS组及假手术组均升高。Ad-hBNP组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达较Ad-Track组降低。结论间断给予Ad-hBNP能够影响慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡相关基因的表达,减少心肌细胞间质Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。
- 宋衍秋赵莉莉毛用敏赵鸿铭崔让庄
- 关键词：肌细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶WISTAR
