国家高技术研究发展计划(2007AA021108)
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 相关作者：钱其军王春红周秀梅王毅刚刘鸿更多>>
- 相关机构：浙江理工大学第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划浙江省自然科学基金浙江省重中之重学科开放基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20载体构建与表达研究被引量：1
- 2009年
- 构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力。合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒。将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性。结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78μg/ml±0.30μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力。成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20。
- 杨秋梅吴红平周秀梅李林芳王春红姜梨华钱其军
- 关键词：抗CD20抗体IRES
- 隧道纳米管:一种新型的细胞间通讯连接方式被引量：3
- 2008年
- 多细胞生物体的细胞间存在着细胞连接、细胞通讯等多种形式的相互作用,这对于个体的生长发育是至关重要的。最近在哺乳动物细胞间发现了一种新型的细胞间通讯连接方式,根据其形态及结构特征,这种细长的膜管被命名为隧道纳米管(tunneling nanotubes,TNTs)。TNTs一直处于形成和断裂的持续变化状态之中,在相互连接的细胞间形成了复杂的网络结构,并且可以作为细胞间交流的通道,从而在广泛的生理过程中发挥着重要的作用。TNTs在动物细胞间很可能是一种普遍存在的生物学现象。
- 刘鸿王毅刚石文芳钱其军
- 小鼠sox2基因的克隆及其原核表达载体构建被引量：1
- 2010年
- TAT穿膜肽能携带大分子物质进入细胞。NLS核定位信号肽是能帮助亲核蛋白进入细胞核的短肽。SoxB1家族的SOX2是维持ES细胞全能性的重要转录因子。通过RT-PCR方法从小鼠胚胎干细胞中克隆得到小鼠sox2基因,将其与穿膜肽基因tat和核定位信号基因nls融合,利用原核表达载体进行融合蛋白表达,并将表达的蛋白纯化、复性得到复性蛋白,为今后对SOX2蛋白的功能及生物学活性展开研究奠定了基础。
- 王春红周秀梅刘辉黎江钱其军
- 关键词：穿膜肽转录因子原核表达
- 表达EGFR与HER2双抗体融合蛋白腺病毒载体研究
- 2011年
- 构建携带Cetuximab全长抗体与Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)融合蛋白的腺病毒,探讨其在体外表达情况,及其与EGFR和HER2的结合能力。通过PCR,将抗体cetuximab基因与编码Herstatin C末端79个氨基酸(Herin)的序列融合,构建携带西妥昔单抗全长基因与Herin融合基因的腺病毒穿梭载体pDC339-AT2-Herin,并在293细胞内包装成重组病毒Ad5-AT2-Herin。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Ad5-AT2-Herin表达全长抗体融合蛋白的体外表达量;应用Western印迹法检测所表达全长抗体轻重链的完整性及均衡性;应用间接免疫荧光法(IFA)检测所表达的融合蛋白与EGFR(+)Her2(-)的A431细胞,以及EGFR(-)Her2(+)的SK-OV-3细胞膜结合的特异性。ELISA检测分析表明,Ad5-AT2-Herin在293细胞中的表达量为209.3 ng/mL—317.3 ng/mL;Western blot显示轻重链表达平衡,大小符合预期;间接免疫荧光(IFA)显示腺病毒表达的融合蛋白与A431细胞表面受体EGFR及SK-OV-3细胞表面受体Her2均能特异性结合。成功构建携带EGFR和HER2双特异性抗体基因的腺病毒载体Ad5-AT2-Herin,该载体在体外能高效表达双特异性抗体蛋白AT2-Herin,而且AT2-Herin蛋白能在体外与EGFR和HER2特异结合。
- 侯兵钱其军金华君范丽
- 关键词：CETUXIMAB融合蛋白腺病毒载体
