海外青年学者合作研究基金(30128010)
- 作品数：19 被引量：140H指数：7
- 相关作者：张成岗周仁平孟凡伟郭慧云王利红更多>>
- 相关机构：军事医学科学院吉林大学中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：海外青年学者合作研究基金国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生自动化与计算机技术更多>>
- 乳鼠嗅球及皮层神经元的原代培养和Netrin-4受体在神经元定位的初步研究
- 2004年
- 目的 培养原代嗅球及皮层神经元细胞 ,研究神经轴突生长诱向因子 (Netrin 4 )受体在神经元细胞中的定位。方法 改良Koh法分离、培养出生 12h内Wistar乳鼠的嗅球及皮层神经元 ,采用免疫细胞化学方法鉴定其纯度。碱性磷酸酶 (AP)标记的Netrin 4融合蛋白与原代培养第 7d的神经元孵育 ,以亲和细胞化学法检测Netrin 4受体在神经元的定位。结果 原代培养第 7d的嗅球及皮层神经元胞体饱满 ,突起长并交织成网状 ;免疫细胞化学染色见神经丝蛋白(neurofilament)在神经元胞体及突起中表达 ;嗅球及皮层神经元的细胞膜上均有Netrin 4受体表达。结论 建立起高效、稳定的原代神经元培养方法并应用于神经突起生长诱向因子受体的定位研究。
- 余科科张成岗汪思应
- 关键词：嗅球神经元
- 序列比对程序Blat在转录组数据分析中的应用被引量：3
- 2005年
- 随着功能基因组学研究领域的快速发展,人们已经开始系统地研究全基因组的转录以及全部基因发挥功能的动态机制。为实现此目标,需要从海量的转录组数据中提炼出能够揭示基因功能以及表达调控的重要信息。采用高性能的序列比对程序以满足规模化的比对需求是其中的瓶颈环节。通过综合比较目前流行的各种序列比对软件的性能,并针对不同的转录组数据分析任务对Blat进行详细的应用分析,结果发现,Blat能够解决转录组数据分析过程中的序列比对这一瓶颈,可广泛应用于功能基因组相关的数据分析任务。
- 杭兴宜赵东升张成岗
- 关键词：数据分析转录功能基因组学全基因组基因功能
- β-Netrin抗原表位的分析及其抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定。方法:应用GoldKey软件分析人βNetrinC末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽。然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化。对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Westernblot进行鉴定。同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性。另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Westernblot鉴定其特异性。结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-Netrin mAb的杂交瘤细胞。免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原。另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb。
- 余利红高艳王利红韩洪彦孙志贤张成岗
- 关键词：合成肽抗原表位抗体制备抗体鉴定
- 大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定被引量：28
- 2003年
- 脑红蛋白 (NGB)是新发现的脑特异的携氧蛋白 .为了对其功能进行深入的研究 ,应用已构建大鼠NGB基因编码区原核表达载体pGEX 4T 2 NGB转化的大肠杆菌BL2 1 ,获得可溶性表达产物 .用谷胱甘肽S 转移酶 (GST)亲和层析柱纯化后作为抗原 ,免疫Balb c小鼠 .通过传统的细胞融合方法制备了抗大鼠NGB的单克隆抗体 ,并对全部 4株单抗进行了亚类和亚型、效价和特异性鉴定 .
- 孙健伟韩洪彦徐文琳王春丽王航雁徐淑玲杨建萍张家洁于凤琴张成岗
- 关键词：脑红蛋白原核可溶性表达单克隆抗体
- 神经突起生长导向因子(netrin)受体家族研究进展被引量：7
- 2004年
- 神经突起生长导向因子netrin是一种分泌蛋白 ,在神经发育所需的轴突导向及细胞迁移中发挥双重导向功能———吸引或排斥 ,主要依赖于生长锥所表达的不同受体结肠癌缺失蛋白 (DCC)或UNC5同源物 (UNC5H) ,从而传递不同信息。同时 ,dcc和unc5h也是肿瘤抑制基因 ,近年来的研究显示这种双重导向功能可能归因于它们属于配体依赖性受体家族。依赖性受体的重要特征是缺乏相应配体时将诱导细胞凋亡 ,因此推测DCC和UNC5H不仅为神经元传递信号所必需 ,同时也是细胞生存因子 ,与细胞存活及正常功能的发挥密切相关。
- 余科科汪思应张成岗
- 关键词：轴突导向
- 小鼠不同发育阶段脑蛋白质组学初步研究被引量：3
- 2006年
- 目的:本研究为国际脑蛋白质组计划(HUPO BPP)的预实验部分,旨在获得可靠的小鼠脑蛋白质组数据库,比较和评估小鼠不同发育阶段的脑蛋白质组,为下一步进行神经系统疾病的蛋白质组学研究奠定基础。方法:样品来源于国际脑蛋白质组委员会所提供的胚胎16 d、出生后7 d及生后60 d等3个发育时期的C57/B l6雌性小鼠脑组织。常规方法提取组织总蛋白,采用固相pH梯度的二维电泳分离和串联质谱分析等进行鉴定,使用M ascot软件搜索Un iProt数据库,鉴定蛋白种类。结果:获得3个不同发育时期小鼠脑组织蛋白质表达谱,完成国际脑蛋白质组计划的预实验所要求的质量控制,鉴定出各发育阶段均有稳定表达的4个蛋白点,包括α烯醇酶、磷蛋白质P19及2个肌动蛋白。经进一步评估后鉴定出随年龄增大而丰度减低的C14orf166同源蛋白、28×103热/酸稳定的磷蛋白、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40S核糖体蛋白S3 a等4个蛋白。其中α烯醇酶及C14orf166同源蛋白曾有文献报道与神经发育及组织发生密切相关。结论:蛋白质组学的方法为脑发育研究提供了有参考价值的数据,其差异蛋白的发现可促进对神经发育机制的了解,并将为后续启动神经系统疾病蛋白质组学研究提供参考。
- 王静王利红高艳杭兴宜王航雁张成岗
- 关键词：蛋白质组双向电泳神经发育小鼠
- 轴突生长诱向因子(Netrin)基因家族研究进展被引量：8
- 2003年
- 在神经系统发育过程中,神经与其靶细胞之间精确联系的形成是依靠多种细胞外诱向因子介导实现的.这些因子通过作用于轴突生长锥上的相应受体而诱导或排斥轴突生长,从而决定了轴突的生长路线以及轴突与特定靶细胞的功能联系.
- 孟凡伟郭慧云张成岗
- 关键词：基因神经系统发育
- 沙鼠脑缺血再灌注损伤后血清脑红蛋白变化被引量：11
- 2005年
- 尚爱加周定标王利红张成岗
- 关键词：脑缺血再灌注损伤血清脑红蛋白脑损伤
- 利用碱性磷酸酶融合表达技术研究神经导向因子netrin-4的功能
- 2006年
- 目的:采用碱性磷酸酶(AP4)标记技术研究netrin-4的神经导向功能和受体结合特征,并评估碱性磷酸酶作为标签分子在真核基因功能研究中的意义。方法:将netrin-4全长及3个结构域编码区cDNA克隆到碱性磷酸酶表达载体APtag4,成功构建真核表达载体AP4-netrin4、AP4-LNT、AP4-EGFL和AP4-NCT,进而在COS7细胞中表达出含有AP标签的融合蛋白,并通过神经组织块培养技术和神经元原代培养技术对其活性进行鉴定。结果:确认了netrin-4的神经突起导向功能。进一步通过对AP标签进行检测,发现netrin-4全长、LNT和NCT可与原代培养的神经元表面相结合,而EGFL不结合,说明神经元表面含有netrin-4受体或结合位点,且可能通过LNT和NCT结构域起作用。结论:netrin-4具有明确的神经突起导向功能,在神经元表面含有结合位点,同时发现碱性磷酸酶标签融合表达技术在真核基因功能研究方面具有一定优势。
- 秦树桐高艳王利红周仁平张成岗
- 关键词：碱性磷酸酶基因神经元
- Hetrin基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究被引量：12
- 2004年
- 本文目的是 :观察 hetrin基因在大鼠脑发育过程中的表达变化规律 ,藉以探讨 hetrin在神经系统发育过程中的作用。以地高辛 (dig)标记 hetrin基因 3 ' -末端 c RNA为探针 ,采用原位杂交法研究 hetrin m RNA在生后第 10 d(P10 )、P3 0和 P60大鼠脑中的分布状况 ;同时采用半定量 RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内 hetrin m RNA表达水平的变化。结果发现 ,hetrin m RNA原位杂交阳性信号定位于神经元胞质内 ,在 P10、P3 0和 P60大鼠的脑组织中均可见明显的杂交信号。 RT-PCR结果显示 ,在胚胎第 9d(E9)大鼠脑内 hetrin m RNA开始表达 ,但表达量很低 ,以后其表达量逐渐升高。出生后大鼠不同脑区 hetrin m RNA的表达量变化趋势不同。本实验结果表明 ,在胚胎期及出生后大鼠脑的多个部位都有 hetrin m RNA表达 ,而且 hetrin m RNA表达量与神经细胞突起生长及新突触连接的建立在时间上有一定的同步性 ,提示 hetrin m RNA的表达与神经突起生长存在着一定的关系 ,进一步支持存在
- 孟凡伟郭慧云周仁平张成岗
- 关键词：NETRIN发育RT-PCR神经系统
