国家重点基础研究发展计划(2005CB522705)
- 作品数：25 被引量：80H指数：5
- 相关作者：毛宁卢光琇林戈张文杰曹谊林更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中南大学上海交通大学医学院附属第九人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 拮抗TGF-β_1可抑制胚胎干细胞来源BL-CFC的产生和分化
- 2007年
- 胚胎干细胞来源的BL-CFC体外可分化产生造血和内皮细胞。为了研究TGF-β1对BL-CFC产生和分化的调控作用,在拟胚体培养阶段施加TGF-β1和TGF-β1中和抗体,观察不同阶段TGF-β1对BL-CFC的数目及其定向内皮和造血细胞分化能力的影响。结果表明:在拟胚体培养阶段拮抗TGF-β1的作用可显著降低BL-CFC的数量(P<0.01);与之吻合的,中和TGF-β1后拟胚体中Flk-1+细胞比例降低。此外,在拟胚体培养阶段加入TGF-β1可显著增强BL-CFC的造血和内皮细胞分化能力,而中和TGF-β1后分化能力降低。结论:TGF-β1对BL-CFC的产生和分化发挥正向调节作用。
- 要晖宇刘兵王晓燕毛宁
- 关键词：TGF-Β1胚胎干细胞
- 胚胎干细胞标志CD31、SSEA-1在小鼠胚胎发育和成体组织中表达的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的观察胚胎干细胞表面标志CD31、SSEA-1在小鼠胚胎发育过程中不同阶段的表达及在新生鼠、成体骨髓、睾丸中的表达情况,为进一步利用它们作为分子标志从胚胎及成体组织中分离多潜能性干细胞奠定基础。方法本实验选用129/SV系小鼠。孕10.5天、14.5天、18.5天的胚胎各取3例,新生鼠、6周龄成年鼠骨髓、成体睾丸各取3例,0.3%胶原酶消化获得单细胞悬液,经抗体染色标记后,通过流式细胞仪分析CD31、SSEA-1的表达情况。结果胚胎第10.5天、14.5天、18.5天和新生鼠中均有CD31、SSEA-1的表达,阳性细胞量随胚胎发育呈下降趋势。成年鼠骨髓和睾丸组织中也有CD31、SSEA-1阳性细胞存在,含量低于胚胎中的数量。结论 CD31、SSEA-1在小鼠个体发育过程以及成体组织中都有不同程度的表达,阳性细胞比率随个体发育而降低。
- 王书军付炜张文杰
- 关键词：胚胎骨髓睾丸
- 诱导人孤雌胚胎干细胞分化为胰岛样细胞团被引量：3
- 2010年
- 背景:随着人类孤雌胚胎干细胞系的成功建立,对该细胞的进一步分化功能研究成为新的研究热点。目的:研究体外培养的人类孤雌胚胎干细胞诱导分化为胰岛样细胞团的潜能。方法:自主建系孤雌来源人胚胎干细胞和正常来源人胚胎干细胞各1株,运用基于胰腺体内发育规律的改良5阶段诱导法诱导人孤雌胚胎干细胞为胰岛样细胞团,加入不同生长因子及诱导试剂对人胚胎干细胞分5阶段序贯培养。结果与结论:终末分化细胞光镜下呈团状聚集,RT-PCR、免疫荧光染色检测分化细胞表达胰岛细胞特征性的基因与蛋白。胰岛素释放实验提示获得的细胞具有胰岛样生化功能。由人类孤雌胚胎干细胞来源的胰岛样细胞团具备胰岛的基本特征,是未来治疗1型糖尿病的可用材料。
- 周静李进林戈卢光琇
- 关键词：胰岛样细胞团诱导分化糖尿病干细胞
- 类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系被引量：1
- 2009年
- 目的研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系。方法小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养。扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、SSEA1和Flk-1)的表达情况。分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达。将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力。Oct-4/GFP转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率。结果在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1。残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志。残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤。单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力。结论残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力。
- 皮庆猛付炜石伦刚唐郑雅曹谊林张文杰
- 关键词：胚胎干细胞分化全能性白血病抑制因子
- 间充质干细胞的免疫调节功能及间充质干细胞在治疗自身免疫疾病中的应用被引量：6
- 2009年
- 间充质干细胞(MSC)是一类可从多类成体组织中分离的能向脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞等分化的成体干细胞,是组织工程细胞的一个理想来源。它能够与免疫系统相互作用,抑制T细胞、B细胞和NK细胞的功能,影响DC的活性。输入体内后,MSC可诱导外周免疫耐受并且可迁移到受损组织,抑制促炎症因子表达,促进受损细胞的存活。近年来MSC应用于对移植物抗宿主疾病(GVHD)的治疗,很好的降低了GVHD发生率和进程。MSC的这种免疫调节作用对治疗自身免疫疾病应该有良好的应用前景。本文主要综述MSC的免疫调节机制和MSC对自身免疫疾病的治疗进展。
- 孔维霞江小霞毛宁
- 关键词：间充质干细胞自身免疫疾病免疫调节功能
- 诱导人孤雌胚胎干细胞向类间充质干细胞分化的实验研究
- 2010年
- 目的探索人孤雌胚胎干细胞在体外向类间充质干细胞诱导分化的方法 ,并鉴定所得细胞的生物学特性。方法人孤雌胚胎干细胞在无血清条件下悬浮培养,形成拟胚体,10d后在含血清条件下使拟胚体贴壁生长,7d后胰酶消化,所得细胞在含血清的培养液中传代、扩增。观察传代、扩增后细胞的形态学变化;用免疫荧光染色和流式细胞技术进行细胞表型分析;取第9代细胞进行成脂、成骨和成软骨诱导,9～28d后行特殊染色及RT-PCR分析。结果人孤雌胚胎干细胞在诱导分化后,形态与骨髓间充质干细胞相似,多次扩增传代后仍保持细胞形态和扩增能力。免疫荧光染色发现,细胞表达中胚层标志波形蛋白(Vimentin)。流式细胞分析显示,细胞表达CD29、CD105、CD166、CD44等间充质干细胞表面标志。特殊染色及RT-PCR分析显示:成骨诱导后,细胞碱性磷酸酶和茜素红染色阳性,碱性磷酸酶和Cbfa-1表达增加;成软骨诱导后,细胞Ⅱ型胶原染色阳性,Ⅱ型胶原和软骨寡聚基质蛋白(COMP)表达增强;成脂诱导后,细胞油红染色阴性,脂蛋白酶和Leptin无表达。结论人孤雌胚胎干细胞可以诱导、分化为间充质干细胞,并具有成骨、成软骨分化潜能。
- 艾爱陈瑶唐郑雅宋楠曹谊林张文杰
- 关键词：间充质干细胞分化
- 人胎盘间充质干细胞对脐血CD34^+细胞迁移作用的影响被引量：2
- 2010年
- 人胎盘作为间充质干细胞的新来源在调控造血干/祖细胞(CD34+细胞)发育与分化方面具有重要作用,但其在移植中是否对CD34+细胞迁移起作用尚不清楚.为此,本研究通过胰酶消化法和密度梯度离心法,单克隆筛选培养出人胎盘来源间充质干细胞,RT-PCR检测其与造血和趋化相关的细胞因子和黏附分子的表达;进一步利用transwell体系检测其对脐血CD34+细胞的迁移作用.结果表明,PDMSCs呈现典型的成纤维样细胞,表达间充质干细胞相关表面抗原CD73,CD90和CD105,不表达造血及内皮细胞表面抗原CD34,CD45,CD31等,PDMSCs具有诱导成脂肪、成骨和成软骨的能力.RT-PCR检测结果显示,PDMSCs表达IL-6,LIF,G-CSF,GM-CSF,M-CSF,FL,SCF,SDF-1,VEGF等多种造血与趋化因子,Integrinβ1,Integrinα5,ICAM-1,ICAM-2,ICAM-3,VCAM-1等多种黏附分子;将PDMSCs按照不同密度接种在transwell体系,4h后脐血CD34+细胞迁移率随着PDMSCs的密度增加而增加;在PDMSCs与SDF-1对CD34+细胞的趋化迁移比较实验中,PDMSCs对CD34+细胞的迁移作用明显高于单纯的SDF-1.上述结果提示,PDMSCs对脐血CD34+细胞具有明显的迁移作用,为今后探讨PDMSCs与脐血CD34+细胞共移植是否促进CD34+细胞的植入提供理论基础与实验依据.
- 霍思维苏永锋刘元林江小霞吴英毛宁张毅
- 关键词：胎盘间充质干细胞脐血CD34^+细胞迁移
- 间充质干细胞定向成骨细胞分化的蛋白质组学分析被引量：15
- 2006年
- 目的探讨用蛋白质组学方法分析人骨髓间充质干细胞(MSCs)定向成骨细胞诱导分化中细胞蛋白表达谱的改变.方法从人骨髓细胞中分离获得MSCs,经细胞表型及多向分化能力测定鉴定MSCs的纯度和功能后,采用定向成骨细胞分化诱导培养体系,于分化后14d分别提取未分化细胞及分化后细胞的总蛋白,双向电泳分析,确定蛋白差异点,经酶切后行蛋白肽质量指纹谱鉴定差异蛋白表达.结果双向电泳找到38个蛋白差异点,质谱分析鉴定出23个差异蛋白分子表达.结论用蛋白质组学方法可高通量筛选与MSCs定向诱导成骨细胞分化相关的重要蛋白.
- 刘元林于晓妉刘晓丹李秀森毛宁
- 关键词：蛋白质组学间质干细胞蛋白表达
- 人孤雌胚胎干细胞与正常胚胎干细胞分化能力的比较被引量：4
- 2010年
- 目的比较人类孤雌胚胎干细胞(pESCs)系与正常胚胎干细胞(nESCs)系的分化能力,探讨pESCs是否和nESCs一样具有多向分化潜能。方法将pESCs和nESCs分别注射到重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠体内形成畸胎瘤,瘤体组织切片和HE染色后进行组织学分析;将pESCs和nESCs体外悬浮培养形成拟胚体(EB),利用RT-PCR检测3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;将pESCs和nESCs定向诱导分化为滋养层细胞,通过流式细胞仪测定人绒毛膜促性腺激素-β(hCG-β)阳性细胞比例以及通过酶联免疫吸附测定(ELISA)进行hCG-β的定量分析。结果在体内生长和体外培养过程中,pESCs和nESCs均能够向3个胚层的细胞类型分化。在SCID小鼠体内可形成畸胎瘤,有神经上皮、软骨、腺上皮等3个胚层的衍生物产生;pESCs和nESCs来源的EB在体外自发分化5～21d后,均检测到3个胚层主要器官以及滋养层细胞发育关键基因的表达;pESCs定向分化为滋养细胞后,可以检测到hCG-β的表达,但其阳性细胞比例和分泌量均低于nESCs。结论 pESCs具有向3个胚层以及滋养层细胞分化的能力,但是向滋养层细胞分化的能力仍低于nESCs。
- 欧阳琦林戈周晓樱卢光琇
- 关键词：胚胎干细胞孤雌胚胎干细胞分化细胞培养
- 干细胞诱导形成软骨细胞研究进展被引量：4
- 2006年
- 组织工程技术构建软骨需要大量的软骨细胞,成熟的软骨细胞扩增能力有限,难以满足组织构建需要。干细胞,包括胚胎干细胞、成体干细胞,均具有强大的自我更新能力及多向分化潜能。在适当的诱导条件下,这些干细胞均可被诱导分化为软骨细胞,从而满足组织工程需求。
- 谢峰张文杰曹谊林
- 关键词：胚胎干细胞骨髓基质干细胞脂肪干细胞软骨细胞分化
