广东省科技计划工业攻关项目(20006B36008005)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：任瑞文方美玉徐晓立刘建伟白志军更多>>
- 相关机构：广州军区疾病预防控制中心华南农业大学广州医学院附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 4株蚊媒病毒多重RT-PCR快速检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒的多重RT-PCR快速检测方法。方法参照病毒核酸序列设计多重RT-PCR引物,并检索GenBank国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对Mg2+、dNTP及引物浓度,RT-PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的多重RT-PCR快速检测4株病毒方法 ,并以同属于黄病毒科的登革3型病毒、登革4型病毒及甲病毒属基孔肯亚病毒、辛德毕斯病毒为对照,验证其特异性。结果应用多重RT-PCR反应体系,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果 ;采用多重RT-PCR引物对登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒进行扩增,分别获得574、251、879、422 bp片段,与设计相符,而对照病毒组均无非特异性扩增条带。结论实验证明,所建立的多重RT-PCR方法能够快速地检测登革1、2型病毒、黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒,为其检测提供了一种方便易行的方法 。
- 王军军李歆任瑞文
- 关键词：登革病毒黄热病毒流行性乙型脑炎病毒多重RT-PCR
- 微孔杂交快速检测主要黄病毒方法的建立被引量：3
- 2008年
- 目的建立特异、敏感、实用的登革病毒Ⅰ-Ⅳ型、流行性乙型脑炎病毒及黄热病毒检测及分型方法。方法在系统分析上述病毒基因组序列基础上,分别设计针对6种病毒的特异性包被探针,扩增、克隆、测序后包被聚乙烯微孔板。随后设计检测用PCR引物,并于引物5′端标记生物素,对待检样品进行扩增后用检测探针进行微孔杂交(PCR-ELISA)反应,并对包被DNA浓度、包被时间、杂交温度、杂交时间等反应条件进行优化。结果初步建立了微孔杂交快速检测上述病毒的方法,试验结果直观,阳性标本吸光度(A)值在0.5以上,阴性结果A值在0.1以下,S/N值在10.0以上。结论PCR-ELISA方法敏感、特异,为上述病毒的快速诊断提供了新的方法。
- 任瑞文徐晓立方美玉刘建伟洪文艳
- 关键词：登革热病毒黄热病毒PCR-ELISA
- 主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定
- 目的对主要黄病毒结构蛋白的抗原表位情况进行系统分析,鉴别共同及特异性抗原表位,并对可能的特异性抗原表位进行原核表达,为下一步病毒致病机理及诊断试剂的研制奠定基础。方法分别利用Dnastar及ANTHEPROT软件对登革病...
- 任瑞文唐博恒方美玉刘建伟白志军
- 关键词：黄病毒抗原表位原核表达
- 主要黄病毒E蛋白抗原表位分析与初步鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的对主要黄病毒结构蛋白的抗原表位情况进行系统分析，鉴别共同及特异性抗原表位并对可能的特异性抗原表位进行原核表达。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎（乙脑）病毒及黄热病毒E蛋白的亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性和Gamier-Robson的二级结构进行分析，预测可能的抗原表位。在此基础上，根据表位位置和氨基酸序列的相似性，分析6种病毒的共有及特异性抗原表位，并参考GenBank中的序列信息，对预测的抗原表位进行比对，进一步分析抗原表位在不同病毒株中的保守性。然后利用pET32及pMAL-c2x系统对可能的特异性抗原表位进行高效原核表达、Westernblot验证其抗原性。结果经系统的生物信息学分析，共预测获得登革病毒1～4型、乙脑病毒及黄热病毒共有抗原表位15个，病毒特异性抗原表位47个。利用pET32及pMAL-c2x系统对6种病毒部分可能的特异性抗原表位进行了高效表达。Westemblot结果显示登革病毒1型及2型表达抗原片段表现良好的抗原反应原性，并与试验中所用其他黄病毒及甲病毒多克隆抗体无明显的交叉反应。而所表达的登革病毒3型和4型、乙脑病毒及黄热病毒片段无抗原反应原性。结论6条原核表达抗原片段经Westernblot验证，获得登革病毒1型和2型特异性抗原片段。
- 徐晓立杨建军任瑞文刘建伟马四辈白志军方美玉
- 关键词：黄病毒抗原表位原核表达
- 疏水性区域及稀有密码子对登革2型病毒E基因原核表达影响的分析
- 2008年
- 登革病毒E蛋白是病毒主要毒力蛋白，带有型特异及属特异抗原决定簇，既能诱导宿主产生保护性的中和抗体，又能诱导产生血凝抑制抗体，与登革出血热（DHF）和登革休克综合征（DSS）的致病机制有关。有学者已经利用包括大肠埃希菌、毕赤酵母、昆虫细胞等多种表达系统对其表达条件进行了探讨，由于受未知因素的影响，登革病毒E蛋白的原核重组表达一直不理想。本研究对登革病毒E蛋白不同区域的原核表达进行了较为系统的分析，探讨疏水性区域及稀有密码子登革病毒E蛋白表达的影响，并对部分区域进行了高效原核表达。
- 任瑞文徐晓立方美玉刘建伟白志军程刚锋赵文忠
- 关键词：登革病毒结构基因
