公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

人表面活性物质蛋白B基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒的构建及活性检测: 2013年; 目的构建人表面活性物质蛋白-B（SP-B）基因启动子荧光素酶报告基因重组质粒，并分析其在H441细胞中的转录活性。方法（1）以人基因组DNA为模板，PCR扩增SP-B启动子（-218／＋435bp）序列片段，并通过TA克隆方法连接到pGM-T载体上，筛选阳性克隆将目的片段进行测序。测序鉴定正确后的目的片段被克隆到荧光素酶表达载体pGL3-Basic上构建pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒，酶切及测序鉴定重组质粒；（2）将构建的pGL3-basic-SP-B-promoter重组质粒酶切改造，sP-B启动子克隆进pGL4．17载体构建pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒；经酶切及基因测序确认无误后，采用脂质体法将构建的两种重组质粒分别和内参质粒pRL-TK同时转染H441细胞，检测双荧光素酶活性。结果构建的重组质粒经酶切及测序鉴定完全正确，转染H441细胞后，检测细胞裂解液萤火虫荧光素酶（firefly）及海肾荧光素酶（renilla）活性，两者比值间接反映启动子活性，pGL3-basic／pGL4．17-SP-B-promoter重组质粒的firefly／reniUa比值（2．8±1．1、66．5±3．8）较空载体质粒pGL3-basic、pGIA．17（0．2±0．1，4．3±0．4）均明显升高（t=4．182，27．419，P=0．000）。pGL4．17重组质粒firefly／renilla比值明显高于pGL3-basic重组质粒，其差异有统计学意义（t=27．712，P=0．000）。结论成功构建具有sP-B基因转录活性的pGL3-basie／pGIA．17-SP-B-promoter重组质粒，oGL4．17萤组质粒荧光素酶活性高，为后续研究SP-B基因转录调控奠定了理论基础。; 王席娟蔡保欢李文斌刘伟王靓常立文; 关键词：肺表面活性剂遗传学遗传学质粒遗传学

hGfap基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中表达模式的研究: 2013年; 目的:探讨以人胶质纤维酸性蛋白(hGfap)基因启动子介导的Cre重组酶在小鼠小脑中的表达。方法:将hGfapcre转基因小鼠与Rosa26R转基因鼠杂交得到hGfapcre/Rosa26R基因型小鼠,分别在胚胎12.5、13.5、14.5、16.5 d和出生后3周,取小脑组织切片行X-gal染色观察Cre重组酶分布;另外,出生后3周的小脑组织切片同时使用细胞种类特异性抗体Blbp(星形胶质细胞标记物)、NeuN(颗粒细胞标记物)、Calbindin(浦肯野细胞标记物)进行免疫组织化学染色鉴定X-gal染色阳性细胞类型。结果:胚胎13.5 d,小脑菱唇开始出现X-gal染色阳性细胞;此后Cre重组酶表达范围进一步扩大,至胚胎16.5 d,X-gal染色阳性细胞可覆盖整个小脑;在出生后3周,X-gal染色阳性细胞可以和Blbp及NeuN共标记,和Cal-bindin不能共标记。结论:以hGfap基因启动子介导的Cre重组酶最早在胚胎13.5 d的菱唇开始表达,并且Cre重组酶主要表达于星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞,不表达于浦肯野细胞,表明在小脑发育过程中以GFAP为标记物的胶质细胞主要向星形胶质细胞(包括Bergmann胶质细胞)和颗粒细胞分化,不向浦肯野细胞分化。; 王席娟郭志宝王伟常立文; 关键词：细胞分化胶质纤维酸性蛋白 CRE重组酶

地塞米松对氧化应激状态下H441细胞肺表面活性蛋白A、B、C和D的mRNA及蛋白质表达的影响被引量：1: 2013年; 目的探讨地寒米松对氧化应激时H441细胞肺表面活性蛋白（surfactant protein．SP）A、B、C和D表达的影响。方法采用H2O2制作H441细胞氧化晦激模型。实验分为对照组、不同浓度地塞米松（1、10和100μmol／L）组、H2O2（100μmol／L）损伤组、H2O2（100μmol／L）±地塞米松（100μmol／L）组。共培养24h后采用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测各组培养细胞中SP-A、B、C和DmRNA的表达水平，采用Western印迹技术榆测SPA、B、C和D蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分忻，并采用Dunnett’s T3检验进行两两比较。结果（1）H2O2损伤组SP-A mRNA表达水平明娃高丁对照组（4．0016±0．3618与0．9914±0．4170），向SP-C与SPD表达明显低于对照组（SP-C：0．2840±0．0586与0．9719±0．1022；SP—D：0．6199±0．0074与0．9518±0．0614），差异均有统计学意义（P均〈0．05）；与H2O2损伤组相比，H2O2±地寒米松组SPAmRNA的表达水平下降（2．5191±0．3463），而SP-D mRNA的表达水平升高（0．9076±0．0167）。差异均有统计学意义（P均〈0．05）。（2）H2O2损伤组SP-A蛋白表达水平明显高于对照组（2．1795±0．0645与0．9728±0．0090），SP-B、SP—C与SPD蛋白表达水平明显低于对照组（SP-B：0．2593±0．0086与0．7253±0．0134；SP-C：0．5592±0．0111与0．9472±0．0052；SP-D：1．1550±0．0237与1．2991±0．0298）；与H2O2损伤组相比，H2O2±地塞米松组SPA蛋白表达降低（1．4974±0．0185），而SP-B、SP-C与SP-D蛋白表达水平升高（0．7389±0．0182、0．9244±0．0282和1．3339±0．0136），筹砰均有统计学意义（P均〈0．05）。结论地塞米松可能通过调节SP的表达，对H441细胞氧化心激损伤发挥保护作用。; 蔡保欢李文斌刘伟王席娟赵玲霞莫璐霞王靓常立文; 关键词：氧化性应激细胞系肺表面活性物质相关蛋白质类地塞米松

支气管肺发育不良患儿肺表面活性蛋白-B基因9306（A／G）多态性被引量：2: 2013年; 目的了解支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia，BPD）患儿肺表面活性蛋白-B（surfactant protein-B，SP—B）基因9306（A／G）位点多态性的分布情况。方法研究对象为2008年1月1日至2012年6月30日华中科技大学同济医学院附属同济医院新生儿重症监护病房收治的86例BPD患儿与156例无相关疾病的患儿（对照组），采用限制性片段长度多态性-聚合酶链反应技术检测SP—B基因9306（A／G）位点基因型，样本的群体代表性进行HardyWeinberg平衡检验；2组病例基因型频率比较采用Armitage’s趋势检验。结果BPD组AA基因型频率为67．4％（58／86），AG基因型频率为23．3％（20／86），GG基因型频率为9．3％（8／86），对照组各基因型频率分别为63．5％（99／156）、30．8％（48／156）和5．8％（9／156），2组差异没有统计学意义（X^2=0．003，P=0．957）。BPD组A等位基因频率为79．1％（136／172），G等位基因频率为20．9％（36／172），对照组A、G等位基因频率分别为78．8％（246／312）和21．2％（66／312），2组差异没有统计学意义（X^2=0．003，P=0．954）。结论汉族婴儿SP—B基因9306（A／G）位点的基因多态性与BPD发病无直接相关性。; 蔡保欢李文斌刘伟王席娟赵玲霞莫璐霞常立文; 关键词：支气管肺发育不良基因多态性

长时间高体积分数氧暴露对角化上皮生长因子保护胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞效应的抑制作用被引量：2: 2014年; 目的探讨高体积分数氧（高氧）环境下,角化上皮生长因子（KGF）对Sprague-Dawley（SD）大鼠胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡCs）增殖/存活、凋亡及死亡水平的影响.方法提取SD大鼠胎鼠ATⅡCs进行原代培养,在常氧环境下[210 mL/L氧气（O2）]、高氧环境（950 mL/L O2）下分别培养细胞,并给予不同质量浓度的KGF（15 μg/L、25 μg/L、50 μg/L、75 μg/L、100 μg/L）,将细胞按随机数字表法分为单纯常氧组、常氧＋KGF组、单纯高氧组、高氧＋KGF组,采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用细胞增殖检测法（MTT比色法）、乳酸脱氢酶释放试验（LDH法）检测细胞存活、死亡情况,Western Blot检测细胞凋亡指标活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Caspase-3）蛋白的表达.结果常氧环境下培养细胞,常氧＋KGF组KGF 15～ 100 μg/L质量浓度范围内,各质量浓度组MTT水平显著高于单纯常氧组,25～ 100 μg/L质量浓度范围内各浓度组LDH显著低于单纯常氧组.与单纯常氧组相比,高氧环境暴露下细胞内ROS水平明显升高,呈现时间依赖性,高氧暴露4h以上,细胞活力显著下降、细胞死亡水平明显升高.高氧暴露0.5～1.0 h,高氧＋KGF组15～75 μg/L质量浓度范围内,各质量浓度组MTT水平显著高于单纯高氧组,15 ～75 μg/L KGF内各质量浓度组LDH显著低于单纯高氧组.高氧暴露4h后,15 μg/L及25 μg/L高氧＋KGF组细胞MTT水平高于单纯高氧组,25 ～ 100 μg/L范围内LDH释放水平低于单纯高氧组.延长高氧暴露时间达8h,仅高氧＋50 μg/LKGF组细胞存活水平高于单纯高氧组,高氧＋75 μg/L KGF组细胞死亡水平低于单纯高氧组.高氧暴露达12 h时,与单纯高氧组相比,高氯＋KGF各质量浓度组细胞存活、死亡水平均无显著差异.高氧暴露4～8 h时,与单纯常氧组相比,细胞凋亡指标活化的Caspase-3水平显著升高;与此同时,在上述时间点分别需要25 μ; 王靓刘伟李文斌程婷婷高春芳莫露霞常立文

Association of Surfactant Protein B Gene Polymorphisms (C/A-18, C/T1580, Intron 4 and A/G9306) and Haplotypes with Bronchopulmonary Dysplasia in Chinese Han Population被引量：4: 2013年; This study aimed to investigate the association between surfactant protein B (SP-B) polymorphisms and bronchopulmonary dysplasia (BPD) in Chinese Han infants. We performed a casecontrol study including 86 infants with BPD and 156 matched controls. Genotyping was performed by sequence specific primer-polymerase chain reaction (PCR) and haplotypes were reconstructed by the fastPHASE software. The results showed that significant differences were detected in the genotype distribution of C/A-18 and intron 4 polymorphisms of SP-B gene between cases and controls. No significant differences were detected in the genotype distribution of C/T1580 or A/G9306 between the two groups. Haplotype analysis revealed that the frequency of A-del-C-A haplotype was higher in case group (0.12 to 0.05, P=0.003), whereas the frequency of C-inv-C-A haplotype was higher in control group (0.19 to 0.05, P=0.000). In addition, a significant difference was observed in the frequency of C-inv-T-A haplotype between the two groups. It was concluded that the polymorphisms of SP-B intron 4 and C/A-18 could be associated with BPD in Chinese Han infants, and the del allele of intron 4 and A allele of C/A-18 might be used as markers of susceptibility in the disease. Haplotype analysis indicated that the gene-gene interactions would play an important part in determining susceptibility to BPD.; 蔡保欢常立文李文斌刘伟王席娟莫璐霞赵玲霞徐洪涛杨慧; 关键词：中国汉族人群活性蛋白单倍型 PCR-SSCP

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(81170001)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

国家自然科学基金(81170001)

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈