辽宁省自然科学基金(201102196)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：吕淑霞于晓丹曹慧颖郝乐友张超更多>>
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- 表面活性剂脱氧胆酸钠在单增李斯特菌死活细胞EMA-PCR鉴别中的应用被引量：6
- 2013年
- 通过脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,SD)结合染料叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与PCR反应体系相结合,建立纯培养条件下区分单增李斯特菌死活细胞的方法,即SD-EMA-PCR鉴别单增李斯特菌死活细胞检测法。结果表明:向浓度为2.0×108CFU/mL的单增李斯特死菌悬液中加入终浓度为1.5 mg/mL的表面活性剂脱氧胆酸钠后,EMA激活光解最佳曝光时间为25 min。SD-EMA-PCR检测体系中,对死菌细胞DNA的PCR扩增抑制的EMA最小浓度为1.6μg/mL;而对活菌细胞DNA的PCR扩增不抑制的EMA最大浓度为9μg/mL,活菌细胞的最低检出限为20 CFU/mL。SD-EMA-PCR检测法能够减小EMA-PCR漏检死菌细胞给检测结果带来假阳性的可能,降低了检测的成本,为单增李斯特菌的快速检测提供了一种新的有效途径。
- 郝乐友吕淑霞张超于晓丹马镝曹慧颖
- 关键词：表面活性剂单增李斯特菌
- EMA-LAMP方法快速鉴别检测单增李斯特菌被引量：4
- 2012年
- 作者建立一种将叠氮溴化乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)结合环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的新分析方法(EMA-LAMP),快速鉴别检测单增李斯特菌。通过对单增李斯特菌hly基因的六个区域设计4条LAMP特异性引物,EMA-LAMP在63℃下反应1 h,检测单增李斯特菌的死活细胞。结果表明,在浓度为2.0×108CFU/mL的单增李斯特死菌悬液中,使EMA激活光解进入死细胞中且与DNA结合的最佳曝光时间至少为20 min,不抑制活菌细胞DNA的LAMP扩增的最大EMA质量浓度为10μg/mL,而抑制死菌细胞DNA的LAMP扩增的最小EMA质量浓度为4.0μg/mL;活菌细胞的检出限为20 CFU/mL。
- 吕淑霞徐彬于晓丹金雪花林英
- 关键词：单增李斯特菌
