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串联的人胸腺素α1基因在番茄中的高效表达被引量：11: 2009年; 【目的】提高免疫活性多肽人胸腺素α1(Tα1)在番茄中的表达量。【方法】根据植物偏爱密码子对Tα1基因进行优化,并将其顺式串联成四联体,同时在单体基因间插入肠激酶剪切位点基因序列,以便表达的融合蛋白可以被肠激酶切割成单体。利用农杆菌介导法将单体Tα1基因和四联体Tα1基因分别转化进入番茄。【结果】两个基因转化番茄后分别得到卡那霉素抗性再生植株19株和10株,PCR和Southern杂交检测证明,部分番茄基因组中整合了外源基因。经过Western和ELISA分析,串联的Tα1基因已经在番茄果实中表达,表达量最高相当于20.2μg T α1·g-1果实鲜重,高于单体基因的表达量。【结论】基因串联的方式提高了Tα1基因在番茄中的表达量。; 曹慧颖张锐郭三堆; 关键词：胸腺素Α1 转基因番茄生物反应器串联基因肠激酶

青麻epsps基因在酵母中表达被引量：2: 2007年; 将青麻epsps基因构建到酵母胞内表达载体pPIC3.5K中,利用电转化法将构建好的表达载体转入巴斯德毕赤酵母中,PCR技术筛选出阳性转化子,证明外源epsps基因已经整合到巴斯德毕赤酵母的基因组上,经诱导表达后SDS-PAGE分析获知外源基因在酵母中获得了表达。并且通过草甘膦压力筛选出耐性较好的重组酵母菌株,证明所获得的epsps基因具有生物学功能。; 程海刚张锐罗淑萍代培红郭三堆; 关键词：青麻巴斯德毕赤酵母

棉花恢复系中含有26S rRNA序列的GH18Rorf392基因克隆被引量：2: 2008年; 以Y18R×P30A杂交F1代自交材料播种后根据雄蕊形态学判断其育性,然后分别提取可育和不育材料现蕾3 ～5 d的幼蕾总RNA。通过抑制差减杂交的方法获得来自棉花恢复系的EST序列之后,以该EST序列设计引物再做5'和3'RACE,从而获得其全长cDNA序列。由于该基因来源于陆地棉(Gossypium hirsutum)恢复系Y18R,并且编码392个氨基酸的蛋白质,因此,将其命名为GH18Rorf392。该基因的5'端是一个全新的序列,3'端含有26S rRNA序列。该基因可能对研究棉花育性相关功能有帮助。; 吴巧雯宋洋张锐王远郭三堆; 关键词：恢复系抑制差减杂交细胞质雄性不育育性恢复

抗草甘膦基因(EPSPS)植物双价表达载体的构建被引量：2: 2009年; 针对目前报道的抗草甘膦转基因作物中,强组成型启动子驱动抗草甘膦基因在转基因植物的所有部位和所有发育阶段都表达,增加植株代谢负担,对植物的产量可能引起负效应的这一问题,利用Ag2这种草甘膦胁迫诱导启动子来驱动epsps基因,只在草甘膦喷施后高效表达对草甘膦的抗性。另外,同时利用具有组织特异性的启动子RuBP,使epsps基因在植物草甘膦农药田间喷施主要部位叶片中高效表达,应可以进一步增强转基因植物的抗草甘膦能力,但又不致过多地增加转基因植物的代谢负担,以利培育高抗草甘膦且农艺性状优良的转基因植物。实验分别以pBI121-E-M-Bt(Kanar)和pBI121-CP4E(Kanar)质粒为基础,通过载体pUC19及对EcoRⅠ位点的接头改造,构建了由RuBP启动子和新发现的诱导型启动子Ag2共同调控epsps基因的植物表达载体pGBI-Ag2EM-RuBPEM和pGBI-Ag2CP4E-RuBPCP4E,选择标记为卡那霉素,通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌LBA4404,并通过农杆菌介导的浸花法转化拟南芥,获得了T0代种子,为利用epsps基因改良植物对草甘膦的抗性奠定了物质基础。; 张晓枫张锐罗淑萍郭三堆; 关键词：草甘膦 EPSPS 拟南芥

人乳铁蛋白基因在番茄中的优化表达被引量：12: 2005年; 采用农杆菌介导法,将表达载体pB I121LF中的人乳铁蛋白(LF)基因(根据植物偏好密码子人工合成)导入番茄,经卡那霉素筛选,获得了再生植株。经PCR和Southern鉴定,证明部分番茄基因组中已经整合了lf基因。W estern检测表明,基因在果实中得到了表达。; 曹慧颖郭三堆; 关键词：乳铁蛋白转基因番茄生物反应器

制备棉花幼蕾高质量总RNA的方法比较被引量：10: 2008年; 以棉花和烟草的叶片及幼蕾为材料,分别用Trizol法和热硼酸/蛋白酶K法提取总RNA,对获得总RNA的量和纯度测定。结果表明,热硼酸/蛋白酶K法提取棉花幼蕾总RNA效果最好,得到的RNA具有质量高、完整性好等优点。; 宋洋吴巧雯郭三堆; 关键词：RNA TRIZOL法

棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系线粒体基因组文库的构建被引量：4: 2008年; 【目的】构建棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体BAC文库,为研究棉花线粒体基因组结构以及棉花细胞质雄性不育的形成机理提供基础。【方法】在借鉴其它作物的线粒体基因组BAC文库构建方法的基础上,对棉花线粒体DNA的提取及其BAC文库的构建进行探索和优化,构建了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系的线粒体BAC文库,并采用同源克隆的方法克隆棉花线粒体的功能基因。【结果】构建的不育系和保持系的线粒体基因组文库分别包括2600个克隆,插入DNA片段大小在10.3kb和37.5kb之间,平均分别为22.29kb和21.36kb。重组子的覆盖率分别达到棉花线粒体基因组的79倍和76倍。获得了3个棉花线粒体功能基因序列,通过比较,证明晋A不育系与其保持系的这3个基因序列无差异;以这3个基因为探针筛选文库,均获得阳性克隆。【结论】分别构建了棉花晋A细胞质雄性不育系及其保持系线粒体基因组的BAC文库。获得了晋A不育系与其保持系的orfB,coxⅠ和nad4L3个基因的全序列,通过比较,证明晋A不育系与其保持系在orfB、coxⅠ和nad4L基因全序列上无差异。; 黄晋玲胡建斌张锐郭三堆; 关键词：细胞质雄性不育线粒体基因组细菌人工染色体(BAC)文库

制备棉花高分子量线粒体DNA的方法被引量：5: 2007年; 黄晋玲胡建斌张锐郭三堆; 关键词：线粒体DNA 高分子量细胞质雄性不育线粒体基因组棉花高等植物

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国家高技术研究发展计划(AA211050)