浙江省科技厅重点资助项目(2006C23032)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：浙江省血液中心更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅重点资助项目浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓间充质干细胞对脐血CD34＋细胞分化为巨核细胞的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞的影响。方法:骨髓间充质干细胞培养采用低糖型DMEM培养基,待细胞满度达到约80%后加入脐血CD34+细胞在一定的培养体系中进行实验,同时以无骨髓间充质干细胞的相应培养体系作为对照,培养14 d后观察结果。实验中共观察了两种不同的培养体系:基础培养液、基础培养液+白细胞介素-11(IL-11)。其中基础培养液为含血小板生成素(TPO)、白细胞介素-3(IL-3)、干细胞因子(SCF)的低糖型DMEM。培养后单个核细胞数采用细胞计数仪分析,CD41+细胞和血小板检测采用流式细胞仪,血小板功能评价采用凝血酶诱导的血小板凝集实验。结果:与相应的对照组比较,骨髓间充质干细胞实验组单个核细胞数增加不明显(P>0.05),而CD41+细胞和血小板数量有明显的增加(P<0.05)。显微镜下和流式细胞仪上均可观察到凝血酶诱导的血小板凝集现象。结论:骨髓间充质干细胞在实验培养体系中可以促进脐血中CD34+细胞诱导分化为巨核细胞。
- 陈舒戴兵朱发明何吉项盈严力行
- 关键词：骨髓间充质干细胞CD34+细胞巨核细胞脐带血
- 应用基因芯片技术检测人脐带血CD34^＋细胞体外扩增的巨核细胞基因表达
- 2011年
- 目的 研究人脐带血CD34^＋细胞体外扩增巨核细胞的基因表达，从分子水平探讨巨核细胞的表达机制。方法 采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统获取人脐带血CD34细胞。100ng／mlTPO诱导培养12d后，应用抗CD41^＋单克隆抗体免疫磁珠法分选巨核细胞。应用基因芯片技术检测巨核细胞、非巨核细胞和meg-01细胞株的基因差异表达。选择THBSl、HOXA9、B-actin、IL-8、ANXA6、FGF-8对检测结果进行RT—PCR验证。结果 巨核细胞样本与非巨核细胞样本比较，呈显著差异表达的基因有116个，其中52个上调，64个下调；巨核细胞样本与meg-01细胞株样本比较呈显著差异表达的基因有158个，其中71个上调，87个下调。THBSl在巨核细胞表达高于非巨核细胞，HOXA9在巨核细胞表达低于非巨核细胞；13一actin在巨核细胞与非巨核细胞的表达无差别。IL-8在巨核细胞表达高于meg-01细胞株；ANXA6在巨核细胞表达低于meg-01细胞株；FGF一8在巨核细胞与meg-01细胞株的表达无差别。结论 巨核细胞、非巨核细胞和meg—01细胞株基因表达存在显著差异，差异表达中的调控基因包括应激反应基因、免疫相关基因、DNA合成和修复基因、新陈代谢基凶、肿瘤基因和肿瘤抑制基因等。
- 何吉王芳朱发明秦斐陈舒刘晋辉吕杭军严力行
- 关键词：巨核细胞基因表达寡核苷酸序列分析体外研究
- 分别应用基因芯片和solexa技术研究脐血干细胞体外诱导的巨核细胞基因表达谱被引量：1
- 2012年
- 目的分别应用基因芯片和solexa技术研究人脐带血CD34+细胞来源的巨核细胞的基因表达谱。方法采用密度梯度离心法和免疫磁珠法分选人脐带血CD34+细胞。100 ng/ml TPO诱导培养12天后,应用免疫磁珠法分选巨核细胞(MKs)和非巨核细胞(非MKs)。分别应用基因芯片和solexa技术检测MKs和非MKs的差异表达基因。结果基因芯片技术在38000多个基因表达谱的筛选中,检测出呈现显著差异表达的基因有1834个,其中711个上调基因,1123个下调基因。应用solexa技术获取的MK和非MK细胞Tag初始数量分别为3773147和3533805个,整个清晰的Tag数量分别为3291132和2967947,明显独特的tag数量分别为197769和245318个。其中上调基因表达数量为1161个,下调为902个;上调Tag表达数量为2717个,下调为1519个。结论 MKs和非MKs mRNA表达存在显著差异,差异基因编码产物与细胞内信号转导、新陈代谢、细胞发育、运动、细胞凋亡、细胞黏连和免疫应答等功能相关,进一步深入研究将有助于探讨巨核细胞的表达机制、信号传导及调控机制。基因芯片和solexa技术的检测结果存在重叠,同时又相互补充,两种方法联合应用能得到更完整的巨核细胞的基因表达谱。
- 王芳何吉朱发明刘晋辉秦斐陈舒徐罡吕杭军严力行
- 关键词：巨核细胞基因表达谱体外扩增基因芯片技术
- S-谷胱甘肽诱导巨核细胞株meg-01凋亡被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨一氧化氮供体S-亚硝基谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)对巨核细胞株meg-01诱导凋亡的可能作用。方法:将meg-01细胞株分为三组,对照组不加S-谷胱甘肽培养2 h,实验组分别加50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L的S-谷胱甘肽培养2 h,细胞因子组在含TPO(50 ng/ml)、IL-3(10 ng/ml)、SCF(50 ng/ml)的无血清培养基中培养72 h,再加入150μmol/LS-谷胱甘肽培养2 h。采用流式细胞仪检测凋亡细胞,电子显微镜观察细胞的形态学情况,实时荧光定量PCR检测Bcl2和Bax表达。结果:与对照组相比,实验组凋亡细胞数量明显增加,其中150μmol/L S-谷胱甘肽诱导凋亡细胞数量最多;电子显微镜下可见巨核细胞胞浆有明显空泡,细胞核固缩、破裂;实时荧光PCR检测到Bax的表达不同程度增加,Bcl2表达不同程度降低,其中150μmol/L GSNO诱导后,Bax的表达显著增加,Bcl2表达显著降低。细胞因子组Bax的表达降低,Bcl2表达增加。结论:S-谷胱甘肽可以促进巨核细胞株凋亡,而TPO、IL-3、SCF联合可抑制凋亡。
- 王芳何吉秦斐陈舒刘晋辉朱发明严力行
- 关键词：一氧化氮凋亡
- IL-6和IL-11对脐血CD34^+细胞诱导分化为巨核细胞的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:探讨白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-11(IL-11)对脐血CD34+细胞诱导分化为巨核细胞及其产生血小板的影响。方法:采用免疫磁珠法(MACS)分选8例健康产妇足月顺产的胎儿脐血中CD34+细胞,以含血小板生成素(TPO 50μg/L)、白细胞介素-3(IL-3 10μg/L)、干细胞因子(SCF 50μg/L)的无血清培养基作为对照组,分别添加10μg/L IL-6、IL-11、IL-6+IL-11作为实验组,培养14 d后观察结果。利用细胞计数仪检测单个核细胞数;流式细胞仪计数培养体系中的CD41+细胞和血小板;用倒置显微镜观察培养体系中的细胞生长情况;用显微镜和流式细胞仪观察凝血酶诱导后的血小板凝集情况。结果:各实验组单个核细胞数与对照组无明显区别(P>0.05),而CD41+细胞和血小板数量明显多于对照组(P<0.05)。培养第14 d后倒置显微镜下可见实验组中血小板样颗粒物明显多于对照组,而且经凝血酶诱导后有明显血小板凝集。结论:IL-6和IL-11可诱导脐血中CD34+细胞分化为巨核细胞并产生功能性血小板。
- 戴兵陈舒何吉刘晋辉秦斐项盈朱发明严力行
- 关键词：白细胞介素11巨核细胞脐血
