山西省回国留学人员科研经费资助项目(200528)
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
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- 相关机构：山西医科大学更多>>
- 发文基金：山西省青年科技研究基金山西省回国留学人员科研经费资助项目山西高校科技研究开发项目更多>>
- 相关领域：医药卫生政治法律生物学更多>>
- mRNA差异显示方法的建立及条件优化被引量：3
- 2008年
- 目的研究大鼠皮肤肌肉特异性基因的表达,探讨引物的不同、退火温度变化与扩增产物特异性之间的关系。方法12只健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组与实验组(挫伤4h)。分别提取总RNA,反转录成cDNA,通过不同引物、退火温度及反应体系进行PCR产物扩增,比较不同条件下差异条带的情况。结果总RNA量在2-4μg时,扩增条带最亮;提高反转录温度有利于长片段cDNA的合成;使用TaKaRa公司带有T7启动子的OligodT12NM和M13的随机引物时,可最大限度地减少非特异性条带;先使用低严谨的退火温度,再使用高严谨的退火温度可显著地增强差异条带重复性和敏感性。结论差异显示技术方法简便、灵敏、高效,适用于一般性的基因差异表达研究。
- 王小伟孙俊红籍晓元杜秋香王英元
- 关键词：差异显示技术随机引物退火温度
- 大鼠皮肤和肌肉挫伤mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测
- 2008年
- 目的研究大鼠皮肤和肌肉挫伤总RNA提取对差异显示技术的影响。方法使用Invitrogen TRIzol Reagent提取总RNA,由于皮肤与肌肉所含的蛋白比较多,所以改进了传统的提取步骤,可以减少杂质的残留。结果改进的Invitrogen TRIzol Reagent提取的RNA呈现28SrRNA,18S rRNA和5S rRNA3条较清晰的条带,其A260/A280值可达1.913,具有很高的纯度。结论大鼠皮肤和肌肉mRNA差异显示技术中,皮肤与肌肉总RNA的质量是十分关键的因素,通过对传统方法进行改进,建立起较完善的大鼠皮肤和肌肉mRNA差异显示技术体系,为开展损伤时间的分子鉴定与功能基因的分离、克隆奠定基础。
- 王小伟孙俊红杜秋香籍晓元王英元
- 关键词：挫伤MRNA
- 大鼠皮肤和肌肉挫伤后细胞间黏附分子-1 mRNA表达变化被引量：5
- 2008年
- 目的应用实时荧光定量PCR技术检测大鼠皮肤和肌肉挫伤后组织中细胞间黏附分子-1(intercel-lular adhesion molecular-1,ICAM-1)mRNA的表达,分析其与损伤时间的关系。方法制备大鼠挫伤模型,于伤后0.5、1、6、12、18、24和30h取材,一步法提取总RNA,检测其完整性和质量浓度,逆转录合成第一链cDNA,以rpl32为内参基因进行荧光定量检测,采用△△Ct法比较其与正常皮肤、肌肉组织中ICAM-1mRNA表达的倍数关系。结果皮肤挫伤后ICAM-1mRNA的表达0.5h达到峰值,24h下降至正常对照组的7倍,随后再次升高;在肌肉组织中于损伤后0.5h表达显著增强,6h达到峰值,18h降至最低后再次升高。结论大鼠皮肤、肌肉挫伤后ICAM-1mRNA表达随损伤时间呈规律性变化,可望用于早期损伤时间推断。
- 孙俊红杜秋香王小伟王英元
- 关键词：挫伤细胞间黏附分子损伤时间推断
- 正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用被引量：6
- 2008年
- 目的探索正交设计在实时定量PCR检测条件优化中的应用,找出扩增ICAM-1基因的最佳条件。方法建立大鼠皮肤损伤模型,采用正交设计实时定量PCR的各影响条件,提取损伤处皮肤组织总RNA反转录成cDNA,cDNA作为模板,通过特异性引物扩增ICAM-1基因。对扩增曲线和融解曲线制定评分标准,量化不同实验条件下的扩增结果并进行统计分析。结果退火温度、模板量和引物浓度直接影响扩增效果,但三因素间无相互作用。结果经统计学分析表明退火温度61℃、模板cDNA用量0.4μg和引物终浓度150μmol/L为实时定量PCR检测ICAM-1基因的最佳条件组合。结论正交设计是一种切实可行、快速经济的实时定量PCR检测条件优化方法。
- 杜秋香孙俊红王小伟王英元
- 关键词：法医病理学正交设计实时定量PCR皮肤损伤ICAM-1
- 大鼠皮肤挫伤后NF-κB mRNA表达与损伤时间关系被引量：4
- 2008年
- 目的应用实时定量PCR技术检测大鼠皮肤挫伤后NF-κB mRNA时序性表达规律,分析其与损伤时间的关系。方法制备大鼠皮肤挫伤模型,于伤后0.5,1,6,12,18,24,30h取材,一步法提取总RNA,检测其完整性和浓度,按照0.4μg总RNA量逆转录合成第一链cDNA,以rlp32为内参基因进行荧光定量检测,采用△C t法比较其与正常皮肤组织NF-κB mRNA表达的倍数关系。结果皮肤挫伤组织中NF-κB mRNA伤后0.5h表达显著增强(P<0.05),6h出现高峰,12h降至正常水平,随后略有回升。结论大鼠皮肤挫伤组织NF-κB mRNA的表达,随着损伤经过时间的延长呈规律性变化。
- 孙俊红杜秋香王小伟王英元
- 关键词：法医病理学NF-ΚB实时定量PCR皮肤挫伤
