国家自然科学基金(30630049)
- 作品数：28 被引量：161H指数：5
- 相关作者：唐青扈荣良张守峰李浩杜加亮更多>>
- 相关机构：军事医学科学院中国疾病预防控制中心浙江省丽水市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 一株鼬獾狂犬病病毒的全基因组及主要结构蛋白序列分析
- 对2008年10月分离自江西景德镇地区的鼬獾狂犬病分离株JX08-45进行了全基因组和编码蛋白序列的测定和分析。结果显示,JX08-45分离株基因组全长11922nt,其3'端和5'端分别存在58nt的Leader和70...
- 张守峰刘晔赵敬慧张菲王颖张锦霞扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒全基因组
- 文献传递
- 狂犬病病毒N基因的杆状病毒表达及鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用分子克隆的方法,将CVS-11株狂犬病毒N基因片段克隆入杆状病毒穿梭载体Bacmid中,构建出含CVS-11 NP基因重组杆状病毒表达质粒Bacmid-N;脂质体介导Bacmid-N转染Sf9昆虫细胞获得表达CVS-11 NP的重组杆状病毒(AcMNPV-N)。用ELISA、FA、SDS-PAGE和Western-blot法对表达产物进行鉴定和分析,证实CVS-11 NP为胞内表达,且具有天然核蛋白良好的免疫反应性,为进一步研制高效、敏感的狂犬病病毒检测试剂和建立实验室检测方法奠定基础。
- 曹蕾唐青陶晓燕黄莹杜加亮张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病毒N基因杆状病毒
- 几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测
- 为了进一步了解和明确狂犬病病毒街毒的理化学特性,我们以本实验室06年分离到的一株狂犬病街毒BD06株为测试对象,将其适应细胞后的第18代细胞毒暴露于不同的理化条件下,通过接种BHK-21细胞测定其TCID的方法得出其感染...
- 潘铁骊张守峰扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒感染力
- 文献传递
- 1例潜伏期长达39年的狂犬病病例个案调查被引量：4
- 2009年
- 雷永良王晓光张守峰扈荣良李斐铭唐青
- 关键词：狂犬病潜伏期个案调查
- 抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定
- 2009年
- 目的制备抗狂犬病毒单克隆抗体，为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础。方法将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB／c小鼠，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经细胞克隆和间接ELISA筛选，获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价，用G蛋白亲和层析柱进行纯化，间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性。结果细胞融合率达100％，经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株，其腹水效价分别为1×10^4，1×10^5，1×10^4和1×10^5；4株单抗均为IgG类型且特异性好。结论制备的单抗具有良好特异性和敏感性。
- 曹蕾李雄张守峰李六斤扈荣良唐青
- 关键词：狂犬病病毒抗体单克隆
- 细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统辅助质粒的构建
- 2008年
- 目的构建细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统中所需的4个结构蛋白辅助质粒。方法利用RT-PCR方法扩增细胞适应株狂犬病毒的核蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、糖蛋白（G）、转录大蛋白（L）基因，测序结果正确后，分别连接表达载体，构建反向遗传所需的4个功能性蛋白辅助质粒。结果成功扩增4个结构基因，经测序完全正确，并成功构建反向遗传体系中N蛋白、P蛋白、G蛋白、L蛋白的辅助表达质粒，酶切鉴定完全正确。结论成功构建狂犬病病毒拯救系统的4个辅助质粒，为此细胞适应株狂犬病病毒的拯救奠定基础。
- 黄莹扈荣良唐青
- 关键词：狂犬病病毒质粒
- 动物狂犬病中和性抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制被引量：3
- 2010年
- 目的研制一种能够定量检测狂犬病血清中和抗体的直接竞争ELISA试剂盒,以满足我国动物狂犬病免疫监测的需要。方法以表达狂犬病病毒糖蛋白的真核细胞培养物为包被抗原,捕获抗体为具有病毒中和活性的酶标单克隆抗体,标准血清为经荧光抗体病毒中和试验(FAVN)准确定量的犬血清。结果本试剂盒的最低检测限为0.25U/ml,线性检测范围为0.25～8U/ml,标准曲线的平均板内变异系数为2.8%,板间平均变异系数为4.9%,在4℃下至少可以存放6个月。结论本研究提供了一种操作安全、定量准确的动物狂犬病中和抗体检测试剂盒,具有良好的实际应用前景。
- 冯誉龄刘晔张守峰张菲王颖王述超扈荣良
- 关键词：狂犬病病毒中和抗体酶联免疫吸附测定
- 狂犬/丙型肝炎嵌合病毒的构建和拯救
- 2011年
- 目的 以狂犬病病毒为载体,构建表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙型肝炎嵌合病毒,为发展新型丙肝载体疫苗奠定基础.方法 在狂犬病病毒反向遗传系统CTN-GFP的基础上,通过传统分子克隆方法,将HCV E1E2基因分别克隆人复制型和复制缺陷型狂犬病病毒载体,构建狂犬/丙肝嵌合病毒CTN-HCV E1E2和CTNΔG-HCV E1E2.结果 免疫荧光（DFA）和反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）结果 显示嵌合病毒拯救成功,嵌合病毒能够再次感染正常细胞并且能够在mRNA水平检测到HCV E1E2基因的表达.结论 本研究成功构建了表达丙型肝炎病毒包膜糖蛋白E1E2的狂犬/丙肝嵌合病毒,提示以狂犬病病毒为载体发展新型丙肝载体疫苗在理论和技术上都是可行的.
- 杜加亮黄莹唐青王力华梁国栋
- 关键词：狂犬病病毒肝炎病毒属
- 狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth疫苗株反向遗传系统的建立被引量：4
- 2009年
- 【目的】建立狂犬病毒的反向遗传系统,为研制不含狂犬病病毒致病性的新型安全高效的狂犬疫苗提供技术依据。【方法】本研究采用反向遗传学方法和分子克隆技术,建立了狂犬病病毒Evelyn-Rokitnicki-Abelseth(ERA)疫苗株的CMV/T7、T7启动子病毒拯救系统,构建了表达N、P、L蛋白的辅助质粒。【结果】成功拯救出野生型病毒rERA-VC,在Vero细胞上的生长动力学特性与父母本ERA相同,第三代可在Vero细胞上可获得很高的生长滴度。【结论】建立了狂犬病病毒的反向遗传系统,拯救出的野生型病毒生物学特性与父母本相同。
- 郭利冯娜杨松涛王喜军葛金英夏咸柱步志高
- 关键词：狂犬病毒反向遗传系统
- 我国部分城市犬狂犬病的免疫覆盖率调查
- 目的通过对部分城市进行犬狂犬病免疫覆盖率调查,分析我国犬的狂犬病免疫现状及影响因素。方法本实验室在2005年～2009年收集了我国6个城市的犬血清共14,921头份,通过FAVN检测狂犬病中和抗体水平,以最低免疫保护水平...
- 刘晔张菲张守峰赵敬慧王颖张锦霞扈荣良
- 关键词：狂犬病中和抗体免疫
- 文献传递
