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番鸭呼肠孤病毒MW9710株δC蛋白基因在毕赤酵母中表达被引量：1: 2010年; 将番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC蛋白基因与毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9Kσ-C,转化大肠杆菌DH5α,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确。纯化的重组质粒pPIC9Kσ-C用内切酶SacⅠ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合,采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了高效表达,并且具有免疫反应性。; 欧阳岁东林锋强王劭陈仕龙程晓霞朱小丽胡奇林陈少莺; 关键词：番鸭呼肠孤病毒毕赤酵母

猪圆环病毒2型Taqman荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：8: 2011年; 参照GenBank收录的PCV2ORF2基因设计合成引物和Taqman探针,建立PCV2TaqMan荧光定量PCR检测方法,对临床确诊PCV2的病料和30份临床疑似感染PCV2的病料进行检测,同时与常规PCR检测方法进行比较。结果显示,TaqMan荧光定量PCR检测方法灵敏度可达4.5×103拷贝.μL-1,比普通PCR检测方法高10倍;对30份疑似感染PCV2病料的检测表明,TaqMan荧光定量PCR和普通PCR检测阳性率分别为66.7%和56.7%,两者符合率90%。应用TaqMan荧光定量PCR检测方法检测PRV、CSFV、PRRSV结果均为阴性,无交叉反应;表明该方法具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优点,可用于PCV2的流行病学调查和临床诊断。; 郑敏黄梅清吴南洋陈少莺; 关键词：荧光定量PCR

番鸭呼肠孤病毒分子流行病学研究被引量：2: 2012年; 选取1998～2009年福建省不同地区番鸭中分离到番鸭呼肠孤病毒分离株中具有代表性的10株,用RT-PCR技术扩增其S1和S4基因的功能区片段,进行序列测定。序列分析表明所扩增的S1基因的目的片段为819bp,S4基因目的片段为992bp。参照国内外已发表的部分毒株S1和S4基因序列,构建番鸭呼肠孤病毒的遗传进化树,分析遗传进化关系。国内各分离株S1基因同源性为92.2%～96.7%,与国外89026株同源性为88.5%～92.8%,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为76%～78%。国内各分离株S4基因同源性为95.2%～99.3%,与国外89026株同源性为92.3%～94.5%,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为21.2%～21.5%。通过遗传进化树可以看到MDRV与同属的ARV序列形成了2个大分支,而MDRV序列分为2个小分支:一支为10株分离株和国内分离株,说明国内分离株没有明显差异;一支为国外分离株89026株,这说明国内分离株与国外毒株存在地域差异。; 林锋强朱小丽陈少莺王劭陈仕龙程晓霞江斌李兆龙; 关键词：番鸭呼肠孤病毒 S基因分子流行病学

番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律的研究被引量：2: 2014年; 为明确番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗在番鸭体内中和抗体消长规律,采用固定病毒稀释血清法,测定了经弱毒疫苗免疫后的雏番鸭不同时间其血清中和抗体效价。结果显示:疫苗注射1日龄雏番鸭,免疫后28d部分鸭血清中出现抗体,35d全部鸭血清中出现抗体;6个月抗体效价达高峰,有效免疫期在18个月以上。表明番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗诱导的中和抗体产生期较晚,但持续期长。; 程晓霞陈少莺林锋强陈仕龙朱小丽王劭; 关键词：中和抗体持续期

番鸭呼肠孤病毒σC蛋白模拟抗原表位的研究被引量：1: 2010年; 以番鸭呼肠孤病毒MW9710分离株原核表达蛋白pGEX-4T-1-σC为靶分子,利用噬菌体随机七肽库进行亲和筛选,经过4轮亲和筛选后,对整个被选噬菌体集合单链DNA进行测序。结果:噬菌体展示序列为CATCCTATTCATCCGCGTCAT,相应的短肽序列为HPFYSCY,该短肽序列与MDRVσC氨基酸序列N端一处-P-YS--的氨基酸片段相似,推论MDRVσC的模拟抗原表位可能是由该不连续氨基酸片段所构成的构象表位。通过Genbank的蛋白质检索,发现该构象表位也存在于前B细胞克隆增强因子的多肽序列中。结果表明,噬菌体展示随机肽库技术是一种用于研究抗原表位结构的有效方法。; 王劭陈少莺林锋强程晓霞朱小丽陈仕龙欧阳岁东; 关键词：番鸭呼肠孤病毒噬菌体展示肽库模拟抗原表位

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株和美洲株的理化特性及致病性比较被引量：1: 2012年; 对分离自福建的3株美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)与2株欧洲型PRRSV进行了细胞致病性、动物致病性及理化特性的比较试验,结果显示PRRSV分离株均能在Marc-145细胞上增殖并产生细胞病变,但在PK-15、Vero、CEF、MDEF中盲传3代均不能产生细胞病变。理化性质试验表明美洲株与欧洲株PRRSV对酸、pH=3、氯仿、胰酶的敏感性一致;当pH=9时,PRRSV欧洲株比美洲株具有更强的抵抗力;不同的PRRSV毒株对温度的敏感性差异较大,同一型的病毒对温度的敏感性也不同。动物致病性试验结果表明欧洲型PRRSV-FJ0602株为弱毒株,对保育猪不具有致病性,而美洲型PRRSV-FJ0604株致病力强。; 黄梅清郑敏陈仕龙车勇良江斌王隆柏魏宏周伦江庄向生陈少莺; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒理化特性

番鸭呼肠孤病毒在番鸭体内的动态分布和排毒规律被引量：4: 2011年; 应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠孤病毒在人工感染番鸭体内的动态分布和排毒规律。结果显示在感染后1 d可在肝、脾脏、法氏囊、胸腺和盲肠扁桃体中检出病毒RNA,表明病毒首先入侵免疫器官;随后其他器官中逐渐检测到病毒。高峰期为攻毒后7～14 d,所有器官中均能检测到病毒,此时也是病毒感染发病最严重的时间。感染后14 d,在肺和脑中不能检测到病毒;感染后25 d在肾和胰腺中不能检测到病毒;感染后28 d心和盲肠扁桃体中不能检测到病毒;感染后32 d所有器官中均不能检测到病毒。攻毒5 d后,即可在喉头和泄殖腔棉拭子中检测到DRV RNA,而在14 d后未能检出DRV RNA,表明番鸭接种强毒株后5 d开始向外界排毒,而14 d后停止向外界排毒。; 林锋强朱小丽陈少莺程晓霞陈仕龙王劭江斌李兆龙; 关键词：番鸭呼肠孤病毒排毒

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福建省科技计划重点项目(2006NZ003-2)