广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(0639036)
- 作品数：9 被引量：103H指数：5
- 相关作者：陈汉忠李莉萍徐增辉梁万文陈明更多>>
- 相关机构：广西水产研究所广西大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划广西研究生教育创新计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 罗非鱼海豚链球菌病疫苗及其免疫效果研究被引量：3
- 2008年
- 鉴于海豚链球菌已成为我国罗非鱼养殖发病死亡最主要的病原菌，本研究利用临床分离菌株对低剂量（1．5×10^5CFU·mL^-1）攻毒耐过罗非鱼进行再次攻毒试验，筛选到1株具有很好交叉免疫保护的疫苗候选菌株CMS005，甲醛灭活制备成疫苗分别通过注射、浸泡及口服免疫罗非鱼。室内水族箱免疫试验中，注射、浸泡和口服三种免疫途径各自的最佳免疫保护率分别为90．5％、61、9％和14、3％；池塘小网箱免疫试验结果为100％、86、1％和66、7％。数据分析显示，相同剂量注射组免疫保护率明显高于浸泡免疫组与口服免疫组；免疫剂量对浸泡免疫和口服免疫效果的影响大于注射免疫；同时加强免疫可显著提高浸泡免疫与口服免疫效果；超声波处理也可提高浸泡免疫效果。生产小试结果表明，未免疫组罗非鱼月累计死亡率在6％～15％之间，而免疫组罗非鱼月累计死亡率不到0.5％；注射免疫和口服免疫效果相当，免疫7d和15d后均可完全控制罗非鱼海豚链球菌病的继续发生；疫苗发生的免疫保护力可持续2～3个月。上述结果表明，所研制的预防罗非鱼海豚链球菌病疫苗具有很好免疫效果及生产应用前景。
- 甘西陈明李莉萍余晓丽徐增辉李超雷爱莹陈汉忠梁万文
- 关键词：罗非鱼海豚链球菌疫苗
- 罗非鱼海豚链球菌16s rRNA基因的序列测定和系统进化分析被引量：5
- 2006年
- 为了从分子水平上对～株来源于发病罗非鱼的链球菌进行分类学鉴定，本研究利用原核生物16srRNA基因通用引物对该菌株进行了16srRNA基因的克隆及序列分析。结果扩增出长约1．5kbp目的片段，测序得到一条长度为1447bp核苷酸序列。核苷酸同源性分析表明，该序列与NCBI公布的海豚链球菌（Streptococcus iniae，s．iniae）SCCF5L菌株16srRNA基因核苷酸序列同源性最高（99．496），暂称为中国广西株（S．iniae-CGX）。同时，亲源关系较近的S．iniae、S．difficile和S，agalaciate代表菌株构建的系统发育进化树显示，该菌株与S．iniae代表菌株组成同一进化分支，与s．agalaciate代表菌株组成的另一进化分支距离较近（95．596），而与S．difficile代表菌株组成的进化分支距离较远（92．3％）。本研究证实，从发病罗非鱼脑组织分离得到的致病性链球菌为海豚链球菌。
- 甘西陈明余晓丽李莉萍陈汉忠徐增辉雷爱莹梁万文黄维义
- 关键词：罗非鱼海豚链球菌RRNA系统发育进化树
- 罗非鱼海豚链球菌PCR检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 为建立准确快速的海豚链球菌鉴定方法，设计合成了海豚链球菌种特异性引物CM1／CM2，进行了其特异基因片段的PCR扩增、反应条件的优化及方法的特异性和敏感性试验；同时还进行了不同检测材料的比较及9份临床样品检测。结果表明，引物CM1／CM2只能从海豚链球菌中扩增到特异性基因片段，供试的其它9种水产常见病原菌PCR扩增均呈阴性；能够检测的最低细菌数在20～30个细菌；方法可直接从病鱼的脑、肝脏、肾脏及脾脏组织检测到该菌；另外，临床菌株检测结果与基于菌株16S rRNA基因序列系统进化分析结果一致。该方法弥补了传统细菌鉴定很难将该菌鉴定到种的缺点，并显著缩短了检测时间及降低了检测成本，具有较好的应用前景。
- 甘西陈明余晓丽李莉萍陈汉忠徐增辉雷爱莹梁万文黄维义
- 关键词：海豚链球菌PCR罗非鱼
- 罗非鱼海豚链球菌16S rRNA基因的序列测定和系统进化分析被引量：40
- 2007年
- 为了从分子水平上对1株致病性罗非鱼链球菌进行分类学鉴定,利用原核生物16SrRNA基因通用引物对分离纯化的罗非鱼致病性链球菌进行16S rRNA基因的克隆及序列分析。结果扩增出长约1.5 kp目的片段,测序得到1条长度为1 447 bp核苷酸序列。核苷酸相似性分析表明,序列与NCB I公布的海豚链球菌(Streptococcus iniae,S.iniae)SCCF5L菌株16SrRNA基因核苷酸序列相似性最高(99.4%),暂称为中国广西株(S.iniae-CGX)。同时,亲源关系较近的S.iniae、S.difficilis和S.agalactiae代表菌株构建的系统发育进化树显示,所得菌株与S.iniae代表菌株组成同一进化分支,与S.agalactiae代表菌株组成的另一进化分支距离较近(95.5%),而与S.difficilis代表菌株组成的进化分支距离较远(92.3%)。上述研究证实,本试验从发病罗非鱼脑组织分离到的致病性链球菌为海豚链球菌。
- 甘西陈明余晓丽李莉萍陈汉忠徐增辉雷爱莹梁万文黄维义
- 关键词：罗非鱼海豚链球菌RRNA系统发育进化树
- 奥尼罗非鱼血清免疫球蛋白的纯化及分子量的初步分析被引量：6
- 2008年
- 通过饱和硫酸铵盐析结合Sephadex G-200柱层析的方法,纯化制备了健康非免疫状态下奥尼罗非鱼的免疫球蛋白,进行变性还原条件下的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹试验对血清的免疫球蛋白进行初步分析,发现SDS-PAGE电泳条件下血清重链分子量为85 kD,轻链分子量为30 kD。如果罗非鱼血清免疫球蛋白在自然状态与其他硬骨鱼类一样也为四聚体,那么其总分子量的理论值应为920 kD。
- 徐增辉陈汉忠李晓栩李超甘西梁万文陈明李莉萍
- 关键词：奥尼罗非鱼免疫球蛋白
- 广西罗非鱼链球菌病病原的生化鉴定及药敏试验被引量：39
- 2008年
- 从来自南宁、北海等地的十几个暴发疾病的罗非鱼养殖场发病罗非鱼中,分离得到了8株链球菌。通过生化鉴定及药敏试验,结果表明,分离到的8株致病性链球菌,有6株为海豚链球菌(streptococcus iniae),2株为无乳链球菌(streptococcusagalactiae)。
- 李波陈明李莉萍陈汉忠徐增辉李超黄维义梁万文
- 关键词：罗非鱼链球菌生化鉴定
- 斑点叉尾鱼回肠败血症病原菌的分离与鉴定被引量：1
- 2007年
- 近两年来，一种严重的传染性疾病在广西斑点叉尾鮰养殖业中流行，造成鱼苗100％死亡；咸鱼的损失也高达30％～80％不等。为了确定该病病原，本试验对患病斑点叉尾鮰脑、肝脏、脾脏和肾脏组织进行了细菌的分离、鉴定及致病性试验。结果从南宁和合浦两地分离到NN和HP两株G短杆菌，人工感染试验表明，腹腔注射感染可引起健康斑点叉尾鮰100％死亡，浸泡感染可引起30％-55％死亡，并且感染发病的斑点叉尾鮰症状与自然发病症状相似。两株细菌的形态特征、培养特性和生理生化反应指标均与国外报道的鮰爱德华氏菌参考菌株（JCM1680）相同；两株细菌的16SrRNA基因序列与JCM1680菌株16s rRNA基因序列同源性均为99．3％。以上研究证实，NN和HP两株细菌为致病性鮰爱德华氏菌，其引起的传染性疾病为斑点叉尾鮰肠败血症。本研究首次对国内斑点叉尾鮰肠败血症进行病原菌的分离和鉴定，证实了斑点叉尾鮰肠败血症在广西斑点叉尾鮰养殖业中的流行及造成严重经济损失，对国内该病的控制及斑点叉尾鮰健康养殖具有重要的指导意义。
- 梁万文陈明余晓丽李莉萍雷爱莹陈汉忠徐增辉甘西黄维义
- 关键词：斑点叉尾鮰
- 斑点叉尾肠败血症(ESC)PCR诊断方法的建立
- 2007年
- 由鮰爱德华氏细菌引起的肠败血症（ESC，又称爱德华氏病）是影响斑点叉尾鮰养殖最大的疾病。为快速和准确的诊断该疾病，本研究以NCBI公布的妇爱德华氏细菌eip基因（GeneBank登录号为AF037441）为模板序列，设计种特异性诊断引物，成功建立了用于斑点又尾鮰肠败血症病原菌的PCR检测方法。研究结果表明。该方法能够直接从发病斑点叉尾鮰脑、肝、脾和肾组织中检测到妇爱德华氏菌，检测的最低量为21个细菌；同时，该诊断方法与Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、拄状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河孤菌、豚鼠气单胞菌及海豚链球菌等常见水产病原菌无交又反应。临床样品检测证明。本研究所建立的PCR检测方法可以用于斑点叉尾鮰肠败血症的快速诊断。
- 梁万文陈明余晓丽李莉萍陈汉忠徐增辉雷爱莹甘西黄维义
- 关键词：斑点叉尾鮰PCR
- 海豚链球菌疫苗对罗非鱼免疫功能的影响被引量：23
- 2008年
- 以海豚链球菌Streptococcus iniae灭活菌苗为免疫原,通过注射、浸泡、口服3种途径对体重为(100±10)g的奥尼罗非鱼Oreochromis niloticus进行免疫,在免疫前和免疫后的第3、7、10、14、21天对试验鱼进行尾静脉采血,测定其血液中白细胞的数量、各类白细胞的数量及其吞噬活性,以及血清的抗菌活力、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶(SOD)活力及抗体水平。在免疫后第22天对所有试验鱼按照1.0×107cfu/尾进行攻毒。结果表明:各免疫组白细胞总数、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞数量均显著高于对照组(P<0.05);血清的抗菌活力、溶菌酶活性和抗体水平与对照组差异显著(P<0.05),SOD活力和对照组无显著差异(P>0.05);免疫的罗非鱼对海豚链球菌的抵抗力明显增强,其中注射组罗非鱼的免疫能力明显高于浸泡和口服组,加强免疫组的免疫能力均有明显增强趋势。
- 徐增辉陈汉忠陈明李莉萍李超甘西梁万文李晓栩张居作
- 关键词：罗非鱼海豚链球菌疫苗免疫力
- 双抗体夹心ELISA检测大片形吸虫分泌排泄抗原方法的建立
- 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体,用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔,按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体,建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心EL ISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳...
- 李晓栩刘如明陈汉忠孟盟曹池王俊华
- 关键词：大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体双抗体夹心ELISA
- 文献传递
