广州市科技计划项目(2011J4300107)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：洪岸王晶陈小佳沈巍吴陆生更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 重组蛋白NtA-PACAP在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定被引量：4
- 2013年
- 目的:通过构建PACAP38与Agrin的N端结构域(NtA)相连的重组基因的原核表达载体,获得重组NtA-PACAP蛋白,并验证其生物学活性,为未来的规模化制备奠定基础。方法:将PACAP38与层粘连蛋白的受体蛋白Agrin的N端通过连接肽相连,合成重组蛋白的基因片段,并在此基因片段末端连上6个组氨酸标签密码子,然后将此重组基因片段克隆至大肠杆菌表达载体pET-3c中,转化E.coli BL21(DE3),获得重组工程菌并摸索发酵和纯化条件,IPTG诱导表达后收集菌体破碎离心,收集上清液,经阴离子交换层析和Ni-NTA树脂亲和层析两步纯化法获得目的蛋白;通过PC12细胞饥饿损伤后修复实验模型来检测NtA-PACAP38的生物学活性。结果:成功表达并获得纯度90%以上的NtA-PACAP38蛋白,生物学活性实验证明NtA-PACAP38具有促饥饿损伤后的PC12细胞增殖能力。结论:获得的重组蛋白NtA-PACAP38具有生物学活性,表达系统和纯化工艺可以用于下一步的规模化制备。
- 王晶吴陆生陈小佳董濠鋆沈巍张敏仪洪岸
- 关键词：PACAP重组蛋白蛋白纯化
