广州市医药卫生科技项目(2005-YB-135)
- 作品数：10 被引量：52H指数：5
- 相关作者：徐霞谢闺娥唐晓华杨能李红玉更多>>
- 相关机构：广州医学院中山大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：广州市医药卫生科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 耐甲氧西林葡萄球菌感染的调查与分析被引量：10
- 2007年
- 目的调查住院患者耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococci,MRS)的感染情况,以便采取有效的防治措施。方法收集临床分离菌株,用mecA基因PCR扩增法鉴定MRS,并结合临床资料对本院MRS感染进行回顾性调查研究。结果住院患者标本中共收集到68株葡萄球菌,其中MRS 38株(阳性率为55.9%)。MRS感染主要多发于年龄>60岁,男性,合并多种疾病患者,科室分布以呼吸内科、泌尿外科及ICU病房为主。药敏结果显示MRS对万古霉素、利奈唑烷及喹努普汀的敏感率为100%,对替考拉宁敏感率为94.7%,对利福平的敏感率为57.9%,其余抗菌药物敏感率均<30%。结论及时了解本院患者MRS感染分布及耐药情况,有助于我们采取相应的监测及防治措施。
- 唐晓华聂锦标徐霞
- 关键词：耐甲氧西林葡萄球菌MECA基因耐药性
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a转肽酶区的克隆表达及纯化鉴定被引量：7
- 2006年
- 目的:对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)转肽酶区的mecA基因片段进行克隆、表达、纯化及鉴定。方法:根据基因文库登录的mecA基因的编码序列,设计合成了一对寡核苷酸引物,应用PCR技术从MRSA基因组DNA中扩增获得编码PBP2a转肽酶区的DNA片段,将此目的基因片段克隆至pET-His载体,经酶切鉴定、测序正确后,转化E.coliBL21(DE3)plysS;用IPTG进行诱导表达后,利用Ni2+亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白;对表达的蛋白以MRSA胶乳凝集试剂盒进行鉴定。结果:成功构建了PBP2a转肽酶区原核表达载体,并获得了高效表达,制备了高纯度的目的蛋白。结论:获得了高纯度的PBP2a转肽酶区蛋白,为其进一步研究奠定了基础。
- 徐霞谢闺娥杜晶春
- 关键词：青霉素结合蛋白2A耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MECA基因
- PBP2a多克隆抗体制备及其乳胶凝集检测法的建立被引量：1
- 2007年
- 目的制备兔抗青霉素结合蛋白2a(penicillin binding protein 2a,PBP2a)抗体,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。方法以重组PBP2a转肽酶区蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测所制备的抗血清效价和特异性,用纯化的多抗建立乳胶凝集法。结果纯化的重组蛋白免疫家兔能有效地刺激特异性抗体的产生,抗血清的效价达1∶25 600,Western blot显示该抗体能有效识别原核表达及MRSA临床分离株中的PBP2a,建立了乳胶凝集法,敏感性及特异性良好。结论成功制备了抗PBP2a抗体血清,初步建立了检测PBP2a的乳胶凝集法,为有效制备高特异的单克隆抗体进而研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。
- 唐晓华谢闺娥黄亮徐霞
- 关键词：青霉素结合蛋白2A多克隆抗体胶乳凝集法
- 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测和耐药性分析被引量：5
- 2006年
- 目的了解临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)产肠毒素(SE)的情况及耐药现状。方法对从临床标本中分离出的260株SA,用反向间接血凝试验检测其肠毒素,按2005年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)的标准,用K-B法对260株SA进行药物敏感性试验,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测分别用检测头孢西丁及乳胶凝集检测PBP2a方法进行。结果260株SA中有172株携带肠毒素,占66.2%,主要为SEA型10.8%(28/260)、SEB型14.6%(38/260)、SEC型10.0%(26/260),同时携带二种或二种以上肠毒素的占23.8%(62/260);其中MRSA134株,全部携带肠毒素,且以SEA、SEB和SEC为主,分别为19.4%、16.4%和13.4%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)126株,携带肠毒素率为30.0%(38/126),以SEB为主,占9.5%。用头孢西丁及检测PBP2a的方法检测MRSA,检出率无显著意义(P>0.05);SA对临床常用的抗菌素除万古霉素及替考拉宁较敏感(100.0%敏感),其它的抗菌素存在多重耐药性,且MRSA的耐药性比MSSA的强。结论临床分离的SA株大部分都携带肠毒素,MRSA的带毒率及耐药性均高于MSSA;临床应重视SA肠毒素和MRSA的检测,合理使用抗菌素。
- 李红玉龙军徐霞
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素耐药性
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a 382～443片段的原核表达及鉴定被引量：1
- 2006年
- 目的对编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及青霉素结合蛋白2a（PBP2a）382～443位氨基酸的mecA基因片段进行克隆、表达及鉴定。方法根据基因文库登录的mecA基因的编码序列，针对编码PBP2a382～443位氨基酸的mecA基因片段，设计合成4条寡核苷酸片段，再将4条片段人工拼接成目的基因片段，然后克隆至PET-His载体，经酶切鉴定、测序正确后，转化E.coli BL21（DE3）plysS，用IPTG进行诱导表达，并对表达的蛋白以MRSA胶乳凝集试剂盒进行鉴定。结果构建了相应的PET-His克隆，经诱导表达和鉴定，证实成功表达出目的蛋白。结论成功表达出PBP2a382～443片段，为其进一步的纯化和应用奠定了基础。
- 徐霞谢闺娥杨能
- 关键词：甲氧西林抗药性载体蛋白质类
- 不同免疫方案制备鼠抗PBP2a多克隆抗体的比较被引量：5
- 2007年
- 目的制备针对青霉素结合蛋白(PBP2a)的抗血清,比较不同免疫方案的免疫效果。方法以基因工程重组PBP2a转肽酶区蛋白作为免疫原,采用多种注射途径(足垫、腹腔、足垫+腹腔、足垫+皮下)免疫BALB/C小鼠,ELISA和Western-blot法检测所制备的抗血清效价和特异性。结果足垫快速免疫组、腹腔免疫组、足垫和腹腔免疫组、足垫加皮下免疫组的效价依次为1∶12800、1∶25600、1∶51200、1∶102400,Western-blot显示所制备的抗血清能有效识别原核表达及耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株中的PBP2a。结论重组PBP2a蛋白免疫BALB/c小鼠能有效刺激特异性抗体的产生,足垫加皮下多点免疫法是一种值得推崇的免疫方案。
- 徐霞唐晓华黄宏梁柳何倚力
- 关键词：青霉素结合蛋白多克隆抗体免疫方案
- 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测及结果分析被引量：5
- 2006年
- 目的了解引起临床感染的金黄色葡萄球菌(SA)携带肠毒素(SE)的情况。方法对从临床标本中分离出的260株SA,用反向间接血凝试验检测其肠毒素,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测按2005年美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的检测头孢西丁方法进行。结果260株SA中有172株携带肠毒素,占66.2%,主要为SEA型10.8%(28/260)、SEB型14.6%(38/260)、SEC型10.0%(26/260),同时携带二种或二种以上肠毒素的占23.8%(62/260);其中MRSA134株,全部携带肠毒素,且以SEA、SEB、SEC为主,分别为19.4%、16.4%、13.4%;甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)126株,携带肠毒素率为30.0%(38/126),以SEB为主,占9.5%。结论临床上SA分离株大部分都携带肠毒素,且以SEA、SEB、SEC为主,MRSA的带毒率高于MSSA。
- 李红玉龙军徐霞
- 关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素
- 抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：3
- 2007年
- 目的： 制备和鉴定抗MRSA-PBP2a转肽酶区蛋白单克隆抗体（mAb）, 初步建立检测PBP2a的乳胶凝集方法.方法： 以基因工程重组PBP2a转肽酶区蛋白为抗原, 免疫BALB/c小鼠, 制备鼠源性mAb, 间接ELISA鉴定IgG亚类、腹水效价及亲和常数, Western blot检测mAb的特异性, 用所得mAb致敏聚苯乙烯乳胶, 建立检测PBP2a的乳胶凝集方法.结果： 筛选出2 株能稳定分泌抗PBP2a mAb的杂交瘤细胞株F1和F2, 免疫球蛋白亚类均为IgG1类; 腹水效价为0.5×10^6 ～1×10^6, 亲和力常数分别为1.57×10^8 M^-1和5.43×10^9 M^-1.Western blot显示F1、F2抗体均能有效识别重组PBP2a转肽酶区蛋白及MRSA临床分离株中的天然PBP2a, 用 mAb F2建立了乳胶凝集法, 敏感性达1 mg/L.结论： 获得2株特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗PBP2a mAb的杂交瘤细胞株, 为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础.
- 徐霞唐晓华谢闺娥
- 关键词：青霉素结合蛋白2A单克隆抗体乳胶凝集法
- MRSA-PBP2a单克隆抗体乳胶凝集检测法的建立被引量：4
- 2008年
- 【目的】应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法。【方法】以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗体浓度、乳胶浓度、偶联时间和偶联缓冲液)进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。【结果】140mg/L的抗体浓度与15g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好。【结论】初步建立了检测PBP2a的胶乳凝集法,为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。
- 徐霞陈思聪唐晓华
- 关键词：乳胶凝集法单克隆抗体检测法PBP2A聚苯乙烯
- mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌被引量：17
- 2005年
- 目的应用m ecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(m eth ic illin res istan tstaphy lococcus aureus,M RSA)。方法临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用m ecA基因PCR扩增法鉴定M RSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株m ecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株m ecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株m ecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91.43%。结论m ecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定M RSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。
- 谢闺娥徐霞杨能
- 关键词：MECA基因耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PCR
