国家自然科学基金(30771004)
- 作品数：12 被引量：40H指数：4
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- intermedin对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制被引量：13
- 2010年
- 目的 观察intermedin（IMD）对大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用并探讨其机制.方法 健康雄性Wistar大鼠24只随机分为对照组、IRI组、转空质粒组、转IMD质粒组.动物右肾切除后,用超声微泡技术将质粒转染入肾脏,1周后制作肾脏IRI模型.PAS染色观察肾脏病理损伤,比色法检测肾组织超氧化物岐化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）和天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）,以及脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量.免疫组织化学方法检测细胞问黏附分子1（ICAM-1）、P选择素及内皮素1（ET-1）表达.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡.结果 PAS染色结果显示,IRI组肾小管及间质病理损伤显著重于对照组（P〈0.01）;转IMD组肾组织病理损伤则显著轻于IRI组（P〈0.01）.IRI组肾组织SOD活性显著低于对照组（P〈0.05）,MPO活性、活性caspase-3、MDA含量及ICAM-1、P选择素和ET-1表达均显著高于对照组（均P〈0.01）;转IMD组SOD活性显著高于IRI组（P〈0.05）,MPO活性、活性caspase-3、MDA含量及ICAM-1、P选择素和ET-1表达均显著低于IRI组（均P〈0.01）.TUNEL染色显示,IRI组肾组织凋亡细胞数显著高于对照组（34.83%±8.75%比3.33%±0.47%,P〈0.01）;转IMD组肾组织凋亡细胞数（20.67%±7.71%）则较IRI组显著减轻（P〈0.01）.转空质粒组和IRI组以上指标差异均无统计学意义.结论 IMD能减轻肾脏IRI,其机制至少部分与抑制氧自由基生成、炎细胞浸润及炎性因子ICAM-1、P选择素生成、ET-1生成、细胞凋亡有关,从而减轻肾组织局部氧化应激反应产生的活性氧.
- 李宏李荣山乔晞朱国贞黄晓光邵珊白波
- 关键词：再灌注损伤氧化性应激转染INTERMEDIN
- 中介素真核表达质粒的构建及其在大鼠近端肾小管上皮细胞中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建带有绿色荧光蛋白的中介素(IMD)真核表达质粒pIRES2-EGFP/IMD,并转染大鼠近端肾小管上皮细胞系(NRK-52E)。方法合成带有IMD基因片段的pMD19-TSimple/IMD质粒,将pMD19-TSimple/IMD质粒和pIRES2-EGFP载体双酶切之后进行高效连接,将IMD亚克隆至pIRES2-EGFP上,对重组表达载体进行酶切、测序鉴定。采用FuGENEHD转染试剂转染NRK-52E细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白。提取细胞mRNA和蛋白,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测基因表达,Western检测IMD蛋白表达。结果经限制性酶切鉴定及测序分析证实pIRES2-EGFP/IMD载体序列正确;荧光显微镜下可见转染的NRK-52E细胞有绿色荧光蛋白的表达,经RT-PCR和Western测定分析,转染细胞IMD基因及蛋白的表达增加。结论pIRES2-EGFP/IMD载体构建成功,并在NRK-52E细胞内成功表达。
- 周芸李荣山乔晞崔晓燕寇敏于桂花刘兴花李晓帆白波邵珊
- 关键词：质粒转染中介素
- 肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究被引量：3
- 2011年
- 目的观察肾上腺髓质素（adrenomedullin，AM）对大鼠肾缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，IRI）中肾小管上皮细胞凋亡的影响，并探讨其机制。方法Wistar大鼠32只，随机分为4组：假手术组和IRI组各6只，转染空质粒组和转染AM质粒组各10只。大鼠右。肾切除后1周，用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏，1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率。转染成功后夹闭左肾动脉45min制作肾IRI模型，于再灌注24h后留取肾组织标本。TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡，RT—PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达，蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达。结果转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组（0．51±0．09和0．23±0．05，P〈0．05）。与假手术组相比，IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[（38．79±7．52）％和（2．89±0．52）％，P〈0．05]；肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase．8和caspase-9表达上调，分别为0．72±0．18和0．23±0．04、0．80±0．12和0．38±0．06、1．24±0．25和0．39±0．09、0．76±0．13和0．38±0．08、0．92±0．14和0．32±0．06、0．89±0．12和0．42±0．09（P〈0．05），Bax／Bcl-2升高（0．91±0．18和0．61±0．08，P〈0．05）。转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调，分别为（19．36±6．78）％、0．48±0．11、0．62±0．07、0．53±0．08、0．46±0．08、0．51±0．12，与IRI组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；Bcl-2表达进一步上调为1．23±0．25，Bax／Bcl-2降低为0．44±0．12，与IRI组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。转染空质粒组和IRI组比较，上述各指标差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡，其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的
- 赵海红乔晞李荣山赵莉邵珊刘新艳
- 关键词：肾上腺髓质素再灌注损伤细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 维生素E对大鼠肾脏缺血再灌注损伤诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响被引量：6
- 2010年
- 目的探讨维生素E对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响及可能的机制。方法健康雄性Wistar大鼠18只随机分为对照组、IRI组和维生素E组。动物右肾切除1周后,夹闭左肾动脉制作IRI模型,24h后取肾标本,维生素E组右肾切除后给予维生素E50mg/d灌胃至再灌注24h。半定量分析肾脏病理损伤、TUNEL检测肾组织凋亡、比色法测肾组织caspase-3活性。结果①与对照组相比,IRI组肾脏病理损伤严重、肾小管上皮细胞凋亡明显增加、caspase-3活性明显增高(P<0.01);②与IRI组相比,维生素E处理组肾脏病理损伤明显减轻、肾小管上皮细胞凋亡明显减少、caspase-3活性明显减少(P<0.01)。结论维生素E能抑制肾脏IRI诱导的肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能是通过抑制caspase依赖的细胞凋亡途径实现的。
- 李宏李荣山乔晞朱国贞邵珊白波
- 关键词：缺血再灌注肾脏凋亡CASPASE-3维生素E
- 中介素对大鼠肾小管上皮细胞缺氧／复氧模型cAMP／PKA途径的影响被引量：1
- 2011年
- 中介素（Intermdin，IMD）是降钙素基因相关肽（CGRP）超家族新成员，在肾脏足高表达，可增加肾血流和尿量，降低肾血管阻力。能通过环磷酸腺苷（cAMP）／蛋白激酶A（PKA）途径减少活性氧族（reactiveoxygen species，ROS）的含量减轻心脏缺血再灌注（Ischemiareperfusion，I／R）损伤。
- 周芸李荣山乔晞崔晓燕刘兴花白波邵珊
- 关键词：大鼠肾小管上皮细胞中介素CAMP心脏缺血再灌注
- 大鼠肾脏缺血再灌注损伤中垂体中叶素及降钙素受体样受体的表达被引量：12
- 2009年
- 目的观察垂体中叶素（IMD）及其受体降钙素受体样受体（CRLR）在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的表达变化。方法将健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组和手术组，夹闭大鼠双侧肾动脉制作肾脏缺血再灌注损伤（IRI）模型，于缺血再灌注后0、6、12、24、48、72h6个时间点各取6只大鼠，留取血清及肾组织标本，对肾脏病理损伤评分并行半定量分析；Western印迹法半定量分析肾组织IMD及其受体CRLR的表达变化；放射免疫法检测血浆中IMD的表达变化。结果手术组大鼠发生了急性肾小管坏死（ATN），以缺血再灌注48h时病理损伤最重。与假手术组比较，IMD及CRLR在缺血再灌注12、24、48、72h表达显著增高（均P〈0．01）；血浆中IMD在缺血再灌注12、48、72h表达显著增高（均P〈0．05）。结论IMD及受体CRLR在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中表达增加，血浆中IMD表达上调，提示其可能在肾脏缺血再灌注损伤病理生理过程中发挥作用。
- 于桂花李荣山乔晞周芸寇敏王晨白波邵珊
- 关键词：肾上腺髓质素降钙素再灌注损伤肾小管坏死
- 中介素的生物学效应研究进展被引量：4
- 2010年
- 中介素(intermedin)是降钙素基因相关肽超家族的新成员,可非选择性结合于该家族的共同受体即降钙素受体样受体/受体活性修饰蛋白系统,具有广泛的生物学效应,在调节心血管、消化、泌尿、呼吸以及神经内分泌功能等方面有着重要的作用,开展对中介素的相关基础和临床研究将有着重要的理论和实践意义。
- 周芸李荣山
- 关键词：中介素生物学效应降钙素基因相关肽
- 上调intermedin表达对大鼠肾脏缺血再灌注的保护作用被引量：4
- 2012年
- 目的观察上调肾脏intermedin（IMD）表达对大鼠肾脏缺血再灌注（I／R）的影响。方法24只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、肾脏I／R组、IMD＋I／R组、空质粒＋I／R组，每组6只。所有动物于I／R术24h后杀检，取肾组织进行光镜检查，留取血清测定尿素氮（BUN）和血清肌酐（Scr）的浓度。免疫组织化学方法、半定量RT．PCR、Western印迹检测肾组织IMD表达及部位。Western印迹测定内皮素1（ET．1）、肿瘤坏死因子α（TNF．仪）蛋白的表达。结果HE、PAS染色结果显示，I／R组肾小管及间质病理损伤显著重于假手术组，IMD＋I／R组小管间质损伤程度较肾脏I／R模型组及空质粒＋I／R模型组明显减轻（1．5±0．8比7．6±2．3和7．0±1．8，均P〈0．05】。与假手术组[（BUN3．85±0．21mmol／L，Scr（48．67＋3．61）txmol／L相比，I／R组、IMD＋I／R组以及空质粒＋I／R组BUN（10．13±2．14）mmol／L，（7．73±I．03）mmol／L，（9．77a-1．92）mmol／L和Scr（80．33＋7．15）Ixmol／L，（58．50＋3．27）μmol／L，（75．67±7．58）Ixmol／L均明显升高（均P〈0．05），其中IMD＋I／R组较I／R组以及空质粒＋I／R组BUN和Scr水平显著降低（均P〈0．05）。免疫组化结果显示，假手术组IMD呈弱阳性表达，主要位于肾小管间质细胞胞质内，I／R组肾组织IMD在肾小管上皮细胞和间质表达较假手术组上调；IMD＋I／R组肾组织中IMD表达较I／R组明显上调（P〈0．01）。与I／R组及空质粒＋I／R组相比IMD＋I／R组肾组织IMDmRNA，相对含量分别增加了60．7％、66．1％，蛋白相对含量分别增加了51．4％、55．9％。此外，与I／R组相比，IMD＋I／R组肾组织ET．1、TNF-蛋白表达显著降低（ET．1：0．17±0．02比0．08±0．02；TNF-α：0．35±0．02比0．21±0．04，均P〈0．05）。结论在大鼠肾脏I／R前上调IMD表达可能通过抑制ET-1、TNF-α表达
- 朱国贞李荣山乔唏黄晓光张晓琴王晨邵珊白波
- 关键词：肾功能不全肿瘤坏死因子Α内皮素1INTERMEDIN
- 中介素减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤被引量：1
- 2012年
- 目的探讨中介素（IMD）对大鼠肾脏缺m再灌注损伤（IRI）的影响，及其过程中一氧化氮合酶（NOS）的作用和机制。方法将健康雄性wistar大鼠分为4组：假手术组，行右肾切除术，1周后单纯分离左侧肾蒂及肾动脉，而不夹闭肾动脉；肾脏缺血再灌注（IR）组，行右肾切除术，1周后行左肾缺血再灌注手术；IMD基因转染组，右肾切除后左。肾行超声微泡介导的IMD-pCDNA3．1（＋）质粒转染术，饲养1周，再行左肾缺血冉灌注手术；空质粒转染组，右肾切除后左肾行超声微泡介导的pCDNA3．1（＋）质粒转染术，饲养1周，再行左肾缺血再灌注手术。大鼠于缺血再灌注术后24h处死，用免疫组织化学方法检测。肾组织IMD表达，取肾组织进行病理学观察，取血清测定尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）浓度，检测肾组织中内皮型NOS（eNOS）、诱导型NOS（iNOS）以及神经型NOS（nNOS）mRNA及其蛋白的表达。结果假手术组大鼠肾组织中IMD位于肾小管及问质细胞胞浆内，其表达灰度值为66±35；肾脏IR组大鼠肾小管上皮细胞和问质中IMD表达灰度值为176±48，高于假手术组（P〈0．01）；IMD基因转染组肾组织中IMD表达灰度值为262±68，高于肾脏1R组（P〈0．01）；空质粒转染组IMD表达灰度值为180±51，和肾脏IR组间表达的差异无统计学意义（P〉0．05）。与肾脏IR组相比较，IMD基因转染组大鼠肾脏组织病理损伤程度较轻，血清BUN和Cr较低（P〈0．05），eNOSmRNA及eNOS表达升高（P〈0．05），iNOSmRNA及iNOS表达降低（P〈0．05），而两组问nNOSmRNA及nNOS表达的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论中介素可能通过促进eNOs表达、抑制iNOS表达从而减轻大鼠肾脏IRI。
- 朱国贞李荣山乔晞黄晓光邵珊白波
- 关键词：再灌注损伤中介素一氧化氮合成酶
- 维生素E在大鼠肾脏缺血再灌注中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的 观察维生素E（VE）对大鼠肾脏缺血再灌注（I/R）的作用.方法 18只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、I/R组、VE＋ I/R组,每组6只.所有动物于I/R术24h后处死,取肾组织进行光镜检查,留取血清测定尿素氮（BUN）和肌酐（SCr）的浓度.Western印迹测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白的表达.结果 HE、PAS染色结果显示,I/R组肾小管及间质病理损伤显著重于假手术组,VE＋ I/R组小管间质损伤程度较肾脏I/R组明显减轻.与假手术组相比,I/R组以及VE＋I/R组BUN和SCr均明显升高[BUN：（10.13±2.14）、（7.67±1.63）、（3.85±0.21） mmol/L,SCr：（80.33±7.15）、（63.67±5.40）、（48.67±3.61）μmol/L]（P均＜0.05）;VE＋ I/R组较I/R组BUN和SCr水平显著降低（P均＜0.05）.Western Blotting检测显示,VE＋ I/R组肾组织TNF-α蛋白表达与I/R组相比显著降低（P＜0.05）.结论 VE可能通过抑制TNF-α表达发挥对I/R中肾脏保护作用.
- 朱国贞李荣山张晓琴王晨邵珊
- 关键词：维生素E缺血再灌注肾脏肿瘤坏死因子Α
