国家自然科学基金(30771062)
- 作品数：6 被引量：23H指数：3
- 相关作者：丁卫闫韶飞张凤兰文朝阳油红捷更多>>
- 相关机构：首都医科大学首都医科大学附属北京儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抑制NAMPT表达增强K562细胞对伊马替尼的敏感性及相关机制研究被引量：1
- 2012年
- 本研究探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)对K562细胞(人慢性髓系白血病细胞株)对伊马替尼敏感性的影响及其相关机制。在体外合成针对NAMPT基因的小干扰RNA(siRNA),转染K562细胞株。将转染后的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用48 h后,采用PI/Calcein染色方法测定细胞存活率;经不同浓度伊马替尼作用48 h后,采用MTS法测定细胞增殖活性,计算半数抑制浓度(IC50)。未经转染的K562细胞经1μmol/L伊马替尼作用3-48 h后,采用Western blot方法检测NAMPT表达的变化。通过对NCBI GEO中基因表达数据的挖掘分析及Western blot方法检测,探讨NAMPT-siRNA和伊马替尼对凋亡相关基因表达的影响。采用荧光素酶报告基因技术,研究NAMPT-siRNA、伊马替尼对NF-κB转录活性的影响。结果表明,1μmol/L伊马替尼作用于K562细胞48 h对NAMPT表达无明显影响。NAMPT-siRNA能够明显抑制K562细胞NAMPT的表达,再经1μmol/L伊马替尼作用后,NAMPT-siRNA干扰组细胞存活率明显降低(P<0.05),提示抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性。不同浓度伊马替尼作用后,干扰组IC50值明显降低(P<0.05);拟合增殖曲线在0.01-0.1μmol/L伊马替尼浓度范围内斜率增大,提示在此范围内NAMPT-siRNA与伊马替尼的协同作用最强。基因表达谱分析及Western blot验证结果都显示,NAMPT-siRNA和伊马替尼处理均可下调NF-κB下游因子抗凋亡基因Bcl-2表达水平,两者同时作用时效果更明显。NAMPT-siRNA及伊马替尼均能降低NF-κB转录活性,两者同时作用效果更显著。结论:伊马替尼可能并非通过调节NAMPT表达影响细胞存活;抑制NAMPT表达能增强K562细胞对伊马替尼的敏感性,可能与抑制NF-κB及其下游因子Bcl-2有关。
- 林萍萍白雪佳岳志霞闫韶飞李宗文高超梅妍妍王凯玲李伟京丁卫李志刚
- 关键词：NAMPT伊马替尼NF-ΚBBCL-2K562细胞
- 红外荧光素Alexa Fluor 647标记的2型腺相关病毒保持天然的感染活性被引量：3
- 2008年
- 近年来红外荧光素的研发及相应的标记技术的进展在生物医学领域的研究中备受关注,通过与尖端仪器的结合在一系列生物样本的检测中得到广泛的应用.然而,红外荧光标记技术在病毒感染生物学研究中的应用却少见报道.本文建立了Alexa Fluor 647(AF647)红外荧光素标记重组2型腺相关病毒(AAV2)的方法,并通过凝胶电泳的银染、红外荧光成像和透射电镜分析等手段,对标记病毒的结构和形态与未标记的病毒进行了细致的比较,同时进一步鉴定了其感染293T细胞后的转导活性.结果发现,AAV2在标记后的理化性质和感染活性均未发生改变.应用狭缝印迹和激光共聚焦显微成像技术,分别对标记病毒的细胞摄取效率和在宿主细胞内的分布进行描述,为红外标记AAV2在研究中的应用提供了范例.AF647标记的AAV2为腺相关病毒的感染动力学研究提供了新的手段,具有敏感度高、抗荧光漂白和低非特异干扰等优点,并且对直接有效地结合形态学分析和生化分子生物学检测,具有重要的应用价值.
- 贾书勤张凤兰丁卫
- 关键词：腺相关病毒荧光标记ALEXAFLUOR红外成像
- 腺相关病毒基因治疗载体的改良与应用被引量：9
- 2009年
- 腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)的非致病特性使得以其为基础的重组病毒载体具有卓越的安全性,成为在基因治疗中最富吸引力的候选载体之一,并且在多种疾病的临床治疗中广泛应用。在过去的十余年中,随着分子病毒学领域对AAV基础研究的进展,研究者不断地为重组腺相关病毒的生产和改良提供新的思路和方案,以改善其对宿主或靶向细胞的感染选择性和转导效率,其中相当部分已逐渐向临床试验阶段过渡。本综述将在介绍AAV基本生物学特征的同时,结合一些实验室研究的成功案例,重点讨论AAV的改良策略、实施方案与应用特点,并对当前以AAV为载体的基因治疗的全球现状及其所面临的挑战与前景进行分析和探讨。
- 张凤兰文朝阳丁卫
- 关键词：腺相关病毒基因治疗
- 晚期内体的分选转运参与Ⅱ型腺相关病毒在IB3人支气管上皮转化细胞中的转导激活过程
- 2011年
- 目的确认Ⅱ型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV2)是否能够在肺上皮细胞中经过囊泡分选过程进入晚期内体,并且进一步检测在内体中分离的腺相关病毒是否具有不同的转导活性,从而探讨内体转运系统在腺相关病毒感染动力学中的作用。方法以RAB7的GFP融合蛋白作为晚期内体的特异性标记,通过对Ⅱ型腺相关病毒进行荧光标记,在人支气管上皮转化细胞IB3中进行共聚焦显微成像的共定位分析。通过密度梯度离心和内体亲和沉淀对进入细胞内体的病毒颗粒进行分离,并对细胞进行二次感染时的活性在有或无RAB7影响因素的条件下进行比较分析。结果相当部分的Ⅱ型腺相关病毒在感染IB3细胞后能够进入晚期内体且进入晚期内体的病毒比未经细胞分选的病毒表现出更好的外源基因表达活性。结论提示Ⅱ型腺相关病毒在肺支气管上皮细胞中晚期内体的转运可能促进其转导的活化过程。
- 闫韶飞文朝阳高尔静牛静郑少鹏丁卫
- 关键词：腺相关病毒RAB蛋白囊泡运输呼吸道上皮细胞
- 流感疫情中的医学信息学
- 2009年
- 在应对当前甲型流感暴发的疾病控制过程中,医学信息学发挥着不可替代的重要作用.本文结合多种信息学数据库来源的最新资料,在介绍甲型流感病毒的生物学知识和生物信息学分析手段的同时,对本次甲型流感病毒的来源、进化、传播和预防等一系列重要问题,结合信息学分析的结果做了深入的分析和探讨.并且突出介绍和评论了医学信息学在疾病控制中的前景和潜力,希望能有助于多种相关学科的生物医学研究人员.
- 闫韶飞丁卫吴巍
- 关键词：流感病毒医学信息学公共卫生
- 脂肪因子visfatin的调节与功能多样性被引量：10
- 2008年
- 内脏脂肪素(visfatin)是一种由内脏脂肪细胞分泌的分子质量为52ku的蛋白质细胞因子.基因序列分析显示其cDNA编码序列与前B细胞集落增强因子(PBEF)同源且在进化中高度保守.Visfatin被发现具有多种迥然不同的生物活性:通过与胰岛素受体相互作用,在不同的情况下visfatin可表现出类胰岛素或抗胰岛素样作用;在细胞质中,visfatin具有烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性,能够催化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的生物合成;作为分泌型的细胞因子,visfatin还可以诱导多种炎性因子的表达,如TNFα、IL-1β和IL-6.Visfatin与一些代谢疾病和急、慢性炎性疾病的关系日益受到重视,如糖尿病、肥胖、急性肺损伤、类风湿性关节炎、败血症、心肌梗塞和炎性肠病等.最近,对visfatin的启动子区及其单核苷酸多态性(SNP)的研究,进一步深化了人们对其在疾病发病机制中作用的认识.重点讨论visfatin的结构、功能多态性以及它与多种疾病的关系.
- 油红捷闫韶飞丁卫
- 关键词：内脏脂肪素启动子单核苷酸多态性沉默信息调节因子
