国家科技部科技人员服务企业行动项目(2009GJF00049)
- 作品数：9 被引量：41H指数：5
- 相关作者：颜其贵冯迎春廖红郝中香郭万柱更多>>
- 相关机构：四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技部科技人员服务企业行动项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 四川一起山羊地方性鼻内肿瘤疫情的诊断被引量：12
- 2011年
- 四川某地区山羊养殖基地发生一起特殊的肿瘤性疾病,通过流行病学及临床症状调查、尸体剖检、病理损伤的显微及超微结构观察和病原的核酸测序等一系列研究,将该病确诊为山羊地方性鼻内肿瘤(ENT)。本次疫病与国外报道的病例基本一致。这是国内首次报道ENT的病原,为该病的进一步研究奠定了基础。
- 刘菲冯迎春颜其贵韩国全
- 关键词：山羊病理病原确诊
- 山羊痘病毒PCR/酶切检测方法的建立被引量：2
- 2011年
- 为了建立一种快速的山羊痘检测方法,根据山羊痘病毒基因组保守区T3A/T3C基因设计了1对引物,以山羊痘病毒DNA为模板进行PCR扩增并连接到pMD18-T载体进行序列测定,测序结果显示片段长491 bp,与已报道的山羊痘病毒对应序列进行比对,同源性高达98%。特异性和灵敏性试验及PCR产物的酶切位点分析表明,该引物特异性好,敏感性强。本研究建立的山羊痘病毒PCR/酶切检测方法可应用于山羊痘病毒感染的临床诊断。
- 冯迎春任玉鹏颜其贵雷燕郭万柱
- 关键词：山羊痘病毒PCR酶切
- 山羊鼻内肿瘤病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：9
- 2014年
- 根据GenBank中登录的山羊鼻内肿瘤病毒(ENTV)SC株的基因序列,设计合成了1对特异性引物,通过对反应条件进行优化,建立了一种快速检测ENTV的RT-PCR方法。结果显示,以该引物进行RTPCR扩增,能得到与理论设计值大小相符的323bp的特异性条带;与ENTV-SC株相应序列的同源性达98%;该方法最低可检测出6pg的ENTV;用此方法对健康山羊鼻黏膜上皮、健康牛鼻黏膜上皮、绵羊肺腺瘤病毒、肺炎球菌和大肠杆菌的扩增结果均为阴性,重复性和稳定性好;对随机收集的100份山羊样品进行检测,并与临床诊断结果进行比较,符合率为100%。结果表明,此方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性均好,可用于山羊鼻内肿瘤病毒的临床检测和试验研究。
- 郝中香谢智勇廖红刘丹郭玲刘杰杨绍林舒蕾颜其贵
- 关键词：山羊RT-PCR
- 山羊地方性鼻内肿瘤病毒ENTV-SC株基因组cDNA文库的构建及生物信息学分析被引量：13
- 2011年
- 根据山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)基因组序列设计5对引物,通过RT-PCR技术从山羊地方性鼻内肿瘤自然感染病例的鼻液中分段扩增获得了ENTV的基因组,构建了ENTV的cDNA文库,并对基因组序列进行了生物信息学分析。结果显示,获得的序列全长7 168bp,包含相互重叠的gag-pro-pol-env编码区及部分5′端非编码区,属B/D型病毒粒子。ENTV-SC与ENTV-2(2003年测序)高度相似,LTR、gag、pro、pol、env基因的相似性分别为91.0%、88.0%、88.6%、89.3%和91.0%。ENTV-SC与EN-TV-1及绵羊肺腺瘤病毒相似,主要差异存在于gag、env的跨膜区及LTR。
- 冯迎春颜其贵郭万柱王小玉舒蕾
- 关键词：山羊CDNA文库生物信息学分析
- 猪源乳酸杆菌的分离鉴定及体外抑菌试验被引量：7
- 2015年
- 为了获得用于研制微生态制剂的乳酸杆菌菌株,从健康仔猪小肠中利用MRS固体培养基分离得到一株革兰氏阳性杆菌,通过培养特性、染色特征、菌落形态以及生化鉴定结果,初步判定该菌株为乳酸杆菌,再结合16S rDNA分子鉴定进一步确定该菌株为乳酸杆菌。牛津杯法体外抑菌试验结果显示,该菌对致病性大肠杆菌的抑菌效果较好,可以作为微生态制剂的保存菌种。
- 郝中香廖红刘丹郭玲刘杰葛红杨绍林张曼丽颜其贵
- 关键词：猪源乳酸杆菌抑菌试验
- 山羊地方性鼻内腺瘤病毒和内源性逆转录病毒gag变异区的克隆与分析被引量：5
- 2011年
- 根据病毒gag变异区的两端设计引物,PCR扩增ENTV及ERVs的gag变异区,TA克隆并测序,经比对分析发现,在ERVs的783位~803位的＂CCT＂重复序列,编码多聚脯氨酸＂PPPPPPP＂,对应在ENTV gag中存在缺失突变和点突变,编码氨基酸为＂PSL＂,生物信息学预测该区域的变异位于一个重要的抗原决定簇中,对gag在ENTV和ERVs中的功能有较大影响,为进一步研究gag的抗原性及相关免疫学检测方法的建立奠定基础。
- 王小玉冯迎春颜其贵张国俊陈瑜韩国全任玉鹏郭万柱
- 关键词：山羊GAG
- 某规模化猪场猪瘟、蓝耳病及伪狂犬病抗体检测与分析被引量：2
- 2014年
- 为应用酶联免疫分析(ELISA)试剂盒,分别对某规模化猪场送检的70份血清进行猪瘟病毒抗体、猪蓝耳病病毒抗体、猪伪狂犬病病毒g B抗体检测和猪伪狂犬病病毒g E抗体检测。结果显示,上述4种试剂盒检测,阳性率分别为72.9%、90%、58.6%和1.4%。据此对该猪场免疫状况进行了分析。
- 郝中香廖红文彩芳郗立新张曼丽罗露权自芳刘丹杨绍林颜其贵
- 关键词：猪瘟蓝耳病伪狂犬病抗体检测
- 地方性鼻内腺瘤中DNMTs启动子甲基化状态及转录表达的研究被引量：2
- 2015年
- 为研究山羊地方性鼻内腺瘤中DNA甲基转移酶（DNMTs）启动子区甲基化状态及其对转录表达的影响,本研究采用甲基化特异性PCR和荧光定量RT-PCR法检测20例正常鼻内腺组织和24例鼻内腺瘤组织中DNMTs基因启动子甲基化状态及其转录表达水平,分析DNMTs基因甲基化对转录表达的影响。结果显示,24例鼻内腺瘤组织中DNMT1和DNMT3b基因启动子甲基化阳性率分别为20.8%（5/24）和41.7%（10/24）,与正常鼻内腺组织（未检测到甲基化）均差异显著（p〈0.05）。20例正常鼻内腺组织中DNMT1和DNMT3b基因相对转录表达量分别为1（0.693~1.444）和0.382（0.503~1.840）;5例甲基化和19例非甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT1相对转录表达量分别为1.56（0.678~1.474）和1.248（0.820~1.905）,两者差异不显著;10例甲基化和14例非甲基化鼻内腺瘤组织中DNMT3b相对转录表达量分别为1.165（0.646~1.548）和0.376（0.230~1.231）,两者差异显著（p〈0.05）。而DNMT3a在两组间无差异。以上结果表明,鼻内腺瘤组织中DNMT3b基因甲基化与转录表达相关,推测其对鼻内腺瘤具有促进肿瘤相关基因甲基化的作用,导致肿瘤相关基因失活或激活,最终导致肿瘤发生。
- 权自芳叶泥文彩芳郝中香廖红张曼丽颜其贵
- 关键词：DNA甲基转移酶启动子甲基化转录表达
- 羊地方性鼻内肿瘤病毒SU基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2013年
- 为了研究羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV)SU蛋白的功能,采用RT-PCR方法从ENTV感染羊鼻内分泌物中扩增获得SU基因片段,将其克隆到pMD19-T Simple载体;测序验证后,再对克隆载体进行EcoRⅠ和SalⅠ双酶切并亚克隆到pET-32a上,将重组质粒转化至表达宿主菌Rosetta中进行IPTG诱导表达,对表达产物用SDS-PAGE筛选最适条件。结果显示,表达的重组菌融合蛋白大小约60.14ku,在IPTG终浓度0.75mmol/L,37℃诱导5h表达效果最好。表达产物通过Ni柱纯化后可得到纯度较高的目的蛋白。经Western-blot分析,所纯化的蛋白能与兔抗羊ENTV阳性血清进行特异性的免疫印迹反应,证明表达的SU蛋白有较好的反应原性。
- 谢智勇马新玥万莉马磊张琦杨映颜其贵
- 关键词：克隆原核表达纯化免疫印迹
