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应用生物发光成像技术示踪植入的骨髓间充质干细胞被引量：3: 2009年; 以间充质干细胞(MSC)为基础的细胞治疗已进入临床试验阶段,用于多种组织修复,而移植细胞体内存活是影响疗效的重要因素。为了体内示踪MSC,构建了萤火虫荧光素酶基因(fluc)逆转录病毒表达载体pL(fluc)SN,并筛选出稳定表达fluc的GPE+86细胞克隆。将逆转录病毒上清转染C57小鼠来源的MSC,经G418筛选后得到稳定表达fluc的MSC。将2×106个标记好的细胞注射正常骨骼肌,应用生物发光技术检测移植后不同时间细胞的存活情况。结果表明,随着时间的延长,细胞存活数目逐渐减少;移植后1天细胞死亡率高达(43.2±11.7)%,3天后细胞存活(8.6±2.5)%,6天后仅为(5.4±3.1)%,10天时未检测到荧光信号。结论:生物发光成像技术可用于移植的MSC体内示踪,但是即使将MSC植入正常的骨骼肌组织,大部分注入的MSC也将在短期内死亡。; 边素艳盖鲁粤叶平杨月峰王华郭子宽王立生; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞标记细胞移植

HMGB1促进人骨髓间充质干细胞迁移的实验研究被引量：2: 2006年; 目的:构建人高迁移率族蛋白(HMGB1)全长编码基因的原核表达载体,诱导和纯化重组蛋白,分析其对人骨髓间充质干细胞的迁移作用。方法:RT-PCR方法从人的单个核细胞中扩增出HMGB1全长编码基因,克隆于原核表达载体pET-24 a-d(+),经IPTG诱导表达,通过亲和层析方法纯化得到携带(H is)6标签的HMGB1融合蛋白;RT-PCR方法检测间充质干细胞HMGB1受体的表达;观察HMGB1对人骨髓来源间充质干细胞的迁移作用。结果:构建了融合蛋白HMGB1的原核表达载体,获得了高度纯化的HMGB1融合蛋白。RT-PCR方法检测到间充质干细胞表达HMGB1的某些受体如RAGE和TLR-4。HMGB1在体外能够诱导人骨髓来源的间充质干细胞的迁移。结论:重组HMGB1蛋白能够诱导骨髓间充质干细胞的迁移,此作用有可能通过RAGE和(或)TLR-4介导。; 孟二红郭子宽鲁茁壮边莉吴祖泽王立生; 关键词：高迁移率族蛋白间充质干细胞迁移逆转录聚合酶链反应

SPK1基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞的影响被引量：2: 2010年; 目的观察鞘氨醇激酶-1(SPK-1)基因修饰对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响。方法分别用携带SPK-1和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒载体,感染大鼠骨髓间充质干细胞后用WesternBlot的方法检测SPK1蛋白表达,用[32P]ATP掺入法检测SPK-1酶活性,用MTT法测定细胞增殖,用特殊诱导剂在体外向成骨和成脂细胞诱导后检测碱性磷酸酶的活性及油红O染色,用AnnexinV-PI双标法检测去血清诱导后细胞凋亡比例。结果Ad-SPK感染大鼠骨髓间充质干细胞后可有效表达SPK-1蛋白且有较高的酶活性;基因转染不影响MSC的增殖和向成骨、成脂细胞的分化,但可显著抑制去血清诱导的细胞凋亡。结论腺病毒介导的SPK-1基因转染不影响MSC的增殖、分化等干细胞基本特性,但可显著增强其抗凋亡能力。; 边素艳盖鲁粤叶平郭子宽李庆芳汪劲松王华; 关键词：骨髓间质干细胞

^(60)Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响被引量：6: 2007年; 目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。; 胡舜英蒋长盛陈国伟段海峰王荣亮吴斌郭子宽王立生; 关键词：Γ射线心肌细胞细胞活性凋亡

肝细胞生长因子对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：32: 2005年; 骨髓间充质干细胞的增殖、分化及迁移等生物学特性受骨髓微环境的调节。肝细胞生长因子(HGF)是骨髓微环境分泌的主要因子之一,但它对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响并不清楚。本研究目的是观察重组人HGF对骨髓MSC生物学特性的影响。用免疫组织化学方法检测cMet的表达,用MTT法测定细胞增殖,定量测定ALP的活性,进行细胞迁移分析和失巢凋亡(anoikis)诱导MSC凋亡分析。结果表明,重组人HGF不影响骨髓间充质干细胞的增殖和向成骨细胞的分化,但可明显促进骨髓间充质干细胞的迁移并抑制anoikis诱导的细胞凋亡;PI3K和MAPK途径参与了HGF促进细胞迁移的作用。结论:肝细胞生长因子通过受体cMet影响骨髓间充质干细胞的生物学特性。; 刘红军段海峰鲁茁壮王华张群伟吴祖泽王立生; 关键词：肝细胞生长因子骨髓间充质干细胞骨髓微环境生物学特性

腺病毒载体对骨髓间充质干细胞体外分化能力的影响被引量：5: 2010年; 目的研究腺病毒载体对Wistar大鼠骨髓间充质干细胞体外分化能力的影响。方法密度梯度离心加贴壁培养法自2周龄Wistar大鼠骨髓中分离培养MSC,用携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体(Ad-GFP)感染,48 h后用流式细胞仪检测感染效率;在特殊诱导剂诱导下,用碱性磷酸酶(ALP)染色、ALP活性及油红O染色分别鉴定腺病毒载体对MSCs成骨和成脂分化潜能的影响。结果 Ad-GFP感染MSC 48 h后97.82%的细胞表达GFP;MSC经特异性诱导剂诱导后可向脂肪及成骨细胞分化,Ad-GFP感染对MSC成脂及成骨分化能力无显著影响。结论腺病毒载体对大鼠骨髓MSC感染效率高,且不影响其体外多向分化潜能,是基因修饰MSC的理想载体。; 边素艳盖鲁粤叶平郭子宽王华胡泽斌; 关键词：骨髓间充质干细胞分化

骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病的机制被引量：5: 2007年; 缺血性心脏病的发病率和死亡率极高，严重威胁着人类健康。不可逆性功能心肌细胞数量的减少，造成心肌收缩功能降低，发展成为心力衰竭。目前常规的治疗手段只能缓解症状，而不能修复死亡或濒死的心肌。细胞移植作为一种新兴的生物学方法，为缺血性心血管疾病的治疗开创了一个全新的领域。; 边素艳盖鲁粤郭子宽; 关键词：细胞移植治疗缺血性心脏病缺血性心血管疾病收缩功能降低生物学方法

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国家自然科学基金(30400182)