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国家自然科学基金(31172334): 作品数：10 被引量：73H指数：4; 相关作者：陈少莺陈仕龙程晓霞王劭朱小丽更多>>; 相关机构：福建省农业科学院福建农林大学华南农业大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划福建省自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

感染新型鸭呼肠孤病毒的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳方法的建立被引量：1: 2013年; 为建立感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的番鸭肝脏蛋白质组双向电泳(2-DE)方法。本研究通过对人工感染NDRV的雏番鸭肝脏病变的观察,对肝脏蛋白质提取裂解液的配方、样品上样量、一向等电聚焦(IEF)参数等条件的对比和优化,建立了有效的番鸭肝脏2-DE方法。结果表明:采用攻毒后病变最典型的第5天的番鸭肝脏作为研究样品;采用研磨-超声-裂解液(7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4%CHAPS、65 mmol/L DTT、40 mmol/L Tris-base、0.5%IPG buffer)法提取肝脏蛋白质,结合2D clean-up kit以及去拖尾DeStreak试剂纯化蛋白,按1100μg上样,设置IEF参数为:50 V 12 h、200 V 1.5 h、500 V 1 h、1000 V 1 h、8000 V 3 h、8000 V 60000 V h、500 V维持,采用胶体考马斯亮蓝染色,能获得分辨率高、重复性好的2-DE图谱。应用建立的2-DE方法和PDQest 8.0分析软件,发现26个与正常番鸭肝脏蛋白表达水平超过3倍的差异蛋白点。该方法的建立为进一步寻找NDRV感染宿主组织相关蛋白以及水禽呼肠孤病毒差异蛋白质组学研究提供了技术支持。; 黄梅清朱果真陈仕龙郑敏程晓霞陈少莺; 关键词：番鸭肝脏蛋白质组新型鸭呼肠孤病毒

禽流感病毒与番鸭呼肠病毒感染番鸭免疫器官细胞凋亡的研究被引量：1: 2013年; 应用原位末端标记法和免疫组化SABC法,分别以H9亚型禽流感和番鸭呼肠病毒单独感染或混合感染雏番鸭后1、3、5、7、10d对胸腺、法氏囊、脾脏细胞凋亡和P53的动态变化进行检测。结果显示,H9亚型AIV,MDRV单独感染和混合感染均可导致雏番鸭胸腺、法氏囊和脾脏出现淋巴细胞凋亡增多;病毒感染早期各免疫器官组织细胞凋亡明显,感染后期细胞凋亡量逐渐减少;混合感染组脾脏、胸腺细胞凋亡更为显著。P53表达的变化与细胞凋亡呈现相同变化规律,表明P53表达与病毒诱导的细胞凋亡机制密切相关。; 刘文赵佳荣邓桦宁章勇李玉谷陈少莺马春全; 关键词：番鸭番鸭呼肠病毒 H9亚型禽流感病毒细胞凋亡

新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析被引量：3: 2012年; 鸭出血性坏死性肝炎是新型鸭呼肠孤病毒引起的危害养鸭业的一种新传染病。为防制该病,本研究以NDRV JM85株为种毒研制成油佐剂灭活苗,并通过免疫血清学检测及攻毒保护试验评价疫苗效果。结果表明,该疫苗安全性好,免疫原性强,麻鸭二免后28d产生较高的中和抗体,并能维持较长时间。种番鸭免疫后的子代雏番鸭具有一定的母源抗体,能够抵抗强毒的感染,可用于防制鸭新型呼肠孤病毒病。; 陈仕龙李兆龙林锋强王劭程晓霞朱小丽陈少莺; 关键词：新型鸭呼肠孤病毒灭活疫苗免疫原性分析

番鸭呼肠孤病毒人工感染雏番鸭肝的蛋白质组学分析被引量：1: 2017年; 应用蛋白质组学技术研究人工感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的番鸭肝和健康对照番鸭肝的蛋白质组差异,为深入研究MDRV的致病机制奠定理论基础。通过二维双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-TOF质谱仪分析获取MDRV感染组与健康对照组之间的差异表达蛋白质,并运用蛋白质搜索鉴定软件Mascot 2.3.02鉴定蛋白质。结果共鉴定出38个差异表达蛋白质。比较感染组和健康对照组结果,感染组番鸭肝中有10个表达下调的蛋白质和17个表达上调的蛋白质,7个表达蛋白质仅出现在健康对照组,4个表达蛋白质仅出现在感染组。MDRV感染组的番鸭肝有肝细胞、神经细胞和肌肉细胞受损现象,同时存在细胞修复机制。差异蛋白质组学为MDRV分子发病机制的分析提供了一个新途径。; 朱果真黄梅清程晓霞程晓霞陈仕龙郑敏俞伏松; 关键词：番鸭呼肠孤病毒番鸭蛋白质组学分析

番鸭细小病毒和小鹅瘟病毒混合感染的诊治被引量：8: 2015年; 番鸭细小病毒病是番鸭细小病毒（muscovy duck parvovirus,MPV）引起,以雏鸭为易感的急性传染性病毒病,临床以腹泻、呼吸困难、脚软、渗出性肠炎为主要症状,具有较高的死亡率。鹅细小病毒病俗称＂小鹅瘟＂,是由鹅细小病毒（goose parvovirus,GPV）引起的1月龄以内雏鹅和雏番鸭的一种传播快、死亡率高的高度接触性传染病。此病在临床上主要发生于雏鹅，少见雏番鸭发病死亡的报道。现将福建莆田某饲养区番鸭MPV和GPV混合感染的诊治情况报道如下：; 崔国杰陈少莺; 关键词：细小病毒小鹅瘟病毒混合感染 PARVOVIRUS 渗出性呼肠孤病毒

新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定被引量：54: 2012年; 本研究从临床表现为出血性坏死性肝炎的病死鸭肝脾中分离到病毒。病原特性鉴定显示,分离毒能致死番鸭胚和鸡胚;人工感染1日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒。分离毒能在MDEF等多种细胞中增殖并产生细胞病变。电镜下病毒在细胞浆中呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右。在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征,但M1-3和S1-4片段的迁移率明显不同于番鸭呼肠孤病毒(MDRV)。分离毒S3基因全序列与禽呼肠孤病毒(ARV)、火鸡呼肠孤病毒(TRV)和MDRV的核苷酸同源性分别为60%～60.2%,61.9%,62.3%～62.7%,氨基酸同源性分别为68.2%～69%,68.2%,69.3%～70.1%;S3基因编码的σB蛋白属于单独的进化分支,提示分离毒S3基因具有不同于ARV和MDRV的特征。结果表明鸭出血性坏死性肝炎的病原是一种属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。; 陈少莺陈仕龙林锋强王劭江斌程晓霞朱小丽李兆龙; 关键词：新型鸭呼肠孤病毒出血性坏死性肝炎

新型鸭呼肠孤病毒和鸭肝炎病毒混合感染的诊断及病原分离被引量：7: 2014年; 广东某养鸭场番鸭发生疑似雏鸭肝炎急性死亡病例。为了确诊病因,取病鸭肝脾等组织进行实验室检测和病原分离鉴定,结果显示:病鸭肝脾组织,冰冻切片免疫荧光检测番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MPV)阴性;RT-PCR检测鸭肝炎病毒(DHV)和新型番鸭呼肠孤病毒(NDRV)为阳性。将肝脾匀浆上清接种12日龄番鸭胚后3日死亡,进一步应用RT-PCR和免疫荧光法检测胚液和死胚胚心,结合扩增基因的测序、动物回归试验等,确诊发病鸭为NDRV和DHV的混合感染。; 刘伟刘伟崔国杰; 关键词：番鸭鸭肝炎病毒

感染新型鸭呼肠孤病毒雏番鸭和健康雏番鸭的肝蛋白质组学的差异: 2015年; 应用差异蛋白质组学研究感染新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)番鸭后的肝和正常番鸭肝的蛋白质组差异,为深入研究NDRV的致病机制奠定良好理论基础。通过二维双向凝胶电泳技术和MALDI-TOF-TOF质谱仪分析获取NDRV感染组与非感染对照组之间的差异表达蛋白质,并运用蛋白质搜索鉴定软件Mascot 2.3.02鉴定蛋白质。结果共鉴定出26个差异表达蛋白质。感染组和非感染对照组比较,感染组肝中有9个表达下调的蛋白质和12个表达上调的蛋白质,3个表达蛋白质仅出现在非感染组,2个表达蛋白质仅出现在感染组。NDRV感染组的番鸭肝有肝细胞受损现象。差异蛋白质组学为NDRV分子发病机制的分析提供了一个新途径。; 朱果真黄梅清陈仕龙郑敏程晓霞陈少莺; 关键词：番鸭差异蛋白质组学新型鸭呼肠孤病毒

番鸭呼肠孤病毒σC基因重组腺病毒载体的构建和鉴定: 2016年; 应用RT-PCR方法扩增出番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)的σC基因,通过XhoⅠ+HindⅢ双酶切后把该基因插入到经过同样双酶切的穿梭质粒pShuttle-CMV载体中。重组穿梭载体经过双酶切和PCR鉴定后进行测序,序列测定正确,同源性为99.8%。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染293细胞后获得重组腺病毒。PCR和RT-PCR鉴定的结果证明σC蛋白基因已成功插入到重组腺病毒载体中。; 林锋强程晓霞王劭朱小丽王锦祥陈仕龙陈少莺; 关键词：番鸭呼肠孤病毒重组腺病毒载体

两株不同疾病型鸭呼肠孤病毒部分生物学特性的比较被引量：7: 2013年; 通过电镜观察、血清交叉中和试验、病毒的细胞病变特征、病毒基因组特征及S3蛋白基因分析等方法,比较2株不同疾病型鸭源呼肠孤病毒的生物学及基因组特性差异。染毒细胞的超薄切片观察结果表明,2种病毒为球形,直径约70nm,新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)在胞浆中呈晶格状分布,而番鸭呼肠孤病毒(MDRV)呈零星、散在分布;MDRV和NDRV之间的相关系数R值很小,抗原相关性较低;NDRV的细胞病变类型以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩、坏死为主;经尿囊腔接种,NDRV能致死鸡胚,而MDRV不能致死鸡胚。MDRV及NDRV的S基因片段的迁移率明显不同;两者S3基因处在不同的进化分支。结果初步表明不同疾病型的水禽呼肠孤病毒MDRV和NDRV的生物学特性有较大差异。; 陈仕龙陈少莺林锋强王劭程晓霞朱小丽李兆龙王锦祥; 关键词：番鸭呼肠孤病毒新型鸭呼肠孤病毒生物学特性

国家自然科学基金(31172334)

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