国家自然科学基金(31172348)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：河南省农业科学院河南科技大学郑州大学更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪伪狂犬病毒的分离与鉴定被引量：8
- 2013年
- 从河南某发病猪场大批死亡仔猪的脾、肾及脑组织中分离到1株猪伪狂犬病毒(PRV)毒株,该毒株经细胞连续传代培养后,接种PK-15细胞能够产生明显的细胞病变(CPE),且能被PRV阳性血清中和。病毒对氯仿、乙醚敏感,56℃水浴30min能使其灭活。将所分离的病毒接种家兔和小鼠,均出现明显的伪狂犬病临床症状。PCR鉴定结果表明,用gp50基因序列引物能够从该毒株上扩增出目的条带,将测序结果与GenBank中的5株PRV毒株进行比对分析,同源性达99%。证实所分离病毒为猪伪狂犬病毒。
- 潘霄刘明阳李学伍郭成留邓瑞广张改平
- 关键词：猪伪狂犬病毒
- 猪伪狂犬病毒gD蛋白抗原表位的克隆及表达被引量：2
- 2016年
- 依据Gen Bank中猪伪狂犬病毒(PRV)BJ/YT株gD基因设计引物,扩增gD蛋白抗原表位,其设计扩增长度为702 bp,将扩增片段克隆到p MD19-T载体获得p MD19-T-gD。利用Bam HⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切p MD19-T-gD质粒,进行琼脂糖凝胶电泳并回收酶切片段,将回收片段与原核表达载体p ET-28a连接,成功构建了p ET-28a-gD表达载体。将表达载体转化感受态细胞Rosetta,IPTG诱导表达后,进行SDS–PAGE电泳,结果显示,在25 ku处出现特异性蛋白质条带。Western blot分析结果表明,表达产物能够被PRV的阳性血清识别。综上,成功克隆并表达了gD蛋白抗原表位,且其表达产物具有较好的生物学活性。
- 刘芳张冲王寅彪赵朴邓瑞广李学伍
- 关键词：猪伪狂犬病病毒GD基因抗原表位蛋白质表达
- 猪伪狂犬病毒gB和gC蛋白B细胞表位编码序列的融合表达及活性测定被引量：1
- 2016年
- 依据猪伪狂犬病毒g B和g C蛋白的B细胞表位编码序列,分别设计g B和g C蛋白B细胞表位编码序列的融合扩增引物,利用融合PCR技术,将g B和g C蛋白B细胞表位编码序列有机地融合为g B-C表位编码序列。将融合基因片段插入到原核表达载体p ET28a,并转化大肠杆菌BL21(DE3),1.0 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,融合蛋白g B-C能够高效表达,重组蛋白的分子质量约为38 ku;经Western blot鉴定分析,小鼠抗His标签单克隆抗体和PRV阳性血清均能识别表达的重组蛋白。表明成功表达了融合蛋白g B-C,且表达的重组蛋白具有较好的免疫学活性。
- 张冲刘芳赵东邓瑞广张改平李学伍
- 关键词：猪伪狂犬病毒B细胞表位
