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国家自然科学基金(81000930)
作品数:
1
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赵强
王玮
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邵宁生
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相关机构:
武警后勤学院
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北京市自然科学基金
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武警后勤学院
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丁红梅
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2014
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人vasorin蛋白的基因克隆、表达及纯化
被引量:3
2014年
目的:克隆、表达人vasorin(VASN)蛋白。方法:利用PCR方法从HepG2细胞的cDNA中扩增获得目的基因,并插入带有6×His标签的原核高效可溶性表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-VASN,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后目的基因获得表达,对融合目的蛋白进行Ni2+金属螯合柱纯化。结果:内切酶鉴定及基因序列测定证实重组表达质粒构建成功;对目的蛋白进行了原核表达,SDS-PAGE显示相对分子质量为61×103的特异表达条带;Western印迹证实目的蛋白为VASN,且主要以包涵体形式存在;对经尿素变性的表达产物进行了亲和层析纯化,有利于以后的变性、复性过程。结论:获得了人VASN融合蛋白,为其进一步的生物学功能研究奠定了基础。
丁红梅
赵强
王玮
李慧
刘农乐
李洁
苏雪婷
黄皑雪
房涛
李少华
邵宁生
关键词:
原核表达
纯化
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