复旦大学生命科学学院生物化学与分子生物学系
- 作品数：106 被引量：522H指数：13
- 相关作者：孙崇荣曹凯鸣杨青詹树萱顾其敏更多>>
- 相关机构：苏州大学医学部中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所南通大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术发展基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 蛋白质组学样品消化条件的优化被引量：1
- 2018年
- 随着质谱的飞速发展,基于质谱的“鸟枪法”技术广泛的应用于大规模的蛋白质组学分析。化学反应保护效率过低或者酶切效率过低则会降低鉴定效率,并且在现有的计算方式下会丢失很多肽段信息。因此,蛋白质样品的前处理在现有的蛋白质组学研究中发挥重要作用。本研究对蛋白质的烷基化试剂的反应条件进行优化以提高烷基化效率,同时优化酶解Buffer提高酶切效率以及增加酶量和引入多种酶以提高酶切效率等,最终确定了蛋白质前处理的最优条件,最终使用1μg样品在一次质谱分析鉴定到（2 425±7）个蛋白质,较未优化的方法提高了31%。优化后的蛋白质前处理方法可有效提高现有蛋白质组学的研究效率,可进一步应用于蛋白质的定量及动态分析研究。
- 黄竞男张旭敏
- 关键词：蛋白质组学LC-MS/MSMALDI-TOF
- 弓形虫昆山分离株P30抗原基因的克隆与表达被引量：14
- 2001年
- 目的 在大肠杆菌中高效表达P30抗原。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)从弓形虫昆山分离株cDNA文库中扩增得到编码P30抗原的基因 ,经DNA序列分析后导入表达载体pGEX - 5x - 3 ,然后在大肠杆菌BL2 1中进行表达 ,用亲和层析柱纯化表达产物 ,并以SDS -PAGE和Westernblotting进行鉴定。 结果 1、在我们比较的 783个碱基中 ,弓形虫昆山分离株与RH株之间只有两个碱基不同 ;2、得到一分子量为 5 4kDa的融合蛋白 ,占大肠杆菌总蛋白的 38%。结论 1、弓形虫昆山分离株与RH株的P30基因没有大的差异 ;2、在大肠杆菌中得到了P30融合蛋白的高效表达。
- 杨秋林陆惠民闵太善黄伟达
- 关键词：弓形虫P30PCR基因表达克隆
- 水稻中一个与花发育相关的MADS-box基因的表达检测被引量：1
- 2002年
- 根据MADS box基因的保守区结构 ,设计简并性引物 ,利用RT PCR从水稻 (OryzasativaL .)中克隆到一个新的水稻MADS box基因cDNA片段 ,将它命名为FDRMADS5 .该基因核苷酸序列 85 1bp ,编码 16 0个氨基酸 ,有典型的植物MADS box基因的结构 .FDRMADS5的Southern分析 ,表明它为单拷贝基因 .用Northern检测了FDRMADS5的表达情况 ,发现该基因除了在花中有表达外 ,在水稻的根尖和幼苗端中也有微量的表达 .这一结果表明 ,水稻的MADS
- 高之桢陈锐詹树萱孙崇荣曹凯鸣
- 关键词：水稻RT-PCRMADS-BOX基因SOUTHERN杂交
- 弓形虫昆山分离株速殖子期表达型cDNA文库的构建及鉴定被引量：17
- 2000年
- 目的 构建弓形虫速殖子期表达的基因的完整长度cDNA文库。方法 用CF - 11纤维素柱快速提纯速殖子 ,以盐酸异硫氰酸胍 (AGPC)一步法抽提总RNA ,oligo -dT纤维素分离mRNA后 ,用ClonTech公司的SmartTMPCRcDNA文库构建试剂盒 ,构建了弓形虫昆山分离株的表达型文库。结果 获得 5× 10 6个独立克隆 ,重组率为 99% ,插入片段的平均长度为 1kb。
- 杨秋林陆惠民邬敏辰黄伟达
- 关键词：弓形虫CDNA文库克隆
- 拟南芥MATE转运蛋白DTX6参与镉离子的胞内运输被引量：5
- 2020年
- 重金属镉是自然界广泛存在的一种环境污染物.镉离子可对动植物产生巨大的毒害作用,它通过食物链在人体内富集,最终严重威胁人类健康.在植物中,多药及毒素化合物外排蛋白(Multidrug and Toxic Compound Extrusion,MATE)可能参与包括铁(Fe^2+)、锌(Zn^2+)、铝(Al^3+)以及镉(Cd^2+)在内的金属离子的运输.实验室利用反向遗传学手段研究发现,拟南芥MATE转运蛋白DTX6(Detoxification 6)具有转运镉离子的能力,基因敲除突变体表现出对镉离子的抗性,在酵母中过表达DTX6使得酵母对镉离子极为敏感,而在拟南芥中过表达DTX6则抗镉表型不明显.进一步发现DTX6主要在根和下胚轴中表达,在酵母和拟南芥原生质体中,DTX6蛋白均定位于点状的囊泡结构中,与高尔基体存在共定位,据此我们推断DTX6可能参与镉离子在胞内的运输.
- 吕泽玉王文静赵明明葛晓春
- 关键词：镉毒害拟南芥
- 古细菌视紫红质4的发现、研究和运用
- 在众多蛋白质中,细菌视紫红质(BR)是一类重要的光敏感膜蛋白,带有视黄醛辅基。具有光驱质子泵功能。中性条件下,BR受光照后先向胞外侧释放一个质子、然后再从胞内侧提取一个质子。BR自上世纪年代被发现以来一直受到科学界的高度...
- 明明吴佳马德旺赵迎春王雅卓刘坚刘嘉黄力李庆国黄伟达徐德祥赵有源丁建东
- 关键词：细菌视紫红质
- 文献传递
- 水稻OsTB1基因的结构及其表达分析(英文)被引量：4
- 2003年
- TCP基因是一类植物中新发现的、可能具有转录因子活性的基因家族 ,成员包括金鱼草的Cy clodiea (Cyc)、玉米的TeosinteBranched1 (TB1 )以及水稻中的PCF1、PCF2等。玉米的TB1基因有维持玉米顶端优势的作用 ,与分蘖的发生密切相关 ;水稻和玉米同属禾本科 ,在发育的过程中都有分蘖的发生。通过筛选水稻的基因组文库 ,得到了水稻中的一个TB1同源基因OryzasativaTeosinteBranched1 (OsTB1 )。该基因不含内含子 ,基因编码一个长度为 388个氨基酸的蛋白 ,在氨基酸水平上与TB1的同源性为 70 % ,含有保守的TCP区和R区 ,是属于TCP基因家族的一个成员。RT PCR和mRNA原位杂交分析结果表明 ,OsTB1在水稻的侧芽中有很强的表达 ,在花序中有较弱的表达。以上结果显示该基因可能在水稻侧芽和花序的起始和发育过程中起重要作用。
- 胡文军张淑红赵忠孙崇荣赵毓橘罗达
- 关键词：水稻发育侧芽
- 人胰腺癌细胞外基质蛋白基因表达的研究被引量：3
- 1997年
- 胰腺癌组织具有较强的结缔组织反应特性，细胞外基质蛋白（Extracellularmatrixproteins，ECM）诸成分，在RNA和蛋白水平异常表达，具有一定的分子生物学意义。用Northernblotting方法，显示了胰腺组织及其癌变标本中ECM的基因表达（Geneexpression），以证实胰腺癌细胞本身能合成共产生这些细胞间质成分。结果显示：胰腺癌组织与胰腺癌细胞株（PaTu8988、PaTu8902）中均有ECM的基因表达，在RNA水平，Ⅳ型胶原和层粘素LN的表达较显著。正常组织中ECM的基因表达，在RNA水平，纤粘素FN和层粘素LN低水平表达，Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原更低。提示ECM可能在肿瘤的浸润、转移过程中起一定的作用。
- 龚涌灵许国铭黄伟达
- 关键词：胰腺肿瘤细胞外基质蛋白基因表达
- 水稻蛋白质激酶CK2催化亚基的表达和活性测定被引量：2
- 2005年
- 用RT-PCR的方法分离到了水稻蛋白质激酶CK2催化亚基(OsCK2α)的cDNA,通过大肠杆菌高效表达系统表达了OsCK2α,并利用亲合层析的方法纯化了重组蛋白质GST-OsCK2α.得到的大肠杆菌重组蛋白质GST-OsCK2α能够体外磷酸化CK2的常用底物酪蛋白,并且该磷酸化反应能够被CK2的特异性抑制剂肝素所抑制,研究表明重组CK2α具有典型的蛋白质激酶CK2的活性,为研究水稻CK2及其底物的功能奠定了基础.
- 俞芳朱炎忻骅曹凯鸣董爱武
- 关键词：水稻纯化活性测定
- 靶向胰腺癌细胞株增殖诱导配体基因小干扰RNA的制备及纯化被引量：1
- 2007年
- 目的:制备及纯化针对增殖诱导配体基因(APRIL)的小干扰RNA(APRIL siRNA),为进一步研究APRIL基因在人胰腺癌中的作用奠定基础。方法:构建靶向胰腺癌CFPAC-1细胞株APRIL基因双链RNA(APRIL dsRNA)的表达质粒pET-22b-APRIL,在大肠杆菌中发酵表达APRIL dsRNA,并利用CF-11树脂亲和层析纯化;用大肠杆菌Ⅲ型RNA水解酶(RNaseⅢ)水解dsRNA,制备APRIL siRNA,应用DEAE树脂离子交换层析使RNaseⅢ与核苷酸分离,分子筛层析进一步分离纯化APRIL siRNA。将纯化后的APRIL siRNA转染CHO细胞,荧光显微镜下观察转染后CHO细胞APRIL蛋白的表达情况。结果:pET-22b-APRIL转染大肠杆菌后,经IPTG诱导能大量表达APRIL dsRNA,表达产物经CF-11树脂纯化能得到纯化的APRIL dsRNA;dsRNA经RNaseⅢ水解后,过DEAE树脂离子交换层析柱,经5%PAGE、12%SDS-PAGE电泳证实RNaseⅢ与核苷酸分离,进一步经分子筛层析分离纯化,得到纯化APRIL siRNA。荧光显微镜下观察结果表明,APRIL siR- NA转染CHO细胞能明显抑制APRIL蛋白的表达。结论:成功制备了靶向CFPAC-1细胞株的APRIL siRNA,为下一步敲减CFPAC-1细胞APRIL基因的研究奠定了基础。
- 毛振彪邵建国王唯一谭畅黄伟达黄介飞
- 关键词：增殖诱导配体RNA干扰胰腺肿瘤
