北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系
- 作品数：56 被引量：314H指数：11
- 相关作者：胡美浩康巧华孙迎庆马宏宝王立波更多>>
- 相关机构：扬州大学兽医学院中国科学院微生物研究所中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学环境科学与工程更多>>
- 蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变被引量：1
- 1996年
- 本研究的目的是利用蛋白质工程定点突变的方法，在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基，１５位甘氨酸残基，１６位天冬氨酸残基），以其增加该分子的生物活性，并探讨蛋白质一级结构，空间结构和功能的关系。在质粒ｐＪＣ２６４的基础上，利用ＰＣＲ定点突变方法，对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变，使相应的ＤＮＡ片段变成表达Ａｒｇ１４－Ｇｌｙ１５－Ａｓｐ１６的核苷酸顺序，经酶切和ＤＮＡ测序鉴定正确。ＣＮＢｒ裂解后，用反相ＨＰＬＣ分析，分离制备突变体蛇毒锯鳞蝰素，制备的突变体蛇毒锯鳞蝰素的Ｎ－末端１０个氨基酸残基与天然蛇毒锯鳞蝰素的相同。在人的富含血小板血浆测活体系中，经１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导，突变体蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为３．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；重组野生型蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为４．０×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ；天然蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ_（５０）为２．８×１０^（－７）ｍｏｌ／Ｌ。此外，就蛇毒锯鳞蝰素中保守序列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ以及其空间构象对蛇毒锯鳞蝰素抑制血小板凝集之间的关系进行了讨论。
- 李洪超李雄彪胡美浩
- 关键词：蛇类基因定点突变
- 小鼠金属硫蛋白-I的表达对HeLa细胞耐药性的影响
- 2000年
- Hp SV2 - neo质粒作为载体 ,在 Eco RI酶切位点上插入小鼠金属硫蛋白 (MT- I)基因 ,然后用 DNA-磷酸钙介导的基因转移法将重组质粒转染 He L a细胞 ,经筛选得到表达 MT- I的抗性细胞克隆。经检测 ,G418抗性细胞内有 MT的特异性表达 ,表达量是未转染细胞的 2 .6倍。用不同浓度顺铂、阿霉素处理细胞 ,观察 MT- I基因的表达与 He L a细胞耐药性的关系。结果表明 :0 .1μmol/ ml顺铂作用细胞 72 h后 ,顺铂对转染和未转染 MT细胞的生长抑制率分别为 34%和 82 % (P<0 .0 5 ) ;半数细胞生长抑制浓度 (IC5 0 )分别为0 .144和 0 .0 6 1μmol/ ml,二者相差 2 .36倍。用 0 .2μmol/ ml阿霉素作用细胞 72 h后 ,对转染和未转染细胞的生长抑制率分别为 18%和 2 5 % ,差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结果表明 。
- 李侠吕文英殷慎敏李令媛茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白HELA细胞顺铂阿霉素耐药性
- 结核分枝杆菌DNA三价苗的细胞与体液应答研究被引量：3
- 2003年
- 本文构建了含分枝杆菌抗原Ag85B(30kDa) ,MPT - 83(2 6kDa)和ESAT - 6 (6kDa)分泌蛋白的真核表达载体pJW 4 30 3,酶切鉴定和序列分析 ,确定含有正确的读码框。重组表达质粒导入COS7细胞内并瞬时表达 ,证明上述三种重组质粒能在COS7细胞中表达出特异蛋白。三种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠 ,首免 ,二免和三免小鼠后 2 1dAg85B抗体平均滴度分别为 1∶32 0 0 ,1∶5 12 0 0和 1∶10 2 4 0 0 ,MPT - 83抗体平均滴度二次免疫和三次免疫后 2 1d测得为 1∶2 5和 1∶5 0 ,三次免疫后均未检测到ESAT - 6特异性抗体。在三免后 2 1dAg85B和MPT - 83的特异性细胞因子γ -干扰素的浓度分别 2 75 pg/ml±16 5 ,2 2 0 pg/ml± 19 8;而ESAT - 6的γ -干扰素浓度为 2 2 0 pg/ml± 9 9。本研究表明 ,多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答 ,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性。
- 蔡宏田霞李淑霞胡勤朱玉贤
- 关键词：结核分枝杆菌细胞免疫应答AG85BESAT-6
- 金属硫蛋白清除自由基及其对自由基引起的核酸损伤保护作用的研究被引量：38
- 1995年
- 通过化学反应体系产生ＯＨ－和Ｏ自由基，采用荧光和化学发光检测体系，比较研究了不同亚型及不同结合金属的金属硫蛋白（ＭＴ）清除自由基能力的大小。结果表明，对于同一亚型，Ｚｎ结合ＭＴ清除自由基的能力大于Ｃｄ结合ＭＴ同一结合金属的ＭＴ，ＭＴ１清除自由基的能力大于ＭＴ２。通过比较ＺｎＭＴ１与谷胱甘肽（ＧＳＨ）及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）清除自由基的能力大小发现，ＺｎＭＴ１清除ＯＨ的能力是ＧＳＨ的１００倍，清除Ｏ自由基的能力分别是ＧＳＨ和ＳＯＤ的２５和０．０１倍。即ＭＴ是一种很好的ＯＨ自由基清除剂。以ＯＨ对核酸（ＤＮＡ）的损伤为例，研究了ＭＴ对核酸损伤的保护作用，其变化规律与上述结果相一致。
- 帖建科李令媛茹炳根慈云祥
- 关键词：金属硫蛋白自由基
- 金属硫蛋白在医学上的应用被引量：8
- 1996年
- 金属硫蛋白在人类的健康、疾病以及癌症治疗方面有着重要作用。ＭＴ可提高机体对化疗药物的耐受住并且作为辅助药物可减少化疗及辐射治疗的毒副作用；而ＭＴ基因的表达在很大程度上是肿瘤细胞获得抗药性的主要原因．此外ＭＴ在镉抑制肿瘤方面以及在ｗｉｌｓｏｎ氏病治疗中扮演了重要角色．ＭＴ家族新成员一生长抑制因子是Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ病病理发生过程中的重要因素．本文将对ＭＴ在癌症治疗中的作用；ＭＴ在细胞抗药性方面的作用；ＭＴ在镉抑制肿瘤方面的作用；ＭＴ在Ｗｉｌｓｏｎ氏病治疗中的作用以及ＭＴ类蛋白一生长抑制因子的作用等五个方面的研究进展加以综述．
- 殷慎敏李令媛茹炳根
- 关键词：金属硫蛋白
- 大鼠过氧化酶体多功能酶cDNA的克隆与表达
- 纯化的大鼠2-烯脂酰-CoA水化酶2(简称水化酶2)经胰蛋白酶消化后分离得到6个肽并测定其氨基酸序列.通过PCR方法得到多肽cDNA序列及其推导的氨基酸序列.
- 秦咏梅
- 关键词：脂肪酸过氧化酶体多功能酶
- 文献传递
- AP2-EREBP、bHLH等8个拟南芥转录调控因子基因家族的大规模克隆和功能研究
- 本研究旨在应用蛋白质组学技术阐明拟南芥基因组编码的全部转录调控因子的结构、功能及相互作用模式,进行生化活性与功能分析。我们首先利用gateway克隆技术将各种转录因子的开放读码框分别克隆人中间载体(Entry Vecto...
- 朱玉贤潘怡巩威彭晓聿杨健
- 文献传递
- 玉米21kD富硫种子贮存蛋白的cDNA克隆及其序列分析被引量：5
- 1998年
- 利用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法从玉米掖单－２０开花后１０ｄ的叶片中分离到２１ｋＤ玉米种子贮存蛋白ｃＤＮＡ（Ｎ２１ＫＺＹ），并进行了序列分析．其编码蛋白包含２１１个氨基酸，极其富含甲硫氨酸，高达２７％；其Ｎ端有一个２１个氨基酸的信号肽．Ｎ２１ＫＺＹ及其编码蛋白和Ｃｈｕｉ等人分离的该基因的基因组克隆及其编码蛋白的同源性分别为９５．１％和９０．５％；两者的编码蛋白与玉米１０ｋＤ醇溶蛋白极其相似，其中间多出一个５４氨基酸的肽段和一个６氨基酸的肽段，这表明它们可能是来源于同一个祖先基因，后来通过基因重排、缺失或不均等交换等过程而形成的不同的蛋白质．
- 邹竹荣卞茂华刘思泽俞梅敏
- 关键词：玉米贮存蛋白
- 昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法被引量：19
- 1999年
- 谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨，经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心；取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白；然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４），四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４），铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明，采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带，分子量为２４ｋＤ，２４．５ｋＤ左右；Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰，呈现出一条带，分子量为２４ｋＤ左右；ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰，呈现出一条带，分子量为２３ｋＤ左右?
- 周先碗
- 关键词：谷胱甘肽S转移酶
- 酶降解法精制肝素钠被引量：2
- 1999年
- 肝素钠在哺乳动物的脏器和体液如：肝、肺、脾及胃肠粘膜等中含量很高．肝素钠作为一种有效的抗凝剂已广泛应用于临床，生物学功能在于阻止血液中凝血酶的作用．其衍生物还具有降血脂、消炎、抗过敏、利尿及调节免疫功能等多种用途．肝素钠属于多糖类化合物，作为溶栓类药...
- 周先碗何伟
- 关键词：肝素钠纯化
