山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所
- 作品数：192 被引量：582H指数：11
- 相关作者：刘贤锡崔行于雪艳姜安丽张莲英更多>>
- 相关机构：佛山科学技术学院农牧学院北京大学药学院北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体的构建及对人T淋巴和单核细胞系锌转运体基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,观察其在人T淋巴细胞系Jurkat-E6-1和人单核细胞细胞系THP-1中的表达,并检测ZIP2在两种细胞系中过表达及其对其他锌转运体的影响。方法利用外周血经RT-PCR扩增获得人ZIP2 cDNA序列,将其与pEGFP-N1定向连接,构建完成转染细胞48 h后,通过RT-PCR检测ZIP2过表达情况,并检测ZIP1、ZIP6、ZIP8、ZIP10、ZnT1、ZnT5等锌转运体表达变化。结果经过双酶切鉴定以及测序结果显示目的基因大小、插入方向均正确。在Jurkat-E6-1细胞中,ZIP2过表达使ZnT-1表达显著降低(P<0.05),但在THP-1细胞中,ZIP2过表达对其他锌转运体表达没有显著影响。结论成功构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,瞬时转染Jurkat-E6-1细胞和THP-1细胞,Jurkat-E6-1细胞中ZIP2过表达使ZnT1表达下调,而THP-1细胞中ZIP2过表达并未对选定的其他锌转运体产生显著影响,两种不同的免疫细胞系中ZIP2过表达对锌转运体家族其他成员影响表现出差异。
- 蒋雅丽陶艳婷胡晓燕徐春晓张莲英
- 关键词：锌转运体过表达聚合酶链反应
- 表达人NEP基因重组腺病毒载体的构建及其降Aβ作用
- 目的构建携带人全长NEP基因的重组腺病毒载体,包装扩增获得高滴度病毒,检测其对损伤细胞的降Aβ作用。方法构建含NEP基因的腺病毒穿梭载体pAdTrack-nep,并与骨架载体pAdEasy-1在细菌内重组为pAd-NEP...
- 张静段珊杨玲玲崔行
- 关键词：腺病毒淀粉样Β-蛋白阿尔茨海默病
- 文献传递
- RRMS疾病潜在生物标记物关系探讨
- 2008年
- 目的通过对复发-缓解型多发性硬化(RRMS)患者脑脊液进行比较蛋白质组学及生物信号网络分析,探索其潜在生物标记物之间以及生物标记物与该疾病间的关系。方法分别收集RRMS组和对照组脑脊液进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D图像分析软件筛选出表达有显著差异的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱对其进行鉴定,ELISA进行定量验证,MetaCore集成软件对所鉴定蛋白质进行相关分析。结果8个蛋白质点在两组凝胶图谱上存在明显差异,4个点在RRMS组显著上调,4个点下调,其中Cystatin C的ELISA结果为,RRMS组(4.36±1.22)mg/L,对照组(6.00±1.68)mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结果表明,对所鉴定蛋白质成功构建了信号网络图谱。结论蛋白质点的差异表达及其生物信号网络图谱在分子水平上对RRMS疾病的发病机理、鉴别诊断及药物靶点的探索提供了依据。
- 柏淑美刘师莲杨银荣郭绪晓秦延江邓小梅
- 关键词：复发-缓解型多发性硬化比较蛋白质组学生物标记物
- 前列腺特异的转录因子NKX3.1上调Dicer1基因的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:研究前列腺特异转录因子NKX3.1对Dicer1基因表达的影响。方法:转染pcDNA3.1-NKX3.1至前列腺癌PC3细胞,通过G418筛选,有限稀释法克隆培养获得NKX3.1稳定转染的PC3细胞-PC3(+);采用基因芯片检测NKX3.1对前列腺癌PC3细胞基因组表达谱的影响。进一步应用RT-PCR、Western blot-ting进行验证。为进一步检测Dicer1表达增高、促进microRNA的成熟作用,构建了microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞,通过报道基因检测成熟microRNA let-7a-1对其靶序列的作用。结果:基因组芯片显示,NKX3.1稳定表达的PC3(+)细胞中,Dicer1表达明显高于PC3细胞。RT-PCR、Western blotting结果验证PC3(+)细胞中Dicer1mRNA和蛋白质的表达水平均高于PC3细胞。microRNA let-7a-1靶序列-报道基因融合质粒,转染PC3细胞和PC3(+)细胞后,报告基因检测,PC3(+)细胞中荧光素酶活性明显低于PC3细胞。结论:NKX3.1可上调前列腺癌PC3细胞中Dicer1的表达,促进microRNA的成熟及作用。
- 张菊关恒云张鹏举陈蔚文陈兆波倪娜娜朱闻捷王坤胡小燕姜安丽
- 关键词：PC3细胞
- 转染NEP基因对Aβ_(25-35)诱导神经元凋亡的保护作用被引量：1
- 2008年
- 目的研究转染NEP基因对神经毒物质Aβ25-35诱导神经元凋亡的保护作用。方法培养大鼠脑皮层神经元,用Aβ25-35作用神经元制备凋亡模型,NEP基因转染神经元。通过MTT法及流式细胞分析法观察NEP基因过表达对Aβ诱导神经元凋亡的保护作用。通过RT-PCR检测目的基因NEP,APP,以及凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达,Western-Blot测定APP和Aβ的蛋白表达。结果MTT和流式细胞分析法观察,发现在Aβ25-35作用下转染NEP组神经元活,性显著增高(P<0.05),凋亡率降低。RT-PCR及Western Blot结果显示,转染NEP组神经元APP基因的表达明显减少,Aβ的生成减少;同时促凋亡基因Bax表达降低,Bcl-2基因表达增高。结论转染NEP基因能保护Aβ所致的神经元凋亡。
- 张亚伦丁岩邵世滨杨玲玲任凯段珊曾季平崔行
- 关键词：神经元原代培养中性内肽酶
- 中枢神经系统脱髓鞘疾病脑脊液蛋白质组学研究被引量：5
- 2008年
- 目的建立中枢神经系统脱髓鞘疾病蛋白质组学技术体系,寻找并鉴定与中枢神经系统脱髓鞘疾病发生有关的生物标识物。方法以中枢神经系统脱髓鞘疾病患者的脑脊液为研究对象,分别采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,离线应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱得到相应的肽指纹图谱;同时用超高压液相色谱分离酶解肽段,在线采用电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定肽段氨基酸序列;搜索数据库鉴定部分蛋白质。结果分别获得中枢神经系统脱髓鞘疾病患者组和对照组的脑脊液双向电泳蛋白质组表达图谱,筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质10个,其中在疾病组中血红蛋白有明显上调而前列腺素H2表达下调明显。结论这些差异蛋白可能成为具有临床诊断意义的中枢神经系统脱髓鞘疾病潜在标识物,从而为中枢神经系统脱髓鞘疾病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据。
- 秦延江刘师莲杨银荣柏淑美张旭华邓小梅
- 关键词：蛋白质组学双向电泳脑脊液脱髓鞘疾病
- 神经特异性启动子PDGF-EGFP载体的构建及组织表达特异性鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的构建含有神经特异性启动子PDGF的绿色荧光蛋白真核表达载体,并进行组织特异性鉴定。方法提取人外周血基因组DNA,采用PCR技术扩增PDGF-B链上游启动子序列,将其定向克隆至增强型绿色荧光蛋白报告基因表达质粒pEGFP-1中,构建真核表达载体pPDGF-EGFP。将重组载体转染至人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH,以及4种其他组织来源细胞系,观察绿色荧光蛋白表达以鉴定其神经特异性。结果成功构建表达载体pPDGF-EGFP,经转染显示pPDGF-EGFP在人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH中高表达,而在其它4种非神经组织来源细胞株中极少量表达或未见表达。结论重组真核表达载体pPDGF-EGFP有较高的神经组织特异性,为进一步研究神经系统疾病的靶向基因治疗奠定了基础。
- 任凯丁岩崔云燕杨玲玲张静崔行
- 关键词：血小板源性生长因子细胞株
- 前列腺组织特异性表达载体pPSA-EGFP的构建被引量：2
- 2004年
- 目的:构建前列腺组织特异性表达载体。方法:利用基因重组技术将PSA基因上游5.8kb的调控序列克隆至真核表达载体pEGFP鄄1,构建前列腺组织特异性表达载体pPSA鄄EGFP;用脂质体Lipo鄄fectamine将载体pPSA鄄EGFP分别转染前列腺癌细胞株PC鄄3m、乳腺腺癌细胞株MCF鄄7、结肠腺癌细胞株HT鄄29、肝癌细胞株HepG2、宫颈癌细胞株HeLa和肺腺癌细胞株A549多种细胞,转染后48h荧光显微镜下观察GFP的表达情况,pPSA鄄EGFP和phAR共转染PC鄄3m细胞。结果:在pPSA鄄EGFP和phAR共转染的PC鄄3m细胞中绿色荧光蛋白表达明显,MCF鄄7细胞中绿色荧光蛋白表达微弱,其他细胞中荧光蛋白不表达。结论:构建的前列腺表达载体pPSA鄄EGFP具有组织特异性。
- 贾立宁张建业张莲英孔峰陈蔚文胡晓燕
- 关键词：EGFP前列腺组织特异性表达共转染PC-3M细胞组织特异性
- p35基因对MnCl_2诱导PC12细胞凋亡的作用被引量：6
- 2004年
- 目的:探讨p35基因对氯化锰(MnCl2)诱导的PC12细胞凋亡的作用。方法:将p35基因转染PC12细胞得到可稳定表达p35基因的PC12/p35细胞株,使用相差显微镜观察、MTT染色和流式细胞分析等方法检测p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞凋亡的作用。结果:p35基因在PC12细胞中的稳定表达可以有效地抑制MnCl2诱导的PC12细胞凋亡。结论:p35基因对MnCl2诱导的PC12细胞具有保护作用。
- 曾季平王立祥胡晓燕秦文孔峰杨玲玲崔行刘新垣
- 关键词：氯化锰PC12细胞细胞凋亡
- 褪黑素对氧自由基诱导的PC12细胞凋亡的保护作用被引量：2
- 2004年
- 目的:探讨氧自由基在阿尔茨海默病(AlzheimerDisease熏AD)发生中的作用及可能机制,评价褪黑素(Melatonin熏MT)的临床应用价值。方法:采用超氧自由基产生系统黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统(X/XO)作用于PC12细胞,以褪黑素拮抗其作用,观察细胞的形态学变化;MTT法检测细胞存活率,DNA电泳和流式细胞术分析细胞凋亡情况,RT鄄PCR技术测定凋亡相关基因bcl鄄2、bax的表达。结果:X/XO作用后,PC12细胞出现凋亡特征性改变,凋亡率增加,电泳呈现DNAladders,凋亡相关基因bax上调;而10-5M褪黑素即能改善凋亡情况。结论:氧自由基可诱导神经元凋亡从而促进AD发生,其机制与促凋亡相关基因Bax表达增高有关;褪黑素可减缓神经元凋亡,可用于临床预防与治疗。
- 杨玲玲付振涛孔峰胡晓燕曾季平崔行
- 关键词：活性氧阿尔茨海默病细胞凋亡
