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中山医科大学中山医学院寄生虫学研究所: 作品数：60 被引量：282H指数：12; 相关作者：王又红郭小华高久群更多>>; 相关机构：复旦大学生命科学学院南通医学院卫生系复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金美国中华医学基金国家教育部博士点基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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恶性疟原虫FCC1/HN株CSP抗原基因表达产物在小鼠体内的免疫应答研究被引量：4: 1999年; 目的：利用ｐｃＤＮＡ３质粒作为载体，在人宫颈癌细胞（ＨｅＬａ细胞）中高效表达恶性疟原虫环子孢子蛋白（ＣＳＰ），观察表达产物诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠免疫的应答水平。方法：目的基因ＰｆＣＳＰ在ＨｅＬａ细胞中表达，将纯化的表达产物免疫接种小鼠，通过ＥＬＩＳＡ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ分析、Ｔ淋巴细胞增殖实验、ＮＫ细胞活性检测和Ｔ淋巴细胞亚群测定，观察其诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生体液免疫和细胞免疫的应答水平。结果：ＥＬＩＳＡ检测抗体滴度达１∶６４００；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果在３８．３ｋＤａ相应位置出现较清晰的显色条带；表达产物能特异刺激小鼠脾淋巴细胞增殖、ＣＤ４＋与ＣＤ８＋细胞有所增加，并能提高小鼠ＮＫ细胞活性。结论：真核表达系统ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ／ＨｅＬａ表达产物能特异刺激小鼠产生体液免疫和细胞免疫的应答，; 方政余新炳刘彦文罗树红; 关键词：恶性疟原虫环子孢子蛋白 HELA细胞

弓形虫ROP1基因真核表达重组质粒免疫小鼠后的免疫应答被引量：28: 1999年; 目的：用构建的弓形虫ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１真核表达重组质粒，直接免疫小鼠，观察其所诱导的细胞及体液免疫反应。方法：碱裂解法大量制备ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，每鼠注射１００ μｇ，２ｗｋ后同量加强免疫１次，以ｐｃＤＮＡ３空质粒及生理盐水组为对照。分别于免疫后３０ｄ、５０ｄ、７０ｄ共３次用ＭＴＴ法测定小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞增殖活性及ＮＫ细胞活性；用间接免疫荧光抗体法测定Ｔ淋巴细胞亚群数目；ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ抗体滴度。结果：用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１质粒免疫小鼠３０ｄ后，脾脏明显增大；免疫组脾淋巴细胞增殖活性明显高于生理盐水及空质粒对照组。ＮＫ细胞杀伤活性３次的测定结果免疫组均高于对照组。Ｔ细胞亚群，ＣＤ４＋细胞数与对照组相比较无明显变化，而ＣＤ８＋细胞数显著增高。血清抗体ＩｇＧ７０ｄ内检测结果，与对照组相比较，无明显增高；而免疫后９０ｄ检测明显增高，抗体滴度１∶１００。结论：用ｐｃＤＮＡ３－ＲＯＰ１重组质粒ＤＮＡ免疫小鼠，可诱导产生细胞及体液免疫应答。; 郭虹陈观今郑焕钦周永安吕芳丽; 关键词：弓形虫重组质粒 DNA 免疫应答

弓形虫非同源性不同地理株的GRA1基因体外扩增片段的鉴定及比较研究被引量：12: 1999年; 目的对弓形虫人源性RH株、人源性ZS_2株、猪源性CN株3个不同地理株的GRA1基因片段鉴定并比较异同。方法采用PCR技术和限制性内切酶技术，分别对弓形虫3株的GRA1基因片段进行体外扩增。扩增的目的基因片段分别用3种内切酶HindⅢ、HPaⅡ、TaqⅠ进行单酶切鉴定、比较。结果从弓形虫3个分离株RH株、ZS_2株、CN标基因组DNA中扩增出785bp的GRA1基因片段。3个株的GRA1基因分别用3种内切酶酶切后，酶切片段与理论值相符。结论实验所用不同来源弓形虫分离株的GRA1基因扩增片段基本相同，且3种限制性内切酶酶切图诺基本一致，表明这3个分离株的GRA1基因高度保守。; 贾雪梅郭虹陈观今郑焕钦; 关键词：弓形虫聚合酶链反应克隆

紫外线减毒弓形虫ZS1株滋养体在小鼠体内的细胞免疫反应被引量：7: 1999年; 目的：探讨紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株在小鼠体内的免疫保护性和细胞免疫反应。方法：用波长为２５３７°Ａ的紫外线照射弓形虫ＺＳ１株滋养体，照射高度为５ｃｍ，照射时间６０ｍｉｎ。小鼠于免疫后４５ｄ用同株滋养体攻击感染，攻击后４ｄ剖杀，与单免疫组、单感染组及正常对照组小鼠比较其脾Ｔ淋巴细胞增殖反应及其亚群的变化。结果：小鼠接种紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株滋养体后能正常存活，于接种后４９ｄ各组织未查见滋养体、包囊或假包囊；免疫组攻击感染后存活时间较单感染组延长；体外特异抗原刺激后，可诱导免疫组及免疫攻击组强的脾Ｔ淋巴细胞增殖反应；免疫攻击组ＣＤ４＋Ｔ细胞明显下降，ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比率倒置；免疫组、免疫攻击组及感染组的ＮＫ细胞活性均明显增强。结论：紫外线减毒弓形虫ＺＳ１株滋养体疫苗能够诱导免疫小鼠产生一定的抗攻击感染保护力，其中ＣＤ８＋Ｔ细胞和ＮＫ细胞可能发挥着重要作用。; 吕芳丽郑焕钦郭虹陈观今; 关键词：弓形虫细胞免疫反应

微小隐孢子虫DNA探针的制备被引量：5: 1999年; 目的：制备一种高度特异敏感的隐孢子虫检测探针。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增微小隐孢子虫的一段核苷酸片段，扩增产物４５２ｂｐＤＮＡ用半抗原地高辛标记制备成探针。结果：经敏感性试验，该探针可检测２ｐｇ水平的隐孢子虫ＤＮＡ。用该探针与隐孢子虫ＤＮＡ和溶组织内阿米巴、贾第虫、大肠杆菌及痢疾杆菌等相关生物的ＤＮＡ和隐孢子虫宿主的ＤＮＡ进行斑点杂交试验，该探针只与隐孢子虫ＤＮＡ杂交。结论：该探针具有高度特异性和较高敏感性。; 郭步平张建斌连德润; 关键词：微小隐孢子虫 DNA探针杂交

弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导的细胞免疫应答被引量：23: 1999年; 目的用pcDNA_3－P30真核表达质粒直接免疫小鼠，观察所诱导的小鼠细胞免疫应答。方法大量制备量级质粒pcDNA_3－P30，经肌肉注射BALB／c小鼠，每隔3周接种1次，一共免疫3次。用MTT方法对脾脏的NK杀伤细胞率和淋巴细胞的转化率进行测定，采用免疫荧光法对CD4+、CD8+细胞进行测定。结果实验组NK细胞杀伤率为：70．0％±3．64，对照组及空白对照组分别为48．5％±6．06和470％±5．93，实验组NK细胞活性比对照组明显增高（P＜0．05）；ConA刺激小鼠淋巴细胞转化实验，实验组与对照组及空白对用级差异无显著性（P＞0．05）;对T淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋进行动态分析，可见随着感染时间的延长，CD8＋的数量逐渐上升，CD4＋／CD8＋的比率逐渐下降，实验组与对照组及空白对照有明显差异（P＜0．05）。结论重组质粒pcDNA3-p30免疫BALB／c小鼠可诱导一定的细胞免疫。; 周永安陈观今郭虹郑焕钦吕芳丽; 关键词：弓形虫 DNA疫苗 P30基因细胞免疫应答

小睾并殖吸虫的宿主调查研究被引量：6: 1991年; 本文对小睾并殖吸虫的自然宿主和实验宿主作了初步的调查与实验研究。结果证实其第一中间宿主为拟钉螺属的几种拟钉螺;第二中间宿主是景洪溪蟹和毛足溪蟹;适宜的终宿主为犬与猫。果子狸与大鼠能获得感染,但似为不适宜宿主。一只恒河猴未感染成功。; 周本江陈发凯夏代光; 关键词：并殖吸虫肺吸虫

恙螨体内恙虫病立克次体经精胞传递的实验研究被引量：5: 1997年; 本文报道地里纤恙螨雄虫人工接种恙虫病立克次体后与雌虫配对培养和传代，应用幼虫叮咬小鼠分离立克次体和PCR结合核酸杂交（核酸杂交检测PCR产物）检测子代体内立克次体的结果。幼虫叮咬小鼠分离立克农作检查第3子代幼虫体内立克次体阳性。PCR结合核酸杂交检测佛山市的病人恙虫病立克次休（未定株）接种雄虫和健康雌虫配对的第1、2、3子代成虫体内立克次体DNA阳性。Karp株接种雄虫的第1子代幼虫体内立克次体的幼虫叮咬小鼠法和PCR结合核酸杂交均呈阳性。; 黎家灿郑小英陈成福奚志勇; 关键词：地里纤恙螨恙虫病立克次体

恶性疟原虫传播阻断抗原的化学拼接与克隆: 1997年; 采用缺口填补法将恶性疟原虫有性期Pfs230和Pfs48／45抗原中的2个T细胞表位，3个B细胞表位以及人白介素-Ⅰ中的一个T细胞激活位点按预设方案，拼接成复合多价基因PfSI。复合基因全长147bP，编码43肽复合抗原，经分离、纯化后，插入质粒pcDNA3的多克隆位点，构建重组载体pcDNA3／PfSI。再将重组载体转化大肠杆菌JM109，用氨苄青霉素和PCR扩增法筛选阳性克隆，最后用限制性内切酶对阳性克隆进行鉴定。复合基因PfSI拼接、克隆的成功为在体外高效表达恶性疟原虫传播阻断抗原创造了条件。; 罗树红余新炳徐劲陈观今; 关键词：疟原虫恶性疟原虫克隆

恶性疟原虫FCC1/HN株CSP抗原细胞免疫应答IL-2和IFN-γ的体外诱生分析被引量：1: 2000年; 本实验利用恶性疟原虫FCC1／HN株CSP抗原基因在真核细胞（HeLa）中高效表达，将纯化的表达蛋白作为候选疫苗免疫小鼠，并通过体外诱生检测小鼠脾细胞白介素2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）水平。结果显示经疫苗免疫后的BALB／C小鼠脾细胞体外经特异性刺激后产生的IL-2和IFN-γ水平有显著提高。与我们前期研究结果比较，表明对该疫苗特异性的IL-2、IFN-γ的产生与淋巴细胞增殖以及NK细胞活性增高有明显的相关性；该疫苗对T细胞有一定的刺激能力，可诱导小鼠产生较强的细胞免疫反应。; 方政刘彦文黄为群季莘史玉坤余新炳; 关键词：IL-2 IFN-Γ

中山医科大学中山医学院寄生虫学研究所

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