上海交通大学医学院癌基因及相关基因国家重点实验室
- 作品数：52 被引量：286H指数：9
- 相关作者：于彬戴信兰舒惠群徐慧莉高宝梅更多>>
- 相关机构：复旦大学公共卫生学院江苏大学生命科学研究院复旦大学公共卫生学院流行病学教研室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用被引量：2
- 2010年
- 目的:构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法:PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag(HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果:成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coliBL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1mg/mlMDA-7/IL-24-HT7融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96h后,细胞凋亡率分别为(34.7±1.3)%和(22.1±0.9)%,显著高于未处理的肿瘤细胞(P<0.01)。结论:带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。
- 刘新建徐萍钱其军黄倩
- 关键词：MDA-7/IL-24HALOTAG融合蛋白肝肿瘤大肠肿瘤凋亡
- 二氯化钴对腺病毒基因表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:研究二氯化钴(CoCl2)对缺氧反应元件调控E1AE1B表达的条件复制型腺病毒载体(Ad-5HRE-E1AE1B-RFP)和缺乏缺氧反应元件的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-EGFP)在肿瘤细胞内表达和复制的影响。方法:肿瘤细胞经不同浓度的CoCl2处理后,Western印迹法检测缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;倒置荧光显微镜、FCM法及空斑形成实验等观察经CoCl2处理后,感染条件复制型腺病毒和(或)复制缺陷型腺病毒的肿瘤细胞中外源基因的表达水平和病毒复制情况;小动物成像仪观察缺氧调控的条件复制型腺病毒在肿瘤内提高复制缺陷型腺病毒表达的效率。结果:适当浓度的CoCl2(0.4和0.08μg/mL)能使胃癌细胞株(SGC7901)中HIF-1α蛋白稳定表达并积聚,可较好地模拟缺氧状态;在0.4μg/mLCoCl2作用下,Ad-5HRE-E1AE1B-RFP对肿瘤细胞的感染效率明显提高,表现为外源基因RFP阳性表达的百分率和荧光强度均明显提高,但空斑形成实验显示Ad-5HRE-E1AE1B-RFP并没有复制。0.4μg/mLCoCl2也能提高其他非缺氧调控的复制缺陷型腺病毒如Ad-EGFP、Ad-Luc的感染效率和表达水平;Ad-5HRE-E1AE1B-RFP与复制缺陷型腺病毒Ad-Luc联合注射裸鼠肿瘤能显著提高Ad-Luc的表达。结论:CoCl2能明显提高腺病毒的基因表达水平,其作用机制不仅与CoCl2诱导缺氧有关,也可能与影响基因转录有关。
- 刘新建季迅达田毓华陈霞芳谢匡成吴继红张圣海徐萍李川源黄倩
- 关键词：胃肿瘤腺病毒感染基因表达调控肿瘤缺氧诱导因子1二氯化钴
- 两种常用PI3K抑制剂对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/MIT耐药性的不同影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002(LY)和wortmannin(Wort)对米托蒽醌(mitoxantrone,MIT)耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/MIT耐药性的逆转作用。方法:LY或Wort与MIT联合作用耐药细胞株MCF-7/MIT后,在光学显微镜下记录细胞生长状况,MTT法检测细胞增殖和细胞活性。FCM法检测细胞内MIT的积聚。罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)染色法检测细胞线粒体膜电位。碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色法检测细胞周期。结果:LY和MIT联合作用可显著增强MIT引起的MCF-7/MIT细胞增殖抑制作用、由MIT引起的线粒体膜电位下降以及细胞周期S和G2/M期阻滞,其作用机制与LY增加MIT在MCF-7/MIT细胞内的积聚有关;Wort对MIT的药效无明显增强作用。结论:LY和MIT联合作用可显著提高耐药细胞株MCF-7/MIT对MIT的敏感度。
- 肖洋炯张萍黄明辉陈菲陈季武覃文新
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶米托蒽醌
- TC21/R-Ras 2在肿瘤中的研究进展被引量：2
- 2008年
- TC21/R-Ras2是RAS原癌基因家族的成员之一,与人的多种肿瘤如乳腺癌、食管癌和口腔癌的形成密切相关,研究表明其在不同的组织、细胞系中通过不同的信号转导通路,例如PI3K-MAPK、MAPK-mTOR、PI3K/AKT等,促进肿瘤的形成、细胞的恶性转化以及转移。
- 罗海荣郝向芳李锦军
- 关键词：肿瘤信号转导
- 人醛氧化酶蛋白在肝癌中的表达及其临床意义被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨人醛氧化酶(human aldehyde oxidase,hAOX)蛋白在肝癌细胞系、肝癌组织、癌旁肝组织、肝硬化及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法:采用Western印迹法和免疫组织化学法检测hAOX蛋白在7个肝癌细胞系、2个永生化肝细胞系、10例正常肝、12例肝硬化、57例肝癌及癌旁肝组织中的表达差异,分析其表达差异的临床意义。结果:Western印迹法检测结果表明,hAOX蛋白在MHCC-LM3、Hep3B、Huh-7和BEL-7402肝癌细胞系以及人永生化肝细胞系L-02和Chang’s liver等6个细胞系中均有较高表达,在MHCC-97L、HepG2和SMMC-7721细胞中则为低表达。免疫组织化学检测发现,hAOX在正常肝、肝硬化组织和癌旁肝组织中高表达,在癌旁肝组织中的表达较匹配肝癌组织的高(P<0.001)。Western印迹法检测结果提示癌旁肝组织中hAOX表达明显高于肝癌组织。hAOX表达与肝癌患者性别、年龄、血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)水平、乙肝表面抗原、肿瘤大小、病理学分级以及是否伴有肝硬化均无相关性(P>0.05),而与肿瘤血管侵犯和肿瘤生长方式有一定的相关性(P=0.053,P=0.011)。结论:hAOX在正常肝、肝硬化、癌旁肝组织中高表达,而在肝癌组织中表达明显降低,其表达可能会影响肝癌的血管侵犯和肿瘤生长方式。
- 李红葛超郝向芳李锦军
- 关键词：肝肿瘤免疫组织化学
- 人类全基因组范围的CpG岛的预测与分析被引量：2
- 2006年
- CpG岛的甲基化是表观遗传中基因表达调控的重要机制。虽然目前已存在几个从DNA序列判别CpG岛的标准,但如何在标准中选择合适的参数仍是研究的焦点。文章通过分析比较两种经典CpG岛判定标准与三种预测方法,提出了改进的CpG岛预测方法——CpGISeeker。应用该预测方法,结合判定标准中的三个基本参数组合出的13组组合参数,在人类全基因组范围内进行了CpG岛预测,并统计分析了CpG岛的重复序列组成以及相对于基因转录起始位点的位置分布情况。分析结果表明CpGISeeker具有更精确判定CpG岛的特性;同时还提示,随着判定标准严格性的增加,CpG岛的重复序列含量降低,与基因转录起始位点的相关性提高。将CpG岛最小尺寸为500bp、GC含量为60%、CpG出现率达到0.65的组合参数作为标准,是目前预测CpG岛的最佳方式。
- 庄海滨朱景德刘湘军
- 关键词：CPG岛甲基化表观遗传学
- 要用系统性疾病的观念重新认识癌症被引量：15
- 2005年
- 顾健人杨胜利
- 关键词：癌症系统性疾病恶性肿瘤早期宫颈癌乳腺癌
- 江苏省启东市乙型肝炎病毒基因型与肝癌及核心启动子突变的关系被引量：8
- 2010年
- 目的 对江苏省启东市肝癌高发区的HBV流行株进行基因型别鉴定,并分析其与肝癌的相关性. 方法自启东市肝癌高发区的182份血清标本中抽提HBV DNA,以PCR方法扩增HBV全基因或X基因,测序后与基因库中已知基因型的参照序列共同构建基因进化树,根据序列在进化树中的位置进行型别鉴定.率的比较采用χ 2检验或Fisher精确概率法. 结果对包含24例HBV携带者、11例慢性乙型肝炎患者及13例肝癌患者在内的48例患者的血清HBV全基因测序结果显示,44例（91.7%）为C2基因型,4例（8.3%）为B2基因型,未见A、D、E、F、G、H等型别,也未见B/C重组病毒.以X基因测序方法对182例患者血清标本的鉴定结果显示,C2和B2型分别占92.9%（169例）和5.5%（10例）,另有1.6%（3例）为B2/C2混合感染.启东地区C基因型的感染率明显高于邻近上海地区的78.9%（χ2=12.252,P〈0.01）.在81例肝癌和77例肝炎患者中,B、C基因型HBV的分布差异并无统计学意义（P〉0.05）.核心启动子区T1762/A1764联合突变在C基因型中的发生率为70.3%,明显高于B基因型中的30.8%（P〈0.05）;T1766和A1768突变则仅见于C基因型病毒中. 结论启东地区HBV感染以C2基因型为主,但其与肝癌的发生未见明显相关性.C基因型中较易出现核心启动子突变.
- 金晏朱宇陈陶阳郭霞张菁王金兵陈伟忠钱耕荪屠红
- 关键词：基因型突变
- JAK/STAT信号转导途径研究进展及其与肿瘤的关系被引量：25
- 2005年
- JAK/STAT代表的是一条极其快速的从细胞外到细胞核的信号转导通路.近年来发现JAK/STAT途径的激活,特别是STAT3的激活,对于细胞的生长,增殖和转化产生重要影响.本文对JAK/STAT信号转导途径和激活以及对肿瘤发生影响的机制进行了综述.
- 胡欣万大方
- 关键词：肿瘤信号传递JAK/STATSTAT3
- 慢病毒介导的双干扰RNA同时沉默IGF1R和EGFR蛋白治疗肝癌的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究双靶向IGF1R和EGFR基因的小干扰RNA(si RNA)慢病毒对肝癌细胞SMMC7721中IGF1R和EGFR表达的影响及其对细胞生长的作用。方法针对已经筛选确定的IGF1R和EGFR基因干扰有效序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与pLVTHM载体连接产生pLVTHM-IGF1R。RT-PCR合成含H1启动子EGFR-si RNA表达框,克隆入pLVTHM-IGF1R中形成pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA。用pLVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA、psPAX2和pMD2G 3质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA,大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度。用LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA感染SMMC7721细胞(感染组),以未经处理的SMMC7721细胞(细胞对照组)及空载体质粒LVTHM(空载体对照组)作为对照。RT-PCR及Western blot法检测细胞中IGF1R和EGFR的表达,Cell Counting Kit-8法检测细胞生长,TUNEL法检测细胞凋亡。结果成功构建慢病毒LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA;病毒滴度为4.58×109pfu/ml;LVTHM-IGF1R-EGFR-si RNA明显抑制肝癌细胞中IGF1R和EGFR的mRNA和蛋白的表达,分别为细胞对照组及空载体对照组的5%、4%和4%、3%以及10%、11%和8%、9%(P<0.05),同时能抑制肝癌细胞生长(P<0.05),促进肝癌细胞凋亡(P<0.05)。结论靶向IGF1R和EGFR基因siRNA慢病毒可同时有效封闭肝癌细胞中的IGF1R及EGFR,降低肝癌细胞的增殖能力,为以IGF1R和EGFR基因为靶点的肝癌生物治疗奠定了理论基础。
- 牛坚刘斌潘晴于彬李向农
- 关键词：慢病毒肝癌
