江南大学生物工程学院生物制药系
- 作品数：17 被引量：97H指数：6
- 相关作者：朱书峰高蕾王雪徐钰王妍更多>>
- 相关机构：苏州大学无锡市第四人民医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 产高活性抗癌物质的粘细菌的定向筛选被引量：11
- 2007年
- 粘细菌是一类复杂的具有多细胞行为的原核生物,属于革兰氏阴性菌。粘细菌能够产生丰富的活性物质,并且具有菌株特异性,为人类不断发现新的活性物质提供了广阔的前景。本文以3株肿瘤细胞系为筛选模型,采用MTT法,对370多株分离的粘细菌及其代谢产物进行定向筛选,获得六株产高活性物质的粘细菌,并根据《伯杰氏细菌鉴定手册》(第八版),初步把这六株菌株归属到属。
- 郭文杰陶文沂许正宏敖宗华
- 关键词：粘细菌次生代谢抗癌活性
- 血管抑素作用特异性及其结合蛋白的初步研究
- 采用99Tcm-rhAS,在S180肿瘤和Matrigel模型上分别进行了显像及放射自显影的研究,以求明确AS的作用特异性。结果发现S180肿瘤及Matrigel模型对99Tcm-rhAS特异性摄取,表明AS可与新生血管...
- 陶永辉张莲芬金坚
- 关键词：血管抑素MATRIGEL结合蛋白
- 文献传递
- 白藜芦醇抗肿瘤分子机制的探讨
- 目的观察白藜芦醇对耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖和细胞周期的影响及探讨其靶点蛋白。方法采用MTT法、光学显微镜观察白藜芦醇对MCF-7/ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响,噬菌...
- 冯磊金坚陶文沂张莲芬
- 关键词：白藜芦醇结合蛋白噬菌体展示技术
- 文献传递
- 人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
- 利用重叠PCR技术在体外拼接IFNβ和HSA基因,将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,置于启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白IFNβ-HSA。重组质粒pPIC9K-IFNβ...
- 雷楗勇张莲芬杨健良金坚
- 关键词：Β干扰素巴斯德毕赤酵母融合蛋白
- 文献传递
- 应用生物素-链霉亲和素的酶联免疫吸附法检测谷物中的玉米赤霉烯酮被引量：10
- 2009年
- 基于生物素-链霉亲和素的酶联免疫吸附法(ELISA),建立了玉米赤霉烯酮(ZEN)的ZEN-ELISA检测方法。该方法的检测灵敏度为0.8 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.1%和8.6%,平均加样回收率为91.2%;抗ZEN单克隆抗体与玉米赤霉醇的交叉反应度为12.3%,而其与赭曲霉素A、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、黄曲霉素B1无交叉反应;相关试剂在4℃存180 d后各检测参数基本无变化;该方法与商品ELISA试剂盒对同一样品ZEN测定结果的相关系数为0.943 2。说明该方法的特异性和稳定性较好,测定结果准确,可用于ZEN的大量筛查。
- 马智鸿黄飚屠蔷高蕾张珏王柯
- 关键词：真菌毒素
- 产高活性抗癌物质卵黄状多囊菌JSW103(粘细菌)的筛选被引量：2
- 2007年
- 以肿瘤细胞株为筛选模型,对分离的粘细菌代谢的产物进行定向、高通量筛选,在较短时间内得到了1株产高活性抗癌物质的粘细菌。根据其形态鉴定为多囊菌属(Polyangium)的卵黄状多囊菌(Polyangium vitellinum),命名为JSW103。JSW103代谢产生的甲醇提取的混合物对肿瘤细胞系B16和SGC7901体现有较强的选择性,其IC50分别达到了0.2701μg/mL和0.097μg/mL,并且对Bel 7402、H446、MCF-7也表现出较高的活性。
- 郭文杰朱秋劲陶文沂许正宏敖宗华
- 关键词：粘细菌次生代谢抗癌活性IC50
- 赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析被引量：36
- 2005年
- 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.
- 黄飚陶文沂张莲芬时瑾杨海麟金坚
- 关键词：真菌毒素单克隆抗体
- 血管钠肽促进小鼠3T3-L1脂肪细胞合成脂联素及其可能机制被引量：1
- 2012年
- 目的探讨血管钠肽(VNP)对脂肪因子脂联素生成的影响及其机制。方法在3T3-L1细胞分化的脂肪细胞中加入不同浓度的VNP,分别用实时定量PCR法和Western blot法检测脂联素的mRNA水平和蛋白表达,放免法测定细胞内cGMP的水平。结果 VNP可显著增加脂联素mRNA水平和蛋白表达,同时提高细胞内cGMP,含量为(38±5)～(265±35)nmol/L,显著高于对照组的(10±2)nmol/L(P<0.01);该效应可用8-Br-cGMP诱导,可被cGMP依赖性蛋白激酶抑制剂KT-5823或钠尿肽受体NPR阻断剂HS-142-1抑制。结论 VNP可通过NPR/cGMP/PKG信号通路增加脂肪细胞脂联素的表达。
- 铁茹邢文娟陈小丽金坚张海锋于军陈宝莹
- 关键词：血管钠肽钠尿肽脂肪因子脂联素
- 人GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：6
- 2008年
- 制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽。插入表达载体pPIC9K中α交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF。电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子。甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性。结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础。
- 徐钰孙钧铭张莲芬窦文芳李洁朱威朱书峰金坚
- 关键词：人粒细胞集落刺激因子人血清白蛋白融合蛋白毕赤酵母
- 提高重组毕赤酵母表达hIFNβ-HSA的碳源控制策略被引量：2
- 2007年
- 研究了重组毕赤酵母KM71/IH菌体生长阶段饥饿培养对其细胞相对活性及人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白(hIFNβ-HSA)表达的影响.结果表明,在以甘油为唯一碳源的细胞培养后期进行饥饿培养以耗尽培养基中的甘油会导致重组细胞相对活性的降低,进而减少hIFNβ-HSA的表达量.在此基础上,提出了菌体培养后期,即过渡阶段流加甘露醇碳源代替饥饿培养的策略,不仅可以消除培养液中甘油残留对甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的不利影响,而且能够保持重组细胞培养物较高的相对活性(>97%),从而可以提高甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的水平,表达量可达37.3mg/L,最大生产强度为0.78mg/(L-h),较对照分别提高了92.3%和44.4%
- 张宏斌窦文芳许泓瑜金坚李华钟许正宏
- 关键词：巴斯德毕赤酵母
